【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及缺萼枫香树不同组织荧光定量的内参基因及其引物和应用。
技术介绍
1、枫香属(liquidambar)属于金缕梅科(hamamelidaceae)，属内4种2变种，分别为枫香树(liquidambar formosana hance)、缺萼枫香树(liquidambar aclycina chang)、北美枫香(liquidambar styraciflua l.)、苏合香(liquidambar orientalis mill.)。“枫香”一词主要指枫香属中的枫香树和缺萼枫香树，缺萼枫香树与枫香树植株外观差异相对不明显，主要差异在于生态分布区有明显界限以及种球是否缺萼。枫香树雌花和蒴果具针刺状萼齿，为我国特有乡土树种，是南方地区的重要造林树种与景观树种，喜温暖湿润气候，性喜光，耐干旱瘠薄，主要产于中国秦岭及淮河以南各省，东南亚亚热带地区常见分布。缺萼枫香主要分布于中国长江以南省区，与枫香树的主要区别在于种球缺萼，且主要生长于海拔600米以上的山地和常绿树混交。
2、我国是“枫香”分布的主要区域，成年大树以实生繁殖为主，各器官变异较大，给“枫香”选育提供了坚实的基础。近年来，在城市“绿化”、“香化”的基础上，为建设美丽中国，人们开始重视城市园林的“彩化”景观效果，彩叶植物的种类和数量在园林中的需求逐渐增大，如美国红枫、日本红枫、金叶银杏、乌柏、枫香、金叶榆、彩叶杞柳等。迄今，国外已有200多年的彩叶植物引种栽培史，彩叶植物种类达2000多种。我国作为世界“园林之母”，树种资源丰富，
3、“枫香”因叶色丰富而备受推崇，新品种选育工作主要聚焦于叶色变异，叶片呈紫色与红色的新品种居多。但是，目前对缺萼枫香树的研究大多集中在资源分布调查及良种选育，群体遗传与进化以及生态监测等方面，而对缺萼枫香树叶色变化的研究也多数只与其表型进行关联，对叶色及其分子机理的研究依然较少。随着枫香树高质量参考基因组测序工作的完成，为枫香树和缺萼枫香树后续的群体基因组研究提供了一套完整的参考基因组及大量基因资源，极大地促进了“枫香”的分子生物学和遗传育种研究。适用于枫香树不同组织基因功能验证的内参基因已经开发完成，但目前还没有适用于缺萼枫香树叶色变异相关研究的内参基因，也没有适用于不同组织基因功能验证相关研究的内参基因，常用的内参基因在不同的植物及实验条件下会表现不稳定的性状，从而影响目的基因检测的准确性，因此，筛选在缺萼枫香树不同组织稳定表达的内参基因是实时荧光定量结果准确的关键因素。
技术实现思路
1、针对现有技术中存在的不足，本专利技术目的在于提供适用于缺萼枫香树不同组织荧光定量内参基因liaα-tub1基因和/或liaubq基因，该基因能够满足实时荧光定量检测缺萼枫香树不同组织转录表达水平的要求，提高了缺萼枫香树不同组织基因表达分析研究的稳定性和可靠性。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案如下：
3、第一方面，本专利技术提供了缺萼枫香树不同组织荧光定量中的内参基因，所述内参基因为liaα-tub1基因和/或liaubq基因，所述liaα-tub1基因的序列如seq id no.1所示，所述liaubq基因的序列如seq id no.2所示。
4、采用上述技术方案，可以利用liaα-tub1基因和/或liaubq基因作为内参基因，实现缺萼枫香树不同组织的荧光定量，本申请获得的内参基因在缺萼枫香树的不同组织中保守性强，表达量稳定，填补了缺萼枫香树没有内参基因的现状，促进了枫香的分子生物学和遗传育种研究。
5、第二方面，本专利技术还提供了检测第一方面所述的内参基因表达量的引物组，所述引物组包括检测liaα-tub1基因的引物对1，和/或检测liaubq基因的引物对2。
6、进一步地，所述引物对1包括以下引物序列，
7、liaα-tub1正向引物5’-agcaactcatcagcggcaagg-3’(seq id no.3)
8、liaα-tub1反向引物5’-tggctccacaacagaggtagaaa-3’(seq id no.4)。
9、进一步地，所述引物对2包括以下引物序列，
10、liaubq正向引物5’-aggagtgccctaatgccgagtg-3’(seq id no.5)
11、liaubq反向引物5’-cagccttctgataaacgtaagtcaa-3’(seq id no.6)。
12、采用上述技术方案，本专利技术通过设计筛选出了内参基因liaα-tub1基因和liaubq基因的特异性引物，可以实现缺萼枫香树不同组织荧光定量pcr中内参基因表达量的检测，该引物组特异性强，检测效率高，明显提高了检测结果的可信度。
13、第三方面，本专利技术还提供了第一方面所述的内参基因表达量的检测试剂，包括上述第二方面所述的引物组。采用该检测试剂，可以方便快捷的实现缺萼枫香树不同组织荧光定量pcr中内参基因表达量的检测。
14、第四方面，本专利技术还提供了第一方面所述的内参基因在缺萼枫香树不同组织荧光定量中作为内参基因的应用。
15、进一步地，在对缺萼枫香树使用荧光定量pcr进行不同组织和/或不同发育时期的情况分析时，采用liaα-tub1基因和/或liaubq基因作为内参基因。
16、进一步地，在对缺萼枫香树使用荧光定量pcr进行不同组织和/或不同发育时期的情况分析时，采用上述引物对1对内参基因liaα-tub1基因进行检测。
17、进一步地，在对缺萼枫香树使用荧光定量pcr进行不同组织和/或不同发育时期的情况分析时，采用上述引物对2对内参基因liaubq基因进行检测。
18、进一步地，所述不同组织为缺萼枫香树的叶片、叶柄、叶芽、果实和茎。
19、与现有技术相比，本专利技术筛选出在缺萼枫香树不同组织(叶片、叶柄、叶芽、果实、茎)稳定表达的内参基因分别为liaα-tub1基因和liaubq基因，同时揭示了这两个内参基因的序列。以liaα-tub1基因和liaubq基因为模板设计的实时荧光定量引物，不仅解决了缺萼枫香树不同组织中功能基因表达模式分析没有内参基因的现状，而且所设计的实时荧光定量引物，用于缺萼枫香树不同组织基因表达分析时引物特异性强，从而能够大大提高采用实时荧光定量检测缺萼枫香树优良基因的检测效率，并提高了检测结果的可信度。
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1.缺萼枫香树不同组织荧光定量中的内参基因，其特征在于，所述内参基因为Liaα-TUB1基因和/或LiaUBQ基因，所述Liaα-TUB1基因的序列如SEQ ID NO.1所示，所述LiaUBQ基因的序列如SEQ ID NO.2所示。
2.检测权利要求1所述的内参基因表达量的引物组，其特征在于，所述引物组包括检测Liaα-TUB1基因的引物对1，和/或检测LiaUBQ基因的引物对2。
3.根据权利要求2所述的引物组，其特征在于，所述引物对1包括以下引物序列，
4.根据权利要求2所述的引物组，其特征在于，所述引物对2包括以下引物序列，
5.权利要求1所述的内参基因表达量的检测试剂，其特征在于，包括权利要求2-4任一所述的引物组。
6.权利要求1所述的内参基因在缺萼枫香树不同组织荧光定量中作为内参基因的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用具体为，在对缺萼枫香树使用荧光定量PCR进行不同组织和/或不同发育时期的情况分析时，采用Liaα-TUB1基因和/或LiaUBQ基因作为内参基因。
<...【技术特征摘要】
1.缺萼枫香树不同组织荧光定量中的内参基因，其特征在于，所述内参基因为liaα-tub1基因和/或liaubq基因，所述liaα-tub1基因的序列如seq id no.1所示，所述liaubq基因的序列如seq id no.2所示。
2.检测权利要求1所述的内参基因表达量的引物组，其特征在于，所述引物组包括检测liaα-tub1基因的引物对1，和/或检测liaubq基因的引物对2。
3.根据权利要求2所述的引物组，其特征在于，所述引物对1包括以下引物序列，
4.根据权利要求2所述的引物组，其特征在于，所述引物对2包括以下引物序列，
5.权利要求1所述的内参基因表达量的检测试剂，其特征在于，包括权利要求2-4任一所述的引物组。
6.权利要求1所述的内参基因在缺萼枫香树不同组织荧光定...
【专利技术属性】
技术研发人员：周芳伟，杨少宗，徐梁，谢宇凯，
申请(专利权)人：浙江省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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