【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及新城疫病毒强毒核酸，更具体地说，涉及一种基于rt-rpa和crispr-cas13a的针对新城疫病毒强毒核酸检测系统及rpa引物对和crrna。
技术介绍
1、新城疫病毒(newcastle disease virus，ndv)，可感染240多种禽类，被感染的家禽和野鸟自身及其接触物是主要的传染源，其强毒株可致感染禽类死亡率95％。世界动物卫生组织要求，对于ndv强毒，应进行明确诊断。
2、目前ndv的检测手段主要是基于其f基因的rt-pcr和rt-qpcr等分子生物学检测，然而这些都高度依赖于精密仪器，不适用于野外检测和现场快速检测。因此，建立一种灵敏、特异、易用、快速、无需大型设备，适合基层和野外使用的快速灵敏的分子生物学检测方法，对于新城疫的防控工作具有重大意义。
技术实现思路
1、为了获得可在基层和野外使用的快速灵敏的ndv强毒核酸检测系统，本专利技术提供一种特异性强、灵敏度高、可适用于现场快速检测的基于rt-rpa和crispr-cas13a的ndv强毒核酸检测系统及rpa引物对和crrna。
2、第一方面，本专利技术提供一种基于rt-rpa的crispr-cas13a的检测系统检测ndv强毒核酸的rpa引物对，采用如下的技术方案：
3、采用基于rt-rpa的crispr-cas13a的检测系统检测ndv强毒核酸的rpa引物对，所述的rpa引物对为rpaf和rpar组成的引物对；
4、由rpaf和rpar组成的
5、rpaf的核苷酸序列为：
6、5’-taatacgactcactatagggtayacctcrtcccagacagggwcaattatcat-3’；
7、rpar的核苷酸序列为：
8、5’-tctccttaagtcggaggatgttggcwgcatt-3’。
9、第二方面，本专利技术提供一种基于rt-rpa的crispr-cas13a的检测系统检测ndv强毒核酸的crrna，采用如下的技术方案：
10、采用基于rt-rpa的crispr-cas13a的检测系统检测ndv强毒核酸的crrna，所述crrna为crrna1、crrna2中的任意一种；
11、所述的crrna1的核苷酸序列为：
12、5’-ggcuauuaccguggauauuuguuuuaguccccuucguuuuugggguagucuaaauc-3’；
13、所述的crrna2的核苷酸序列为：
14、5’-ggcuauugccguggauacuuguuuuaguccccuucguuuuugggguagucuaaauc-3’。
15、第三方面，本专利技术提供一种基于rt-rpa的crispr-cas13a的ndv强毒核酸检测试剂盒，含有上述rpa引物对和crrna。
16、进一步地，在上述ndv强毒核酸检测试剂盒中，还含有rt-rpa反应启动剂、rt-rpa反应缓冲液、rt-rpa反应冻干粉、ntp buffer mix、t7 rnapolymerase mix、5×cas13a反应缓冲液和depc水、lwcas13a蛋白、rnase inhibitor、ssrna荧光探针。
17、综上所述，本专利技术具有以下有益效果：
18、(1)本专利技术基于rt-rpa的crispr-cas13a检测系统，实现了对ndv强毒核酸的快速检测，构建的方法具有良好的特异性和高灵敏度，最低检测限为1.4×102copies。
19、(2)利用本专利技术可检测我国流行的所有ndv强毒基因型(vi、vii、ix、xii)。较其他检测方法具有操作简单、特应性好、反应灵敏等特点。
20、(3)本专利技术检测反应于37℃恒温进行，40min内通过便携紫外灯即可直接观察检测结果，可用于现场快速检测。
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1.新城疫病毒强毒核酸CRISPR-Cas13a检测系统及RPA引物对和crRNA，其特征在于，所述RT-RPA等温扩增体系包括针对新城疫病毒强毒F基因的特异性等温扩增引物RPAF和RPAR；其中：
2.权利要求1所述的新城疫病毒强毒核酸CRISPR-Cas13a检测系统及RPA引物对和crRNA在制备检测新城疫病毒强毒核酸试剂中的应用。
3.一种基于RT-RPA和CRISPR-Cas13a的新城疫病毒强毒核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的RPA引物对和crRNA、Cas13a蛋白、RT-RPA反应启动剂、RT-RPA反应缓冲液、RT-RPA反应冻干粉、NTP Buffer Mix、T7 RNAPolymerase Mix、5×Cas13a反应缓冲液和DEPC水、LwCas13a蛋白、Rnase inhibitor和ssRNA荧光探针。
【技术特征摘要】
1.新城疫病毒强毒核酸crispr-cas13a检测系统及rpa引物对和crrna，其特征在于，所述rt-rpa等温扩增体系包括针对新城疫病毒强毒f基因的特异性等温扩增引物rpaf和rpar；其中：
2.权利要求1所述的新城疫病毒强毒核酸crispr-cas13a检测系统及rpa引物对和crrna在制备检测新城疫病毒强毒核酸试剂中的应用。
3.一种基于rt-rpa和cri...
【专利技术属性】
技术研发人员：尹仁福，刘新鑫，姜姗姗，王梦君，闫巍文，李虹瑾，林贤文，王萌，丁壮，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：
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