System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 油脂脱臭馏出物中多环芳烃生物降解方法技术_技高网

油脂脱臭馏出物中多环芳烃生物降解方法技术

技术编号:40291895 阅读:6 留言:0更新日期:2024-02-07 20:42
一种油脂脱臭馏出物中多环芳烃生物降解方法,通过将PdoAB‑15b质粒和pBRCD质粒共转化于大肠杆菌BL21(DE3)后,接种至在补充有氨苄青霉素和庆大霉素的LB培养基中进行培养,再进一步加入异丙基β‑d‑1‑硫代半乳糖苷(IPTG)诱导并过夜培养后得到双加氧酶基因过表达的大肠杆菌BL21(DE3),将该工程菌加入含有PAHs的脱臭馏出物中,经培养后实现对PAHs降解。本发明专利技术能够实现多个苯环的PAHs,尤其是HPAHs的降解;显著提高脱臭馏出物中多环芳烃的生物降解率且成本低廉,制备简便。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及的是一种生物工程领域的技术,具体是一种油脂脱臭馏出物(odd)中多环芳烃(pahs)生物降解方法。


技术介绍

1、脱臭馏出物(odd)是天然生育酚的主要来源。目前,多种多环芳烃(pahs)被国际癌症研究署(iarc)归为可能的致癌物。因pahs本身的亲脂性,容易在odd中大量积累;且在odd的下游产品中,也有着较高的pahs污染水平。在pahs的不同脱除方法中,物理吸附并未减少pahs的毒性风险。相较下,生物降解可有效解决该问题,但目前发现单一菌株对于pahs的降解有限,尤其是重质pahs(hpahs)。


技术实现思路

1、本专利技术针对现有技术无法保留天然生育酚成分、无法降解多个苯环的pahs的不足,提出一种油脂脱臭馏出物中多环芳烃生物降解方法,采用双加氧酶基因过表达的大肠杆菌bl21(de3)实现pahs的降解,尤其是hpahs;显著提高脱臭馏出物中多环芳烃的生物降解率且成本低廉,制备简便。

2、本专利技术是通过以下技术方案实现的:

3、本专利技术涉及一种油脂脱臭馏出物中多环芳烃生物降解方法,通过将双加氧酶基因过表达的大肠杆菌bl21(de3)加入含有pahs的脱臭馏出物中,经培养后实现对pahs降解。

4、所述的双加氧酶基因过表达的大肠杆菌bl21(de3),通过将pdoab-15b质粒和pbrcd质粒共转化于大肠杆菌bl21(de3)后,接种至在补充有氨苄青霉素和庆大霉素的lb培养基中进行培养,再进一步加入异丙基β-d-1-硫代半乳糖苷(iptg)诱导并过夜培养后得到。

5、所述的pdoab-15b质粒,通过设计引物对分枝杆菌mycobacterium sp.njs-p中的双加氧酶基因进行pcr扩增,检测目标基因是否存在;再设计引物并用高保真酶primerstarhs(takara)进行pcr从霉菌的基因组dna中获得pdoab基因,纯化并测序,得到pdoab;用peasy-t1 simple cloning kit(transgen)进行ta克隆;进一步设计引物并引入ncoi和bamhi酶切位点,用高保真酶从ta克隆中扩增。用同样的限制性酶处理,与pet15b表达载体进行连接,构建得到双加氧酶表达载体pdoab-15b质粒。

6、所述的分枝杆菌mycobacterium sp.njs-p,具体通过公开渠道(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/ab626849?report=genbank)得到。

7、所述的pbrcd质粒,其采用但不限于identification of pyrene-inducedproteins in mycobacterium sp.strain 6py1:evidence for two ring-hydroxylatingdioxygenases中记载的技术实现。

8、所述的培养,优选在37℃环境下进行。

9、所述的培养,经37℃得到的培养物在600nm处的吸光度达到0.6。

10、所述的过夜培养,优选在30℃环境下进行。

11、所述的过夜培养,进一步优选将培养得到的产物离心分离得到细胞,洗涤并重悬于补充有氨苄青霉素和庆大霉素的m9-葡萄糖培养基中保存。

12、所述的双加氧酶基因过表达的大肠杆菌bl21(de3),其用量为每100ml含有pahs的脱臭馏出物中加入大肠杆菌溶液的浓度为1×105cfu/ml。

13、技术效果

14、本专利技术通过诱导实现odd中pahs的生物降解,通过podab、pbrcd共表达的大肠杆菌,能有效脱除odd中的pahs,对odd中pahs的脱除率达42.88%–59.28%,对odd中天然生育酚的保留率在90%以上。有利于odd在高值化利用的同时,降低对人体的危害。

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【技术保护点】

1.一种油脂脱臭馏出物中多环芳烃生物降解方法,其特征在于,通过将双加氧酶基因过表达的大肠杆菌BL21(DE3)加入含有PAHs的脱臭馏出物中,经培养后实现对PAHs降解;

2.根据权利要求1所述的油脂脱臭馏出物中多环芳烃生物降解方法,其特征是,所述的PdoAB-15b质粒,通过设计引物对分枝杆菌Mycobacterium sp.NJS-P中的双加氧酶基因进行PCR扩增,检测目标基因是否存在;再设计引物并用高保真酶PrimerSTAR HS(Takara)进行PCR从霉菌的基因组DNA中获得pdoAB基因,纯化并测序,得到pdoAB;用pEASY-T1SimpleCloning Kit(Transgen)进行TA克隆;进一步设计引物并引入NcoI和BamHI酶切位点,用高保真酶从TA克隆中扩增,用同样的限制性酶处理,与pET15b表达载体进行连接,构建得到双加氧酶表达载体PdoAB-15b质粒。

3.根据权利要求1所述的油脂脱臭馏出物中多环芳烃生物降解方法,其特征是,所述的培养,在37℃环境下进行。

4.根据权利要求1所述的油脂脱臭馏出物中多环芳烃生物降解方法,其特征是,所述的培养,经37℃得到的培养物在600nm处的吸光度达到0.6。

5.根据权利要求1所述的油脂脱臭馏出物中多环芳烃生物降解方法,其特征是,所述的过夜培养,在30℃环境下进行。

6.根据权利要求1所述的油脂脱臭馏出物中多环芳烃生物降解方法,其特征是,所述的过夜培养,将培养得到的产物离心分离得到细胞,洗涤并重悬于补充有氨苄青霉素和庆大霉素的M9-葡萄糖培养基中保存。

7.根据权利要求1-6中任一所述的油脂脱臭馏出物中多环芳烃生物降解方法,其特征是,所述的双加氧酶基因过表达的大肠杆菌BL21(DE3),具体通过以下方式得到:在含有氨苄青霉素和庆大霉素的LB培养基中接种菌落;当培养物的吸光度在600nm下达到0.6时,添加0.5mM IPTG(异丙基β-d-1-硫代吡喃半乳糖苷)进行诱导,并在30℃下进一步培养过夜,随后通过离心收获细胞,洗涤并重悬于补充有氨苄青霉素和庆大霉素的100mL M9葡萄糖培养基中,再将25mL细胞液与含有PAHs的5mL脱臭馏出物样品在30℃下培养48小时。

8.根据权利要求1所述的油脂脱臭馏出物中多环芳烃生物降解方法,其特征是,所述的双加氧酶基因过表达的大肠杆菌BL21(DE3),其用量为每100mL含有PAHs的脱臭馏出物中加入大肠杆菌溶液的浓度为1×105CFU/mL。

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【技术特征摘要】

1.一种油脂脱臭馏出物中多环芳烃生物降解方法,其特征在于,通过将双加氧酶基因过表达的大肠杆菌bl21(de3)加入含有pahs的脱臭馏出物中,经培养后实现对pahs降解;

2.根据权利要求1所述的油脂脱臭馏出物中多环芳烃生物降解方法,其特征是,所述的pdoab-15b质粒,通过设计引物对分枝杆菌mycobacterium sp.njs-p中的双加氧酶基因进行pcr扩增,检测目标基因是否存在;再设计引物并用高保真酶primerstar hs(takara)进行pcr从霉菌的基因组dna中获得pdoab基因,纯化并测序,得到pdoab;用peasy-t1simplecloning kit(transgen)进行ta克隆;进一步设计引物并引入ncoi和bamhi酶切位点,用高保真酶从ta克隆中扩增,用同样的限制性酶处理,与pet15b表达载体进行连接,构建得到双加氧酶表达载体pdoab-15b质粒。

3.根据权利要求1所述的油脂脱臭馏出物中多环芳烃生物降解方法,其特征是,所述的培养,在37℃环境下进行。

4.根据权利要求1所述的油脂脱臭馏出物中多环芳烃生物降解方法,其特征是,所述的培养,经37℃得到的培养物在600nm处的吸光度达到0.6。

【专利技术属性】
技术研发人员:吴时敏龚光仪牟柏林
申请(专利权)人:上海交通大学
类型:发明
国别省市:

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