【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学，具体地，涉及一种靶向抑制细胞分裂蛋白奉献因子6(dock6)基因的小干扰rna与四面体框架核酸复合物及其在制备预防和/或治疗眼部新生血管性疾病药物中的应用。
技术介绍
1、眼底新生血管是众多眼底疾病的共同病理过程，一般发生于缺血缺氧的视网膜脉络膜组织，常见于糖尿病性视网膜病变(pdr)、湿性老年相关性黄斑变性(amd)、早产儿视网膜病变(rop)、脉络膜新生血管(cnv)、视网膜中央/分支静脉阻塞(rvo)、高度近视视网膜病变、中心性浆液性视网膜病变等。有数据显示眼底新生血管性疾病患者人数在4000万以上，且随着人口老龄化程度加重，患者人数还在不断上升。该病患者视力普遍低下，严重影响患者的生活质量，造成巨大的家庭及社会经济负担。
2、在多种视网膜血管性疾病中，如血管壁的损害、血流阻滞、血管发育不全等不同因素均可引起的视网膜缺血缺氧，刺激血管内皮生长因子(vegf)等血管生成因子的产生，导致异常的病理性血管形成，我们称之为“新生血管”。与发育过程中生理性血管不同，眼底新生血管的结构异常，包括血管壁结构薄弱，通透性高等；这些异常可导致新生血管发生渗漏、出血、组织水肿等一系列改变，最终严重影响视力。当前的治疗方法主要是通过经常性地眼内注射vegf抑制剂来控制病情，但这种方法只是临时性地缓解问题，不能从根本上解决视网膜缺血缺氧的问题。
3、近期研究发现dna纳米结构具有广泛的生物学功能，其已被开发及应用于生命科学各种领域。四面体框架核酸(tetrahedral dna nanostruct
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供一种靶向dock6的sirna与四面体框架核酸复合物。
2、本专利技术的第二个目的在于提供所述复合物的制备方法。
3、本专利技术的第三个目的在于提供上述复合物在制备预防和/或治疗眼部新生血管性疾病的药物中的应用。
4、本专利技术的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：
5、一种靶向dock6的sirna与四面体框架核酸复合物，包括四面体框架核酸(tdns)及其搭载的靶向dock6的sirna(sidock6)；所述靶向dock6的sirna包括正义链和反义链，其核苷酸序列依次如seq id no.1～2所示。
6、dock6(dedicator of cytokinesis 6)属于细胞有丝分裂奉献因子家族一员，能够催化小gtp酶的gdp与gtp之间的交换，促进小gtp酶激活。dock6主要与rac1和cdc42两种小gtp酶有关，这两者在细胞迁移、细胞黏附和细胞极性等过程中发挥重要作用。申请人团队发现在一些病理性新生血管组织中，如pdr的血管膜、脉络膜新生血管膜等，dock6的表达明显增加。本专利技术提供的由tdns和针对dock6的sirna构建的复合物(tdns+sidock6)能有效抑制dock6的表达，从而减少血管内皮细胞的增殖和管腔生成，能在体内抑制眼部异常新生血管生成，改善视网膜无灌注区面积，可用于预防和/或治疗眼部新生血管性疾病。
7、优选地，所述四面体框架核酸的四条dna单链的核苷酸序列分别如seq id no.3～6所示。
8、本专利技术还提供所述复合物的制备方法，是将四面体框架核酸中的一条单链与靶向dock6的sirna的正义链连接，再将连接后的序列与四面体框架核酸剩余的三条单链加入到tm缓冲液中，93～97℃维持8～12min，快速降温到3～5℃维持18～22min，即得。
9、优选地，是将反应液加热到95℃维持10min，然后快速降温到4℃维持20min合成。
10、本专利技术提供的tdns+sidock6复合物具有明显的抑制血管内皮生长的能力；通过在培养液中加入该复合物的实验组与对照组相比，该复合物可有效的抑制缺氧状态下血管内皮细胞的增殖能力与成管能力。通过动物实验可知，玻璃体腔注射该复合物的实验组与对照组相比，该复合物组更加有效的抑制了视网膜新生血管的生成，改善视网膜无灌注区面积，因此可利用本专利技术的tdns+sidock6复合物来抑制眼部病理性新生血管生成，从而可起到预防和/或治疗眼部新生血管性疾病的作用。
11、因此，本专利技术还提供上述任一所述tdns+sidock6复合物在制备抑制眼部病理性新生血管生成的药物中的应用。
12、本专利技术还提供上述任一所述tdns+sidock6复合物在制备预防和/或治疗眼部新生血管性疾病的药物中的应用。
13、进一步地，所述眼部新生血管性疾病包括但不限于视网膜新生血管相关疾病、角膜新生血管相关疾病、虹膜新生血管相关疾病或脉络膜新生血管相关疾病中的一种或多种。
14、进一步地，所述视网膜新生血管相关疾病包括但不限于为pdr、rop、rvo、amd。病理性视网膜新生血管在所有年龄段的常见和严重视网膜疾病中均可见。目前，对晚期rop、pdr或rvo患者进行视网膜光凝治疗，或使用抗vegf治疗以抑制新生血管。由于激光导致视网膜组织丢失，视网膜光凝可导致视力下降、夜间视力下降和持续视野狭窄等并发症。抗vegf治疗临床上已用于治疗rop、dr和rvo患者，但存在潜在的缺陷。首先，与阻断血管内皮生长因子信号有关的不良反应，包括对正常视网膜血管生长和视网膜功能的损害。其次，由于持续的缺血/无灌注状态，在玻璃体内注射抗vegf抗体后，病理性新生血管的复发在早产儿或糖尿病患者中很常见。
15、进一步地，所述药物的制剂可以是任何适于眼部局部施用的剂型，包括但不限于注射剂、滴眼剂、脂质体或气雾剂中的一种或多种。
16、作为本专利技术所述应用的优选实施方式，在细胞给药时，tdns+sidock6复合物优选剂量为100nm。在动物给药时，tdns+sidock6复合物优选剂量为1μm1μl，。
17、本专利技术还提供一种预防和/或治疗眼部新生血管性疾病的药物，所述药物包括上述任一所述tdns+sidock6复合物。
18、进一步地，所述药物还包括药学上可接受的辅料。
19、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
20、本专利技术提供了一种靶向细胞分裂蛋白奉献因子6(dock6)基因，高效入胞、性质稳定、抑制dock6 mrna翻译过程的sirna与本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种靶向DOCK6的siRNA与四面体框架核酸复合物，其特征在于，包括四面体框架核酸及搭载的靶向DOCK6的siRNA；所述靶向DOCK6的siRNA包括正义链和反义链，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～2所示。
2.根据权利要求1所述复合物，其特征在于，所述四面体框架核酸的四条DNA单链的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3～6所示。
3.权利要求1或2所述复合物的制备方法，其特征在于，将四面体框架核酸中的一条单链与靶向DOCK6的siRNA的正义链连接，再将连接后的序列与四面体框架核酸剩余的三条单链加入到TM缓冲液中，93～97℃维持8～12min，快速降温到3～5℃维持18～22min，即得。
4.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，是将反应液加热到95℃维持10min，然后快速降温到4℃维持20min合成。
5.权利要求1或2所述复合物在制备预防和/或治疗眼部新生血管性疾病的药物中的应用。
6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述眼部新生血管性疾病包括视网膜新生血管相关疾病、角膜新生血管相关
7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述视网膜新生血管相关疾病包括糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、视网膜静脉阻塞、视网膜静脉周围炎或年龄相关性黄斑变性中的一种或多种。
8.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述药物制剂为注射剂、滴眼剂、脂质体或气雾剂中的一种或多种。
9.一种预防和/或治疗眼部新生血管性疾病的药物，其特征在于，包括权利要求1或2所述复合物。
10.根据权利要求9所述药物，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的辅料。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向dock6的sirna与四面体框架核酸复合物，其特征在于，包括四面体框架核酸及搭载的靶向dock6的sirna；所述靶向dock6的sirna包括正义链和反义链，其核苷酸序列依次如seq id no.1～2所示。
2.根据权利要求1所述复合物，其特征在于，所述四面体框架核酸的四条dna单链的核苷酸序列分别如seq id no.3～6所示。
3.权利要求1或2所述复合物的制备方法，其特征在于，将四面体框架核酸中的一条单链与靶向dock6的sirna的正义链连接，再将连接后的序列与四面体框架核酸剩余的三条单链加入到tm缓冲液中，93～97℃维持8～12min，快速降温到3～5℃维持18～22min，即得。
4.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，是将反应液加热到95℃维持10min，然后快速降温到4℃维持20min合成。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁小燕，王友，
申请(专利权)人：中山大学中山眼科中心，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。