丹参丹酚酸A的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种丹参丹酚酸Ａ的制备方法。将丹参药材用水或醇提取。初步除去固体杂质，柱色谱纯化丹酚酸Ａ，浓缩洗脱液，再经调ｐＨ值有机溶剂萃取，浓缩干燥，即得丹酚酸Ａ。用本发明专利技术方法制备丹酚酸Ａ提取率高，纯度好，提取物中丹酚酸Ａ含量可达９０％以上，且质量稳定，可大规模生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种丹参丹酚酸A的制备方法，丹酚酸A的结构如下 技术背景丹参是最常用的药材之一，用于治疗心绞痛、高血压、冠心病和中风等心脑血管疾病。但一般用的都是从丹参中提取的粗提物或直接用丹参饮片。近二十多年，丹参的主要活性成分丹酚酸类化合物陆续被发现。体外实验结果显示，丹酚酸类化合物除了用于治疗心脑血管疾病，还可治疗多种疾病，如肝病、肾病、消化溃疡、肿瘤等。丹参总酚酸中以丹酚酸B含量最高，因此，人们开发的重点集中于丹酚酸B，而含量较低而活性较强的丹酚酸A被人们忽略。杜冠华等人对丹酚酸A的活性进行了大量研究，发现丹酚酸A对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤有明显的保护作用，对小鼠脑缺血再灌注引起的脑损伤有保护作用，对樟柳碱或东莨菪碱引起的小鼠记忆获得障碍具有明显的改善作用，对大鼠半乳糖性白内障形成有抑制作用，因此在心脑血管方向有良好的疗效。中国专利CN1397276A，2003年公开了水或醇提、树脂层析，再经硅胶柱层析的纯化制备丹酚酸A的方法。中国专利CN1513848A，2004年公开了采用水温浸、离心、超滤、调酸、有机溶剂萃取再经反相柱层析制备丹酚酸A的方法。由于丹酚酸A在药材中含量低，甚至没有，因此丹酚酸A产率低，生产成本高，在工业大生产上有一定的局限性，实际上并不能从根本上解决丹酚酸A的工业生产问题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术存在的缺陷，提供一种丹酚酸A的制备方法。本专利技术丹参丹酚酸A的制备方法，其工艺步骤为1、提取在水或乙醇水溶液作为提取溶剂时，温浸温度为50～99℃，采用乙醇水溶液作为提取溶剂时浓度为10％～95％。提取的方法可以采用回流法、温浸法。现以乙醇回流提取的方法为例进行说明。丹参粗粉，加10倍量60％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，滤过。合并提取液，采用过滤，自然沉淀或离心的方法，初步除去提取液中固体杂质。2、柱层析纯化丹酚酸A(1)采用特选填料制备色谱柱；(2)色谱柱活化；(3)溶液经色谱柱吸附，用水、稀醇水溶液或丙酮-水溶液洗脱，除去杂质；(4)用适当浓度的醇水溶液或丙酮-水溶液或乙腈-水溶液洗脱，减压或常压浓缩至洗脱液无有机溶剂在上述步骤(1)中，特选填料是大孔树脂类、离子交换树脂、MCI-GELCHP-20P、Sephadex LH-20凝胶、或C18、C8键合相等色谱柱填料，推荐方案为用非极性或弱极性的大孔树脂做色谱柱填料，优选为聚苯乙烯骨架大孔树脂。上述步骤(2)中色谱柱活化的方法可用丙酮、甲醇、乙腈或其他有机溶剂与水的混合物，也可用碱-水溶液，或碱醇溶液活化。上述步骤(3)中，洗脱用水可含微量的酸或无机盐。上述步骤(3)中，可以单用水洗脱杂质或单用稀醇水溶液或低浓度的丙酮-水溶剂洗脱杂质，也可先用水洗脱然后再用稀醇水溶液或低浓度的丙酮-水溶液洗脱杂质。上述步骤(3)中，稀醇水溶液等溶剂可以为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等醇的水溶液，也可采用乙腈的水溶液，或它们的混合物。上述步骤(3)中，稀醇水溶液等溶剂的浓度一般在40％以下，最好用20-30％的浓度，低浓度的丙酮-水溶液常用的丙酮含量一般在50％以下，最好为10-30％的浓度。上述步骤(4)中，适当浓度的丙酮-水、醇水溶液或乙腈-水溶液中，有机相所占比例一般大于20％，最好用35％～60％的浓度。所述醇水溶液等溶剂可以为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等醇的水溶液，或它们的混合物。3、调PH值有机溶剂萃取将如上溶液用酸或碱调PH值至2～7，经有机溶剂萃取，然后分离有机溶剂得含高含量丹酚酸A溶液。优选PH值范围为3～5。有机溶剂优选为乙酸酯类，可以是乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯等乙酸酯类溶剂，或它们的混合物。4、干燥萃取液的干燥可采用一步法，也可采用两步法。两步法为先在常压或减压条件下浓缩，然后采用真空干燥或冷冻干燥等方法干燥。一步法采用减压浓缩干燥得到丹酚酸A成品。本专利技术丹参丹酚酸A的制备方法，用水或醇提取，主要是把丹参酚酸类化合物提取完全，是丹酚酸A产率提高的基础。柱层析时由于在洗脱去杂质的过程采用水和低浓度醇溶剂，使提取液中的杂质得到进一步除去。在丹酚酸A的洗脱过程中，由于采用适当浓度的有机溶剂-水溶液，使丹酚酸A与其它成分得到较好分离；经过柱层析后，还有少量杂质存在，经过调节PH值有机溶剂萃取，最终制得了纯度较高的丹酚酸A。最终提取物得量达3‰以上，丹酚酸A含量达到90％以上，且质量稳定、工艺成熟、可以大规模生产。与其它丹酚酸A的制备方法相比，产率大大提高，成本降低。对于提高丹参疗效，充分利用中药材资源等具有很重要的意义。具体实施例下面结合具体实施例，对本专利技术及一步详细说明实施例一丹酚酸A的制备方法，其工艺步骤为1、水提取(温浸法)丹参粗粉，加8倍量水80℃温浸3次，每次1.0小时，滤过。2、柱层析纯化丹酚酸A合并滤液离心(4000转/分钟)10分钟，取上清液过1400大孔吸附树脂柱，先用水洗至糖检测反应为阴性，改用20％乙醇洗脱至FeCl3反应为阴性。3、再用40％乙醇洗脱至FeCl3反应为阴性，收集洗脱液，60℃减压浓缩至无醇味。4、调PH值，有机溶剂萃取加盐酸调节PH值至3～5，用药液1.5倍量体积的乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯相。5、浓缩干燥减压浓缩萃取液至浸膏状，60℃真空干燥6小时，得淡黄色粉末，即为丹参丹酚酸A。实施例二与实施例一基本相同，所不同的是提取过程为60％乙醇水溶液回流提取。具体方法如下丹参粗粉，加10倍量60％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，滤过。实施例三与实施例一基本相同，所不同的是提取液离心后采用过滤初步除去固体杂质。实施例四与实施例一基本相同，所不同的是实施例一中的工艺步骤2中，直接用10％乙醇水溶液洗脱，除去杂质。实施例五与实施例一基本相同，所不同的是实施例一中的工艺步骤3中，用80％乙醇水溶液洗脱丹酚酸A。实施例六与实施例一基本相同，所不同的是浓缩洗脱液时采用常压浓缩。实施例七与实施例一基本相同，所不同的是调PH值有机溶剂萃取时调PH值至2～3。实施例八与实施例一基本相同，所不同的是调PH值有机溶剂萃取时采用的有机溶剂为乙酸丁酯。实施例九与实施例一基本相同，所不同的是浓缩干燥采用一步法直接减压浓缩干燥得到丹酚酸A成品。实施例十与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用的是甲醇水溶液。实施例十一与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用的是丙酮-水溶液。实施例十二与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用的是乙腈水溶液。实施例十三与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用的MCI-GEL CHP-20P作色谱柱填料。实施例十四与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用C18键合相作色谱柱填料。实施例十五与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用的C8键合相作色谱柱填料。实施例十六与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用的Sephadex LH-20作色谱柱填料。本专利技术所要求保护的具体技术方案，不限于上述实施例(具体试验结果见下页附表1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种丹参丹酚酸Ａ的制备方法，其工艺步骤为：步骤一、提取提取为将丹参饮片或粉碎的丹参采用水或浓度１０－９５％的乙醇作为提取溶剂，采用温浸、回流法提取，采用过滤、自然沉淀或离心方法初步除去固体杂质。步骤二、柱层析纯化丹酚 酸Ａ（１）采用填料制备色谱柱；（２）色谱柱活化；（３）溶液经色谱柱吸附，用水、４０％以下浓度的稀醇水溶液或５０％以下浓度的丙酮水溶液洗脱，除去杂质。（４）再用有机相占比例大于２０％的醇水溶液或丙酮－水溶液或乙 腈－水溶液洗脱，减压或常压浓缩至洗脱液无有机溶剂。步骤三、调ＰＨ值有机溶剂萃取将如上溶液用酸或碱调ＰＨ值至２～７，经有机溶剂萃取，然后分离有机溶剂得高含量丹酚酸Ａ溶液。步骤四、浓缩干燥。浓缩采用减压浓缩或常压浓缩，干 燥采用真空干燥或冷冻干燥。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：黎豫杭，柴建国，张善飞，潘迎锋，张建兵，
申请(专利权)人：正大青春宝药业有限公司，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]