禾长蠕孢菌孢子的培养方法技术

禾长蠕孢菌孢子的培养方法，属于微生物技术领域。其包括以下步骤：１）接种体的制备；２）禾长蠕孢菌孢子生产培养基的制备；３）禾长蠕孢菌孢子的培养。上述的禾长蠕孢菌孢子的培养方法，设计合理，发明专利技术中涉及的生产培养基组成简单，成本低廉，涉及的孢子培养和生产方法简单易行，其孢子产量可以达到０．２１３±０．０１４５亿孢子／ｇ底物基质，使得禾长蠕孢菌孢子制剂的开发成为可能。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物
，具体涉及。
技术介绍
稗草是稻田恶性杂草，若不防除将严重影响水稻产量，目前主要通过化学除草剂 防除。化学除草剂虽然可以快速防除稻田稗草，但是，长期大量使用也带来很多负面影响， 如稗草抗药性生物型增加，局部地区农田和水环境被污染，对环境和生态安全以及农业可 持续发展构成潜在威胁等。微生物除草剂是利用生物活体或生物活性物质开发的生物制 剂，具有对环境无污染、无残留且不易使作物产生抗药性等优点，因而是化学除草剂很好补 充和替代品，受到各国科学家的普遍重视。禾长蠕孢菌是从自然感病稗草上分离得到杂草 生防潜力菌，对水稻、小麦、玉米、棉花和油菜等作物安全。禾长蠕孢菌孢子悬浮剂对稗草最 高防效可达到85. 2 %，对鸭舌草、野荸荠、陌上菜等其它杂草的防效也在80 %以上。因此 禾长螺孢菌有潜力开发成防除稗草的真菌除草剂，其孢子可作为真菌除草剂的主要活性成 分。目前，禾长蠕孢菌大面积推广应用的关键在于其孢子批量生产技术。因此，研制开 发成本低廉的培养基配方及简便易行的生产工艺是禾长蠕孢菌开发真菌除草剂的重要课 题。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于设计提供一种禾长蠕孢菌孢子的培 养方法的技术方案，该方法简单易行，成本低廉，且能大批量的得到禾长蠕孢菌孢子。所述的，其特征在于包括以下工艺步骤1)接种体的制备将4°C斜面保存的出发菌株禾长蠕孢菌转接到新鲜PDA培养基上，在27 29°C黑 暗条件下活化培养6 8天后，取直径为4. 5 6. 5mm的菌块，接种于PDB培养基中，在温 度27 29°C，转速100 250r/min条件下振荡培养2 4天，然后取8 12mL处于对数 生长期的菌悬液接种于IOOmL新鲜PDB中，在温度27 29°C，转速100 250r/min条件下 振荡培养2 4天后，备用；2)禾长蠕孢菌孢子生产培养基的制备以珍珠岩、稻壳或麦秸秆为底物基质，然后以底物基质体积为基准，加入占底物基 质体积3% 8% (w ν)的燕麦粉、米粉或小麦粉，0.5% 1.5% (w ν)的豆粕粉、大豆 蛋白粉或大豆粉，0. 1 0.2% (w v) &MgS04，0.1 0.2% (w ν)的 Na3PO4 和 30% 50% (w ν)的水分，混合均勻后121°C高压灭菌20min，冷却后备用；3)禾长蠕孢菌孢子的培养取步骤2)得到的禾长蠕孢菌孢子生产培养基，再在培养基中接种占培养基重量 6% 8%的步骤1)得到的禾长蠕孢菌菌丝体悬液接种体，然后在25 28°C、黑光灯或紫外灯12小时循环光照条件下培养7 14天，得到孢子物。所述的，其特征在于所述的步骤1)中出发菌株禾长 蠕孢菌转接到新鲜PDA培养基后，在28°C黑暗条件下活化培养7天。所述的，其特征在于所述的步骤1)中取直径为5. 5mm 的菌块，接种于PDB培养基中，在温度28°C，转速150r/min条件下振荡培养3天。所述的，其特征在于所述的步骤1)中取10mL处于对 数生长期的菌悬液接种于lOOmL新鲜PDB中，在温度28°C，转速150r/min条件下振荡培养 3天。所述的，其特征在于所述的步骤2)中以底物基质体 积为基准，加入占底物基质体积4% 7%的燕麦粉、米粉或小麦粉， 1. 5%的豆粕粉、 大豆蛋白粉或大豆粉，0. 15 0. 2%的MgS04，0. 15 0. 2%的Na3P04和35% 45%的水 分。所述的，其特征在于所述的步骤2)中麦秸秆为加工 至粉末状的麦秸秆。所述的，其特征在于所述的步骤2)中在培养基中接 种7%的禾长蠕孢菌菌丝体悬液接种体，然后在26 27°C、黑光灯或紫外灯12小时循环光 照条件下培养9 12天。上述的，设计合理，专利技术中涉及的生产培养基组成简 单，成本低廉，涉及的孢子培养和生产方法简单易行，其孢子产量可以达到0.213士0.0145 亿孢子/g底物基质，使得禾长蠕孢菌孢子制剂的开发成为可能。具体实施例方式以下结合实施例来进一步说明本专利技术。实施例11)接种体的制备将4°C斜面保存的出发菌株禾长蠕孢菌转接到新鲜PDA培养基上，在27°C黑暗 条件下活化培养8天后，取直径为6. 5mm的菌块，接种于PDB培养基中，在温度27 V，转速 100r/min条件下振荡培养2天，然后取8mL处于对数生长期的菌悬液接种于lOOmL新鲜PDB 中，在温度27°C，转速lOOr/min条件下振荡培养2天后，备用；2)禾长蠕孢菌孢子生产培养基的制备以珍珠岩为底物基质，添加珍珠岩体积4%的小麦粉、珍珠岩体积0. 5%的豆粕 粉、珍珠岩体积0. 1 %的MgS04、珍珠岩体积0. 2%的Na3P04和珍珠岩体积50%自来水；混合 均勻后培养基在121°C高温灭菌20min ；3)禾长蠕孢菌孢子的培养取步骤2)得到的禾长蠕孢菌孢子生产培养基，再在培养基中接种占培养基重量 6%的步骤1)得到的禾长蠕孢菌菌丝体悬液接种体，然后在25°C、黑光灯循环光照条件下 培养7天，得到孢子液，孢子液中孢子产量约为0. 187士0. 0152亿孢子/克底物基质。涉及的PDA培养基含有马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂15g/L。涉及的PDB培养基含有马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L。实施例21)接种体的制备将4°C斜面保存的出发菌株禾长蠕孢菌转接到新鲜PDA培养基上，在28°C黑暗 条件下活化培养7天后，取直径为5. 5mm的菌块，接种于PDB培养基中，在温度28°C，转速 150r/min条件下振荡培养3天，然后取IOmL处于对数生长期的菌悬液接种于IOOmL新鲜 PDB中，在温度28°C，转速150r/min条件下振荡培养3天后，备用；2)禾长蠕孢菌孢子生产培养基的制备以珍珠岩为底物基质，添加珍珠岩体积4%的米粉、珍珠岩体积1 %的豆粕粉、珍 珠岩体积0. 的MgSO4、珍珠岩体积0. 2%的Na3PO4和珍珠岩体积40%自来水；混合均勻 后培养基在121°C高温灭菌20min ；3)禾长蠕孢菌孢子的培养取步骤2)得到的禾长蠕孢菌孢子生产培养基，再在培养基中接种占培养基重量 8%的步骤1)得到的禾长蠕孢菌菌丝体悬液接种体，然后在26°C、黑光灯循环光照条件下 培养11天，得到孢子培养物，孢子培养物中孢子产量约为0. 213士0. 0145亿孢子/克底物基质。实施例31)接种体的制备将4°C斜面保存的出发菌株禾长蠕孢菌转接到新鲜PDA培养基上，在28°C黑暗 条件下活化培养7天后，取直径为5. 5mm的菌块，接种于PDB培养基中，在温度28°C，转速 150r/min条件下振荡培养3天，然后取IOmL处于对数生长期的菌悬液接种于IOOmL新鲜 PDB中，在温度28°C，转速150r/min条件下振荡培养3天后，备用；2)禾长蠕孢菌孢子生产培养基的制备以粉末状麦秸秆为底物基质，添加麦秸秆体积6%的燕麦粉、麦秸秆体积0. 5%的 大豆蛋白粉、麦秸秆体积0. 2%的MgSO4、麦秸秆体积0. 的Na3PO4和麦秸秆体积30%自 来水；混合均勻后培养基在121°C高温灭菌20min ；3)禾长蠕孢菌孢子的培养取步骤2)得到的禾长蠕孢菌孢子生产培养基，再在培养基中接种占培养基本文档来自技高网...

【技术保护点】
禾长蠕孢菌孢子的培养方法，其特征在于包括以下工艺步骤：　　１）接种体的制备　　将４℃斜面保存的出发菌株禾长蠕孢菌转接到新鲜ＰＤＡ培养基上，在２７～２９℃黑暗条件下活化培养６～８天后，取直径为４．５～６．５ｍｍ的菌块，接种于ＰＤＢ培养基中，在温度２７～２９℃，转速１００～２５０ｒ／ｍｉｎ条件下振荡培养２～４天，然后取８～１２ｍＬ处于对数生长期的菌悬液接种于１００ｍＬ新鲜ＰＤＢ中，在温度２７～２９℃，转速１００～２５０ｒ／ｍｉｎ条件下振荡培养２～４天后，备用；　　２）禾长蠕孢菌孢子生产培养基的制备　　以珍珠岩、稻壳或麦秸秆为底物基质，然后以底物基质体积为基准，加入占底物基质体积３％～８％的燕麦粉、米粉或小麦粉，０．５％～１．５％的豆粕粉、大豆蛋白粉或大豆粉，０．１～０．２％的ＭｇＳＯ↓［４］，０．１～０．２％的Ｎａ↓［３］ＰＯ↓［４］和３０％～５０％的水分，混合均匀后１２１℃高压灭菌２０ｍｉｎ，冷却后备用；　　３）禾长蠕孢菌孢子的培养　　取步骤２）得到的禾长蠕孢菌孢子生产培养基，再在培养基中接种占培养基重量６％～８％的步骤１）得到的禾长蠕孢菌菌丝体悬液接种体，然后在２５～２８℃、黑光灯或紫外灯１２小时循环光照条件下培养７～１４天，得到孢子物。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：段桂芳，杨爽，张建萍，余柳青，
申请(专利权)人：中国水稻研究所，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]