【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及针对猴痘病毒b6和m1抗原的单克隆中和抗体及其应用。
技术介绍
1、猴痘病毒(mpox virus，mpxv)属于正痘病毒属，该属还包括天花病毒(variolavirus，varv)、痘苗病毒(vaccinia virus，vacv)、和牛痘病毒(cowpox virus，cpxv)等，感染人类可引起不同严重程度的疾病，危害人类健康。
2、猴痘(mpox)属于人畜共患病，于1970年首次发现人感染病例，此后长期在非洲中部和西部地区局部传播，但是自2022年5月在英国确诊了猴痘病例以来，全球多个国家陆续出现确诊病例，表明猴痘疫情已呈现全球流行态势。研究表明，虽然天花疫苗对猴痘具有一定的免疫保护力，但是随着天花的消灭及疫苗接种的停止，大部分人群(1980年后出生)缺少对猴痘病毒、天花病毒等正痘病毒的抵抗力。目前，尽管已有tecovirimat、brincidofovir等化学药物被批准用于治疗天花，以及痘苗免疫球蛋白(vacciniaimmunoglobulin,vig)被批准用于因接种天花疫苗而引起的并发症，也可用于猴痘等正痘病毒感染，但是它们对猴痘等其他正痘病毒感染的疗效研究仍然有限。目前无针对猴痘病毒的有效药物用于疾病治疗。
3、猴痘病毒等正痘病毒属于双链dna病毒，基因组大小约200kb，编码蛋白多达200种，并且具有两种不同形式的感染性病毒颗粒，分别为胞内成熟颗粒(intracellularmature virion,imv)和胞外囊膜颗粒(extracellul
4、本专利技术的目的是针对猴痘病毒eev表面的b6抗原和imv表面的m1抗原筛选具有中和活性的单克隆抗体。
技术实现思路
1、本专利技术以哺乳动物细胞表达的mpxv b6作为抗原，通过流式分选，从接种天花疫苗人群的pbmcs中筛选到可以特异结合mpxv b6抗原的记忆b细胞，然后对分选的单个b细胞进行反转录pcr和巢式pcr，用特异性引物扩增出抗体的可变区序列，并进一步与抗体恒定区连接至表达载体中。经哺乳动物细胞表达、纯化抗体，进行一系列的功能检测，包括结合能力、中和活性等，获得了具有广谱结合mpxv、vacv、varv、cpxv，且能够中和vacv感染的两株人源单克隆抗体d21和d68。同时，本专利技术以哺乳动物细胞表达的mpxv m1作为抗原，通过流式分选，从接种了猴痘病毒mrna疫苗并经攻毒保护后存活的小鼠淋巴结中筛选到可以特异结合mpxv m1抗原的b细胞，然后对分选的b细胞进行10×genomic测序获得抗体可变区序列，进一步合成可变区序列并与抗体恒定区连接至表达载体中。经哺乳动物细胞表达、纯化抗体，进行一系列的功能检测，包括结合能力、中和活性等，获得了具有广谱结合mpxv、vacv、varv、cpxv，且能够中和vacv感染的两株鼠源单克隆抗体39#和40#。由此完成本专利技术。
2、本专利技术提供针对猴痘病毒b6和m1抗原的中和抗体其抗原结合片段，具体是针对猴痘病毒b6抗原的中和抗体d21、d68或其抗原结合片段，或针对猴痘病毒m1抗原的中和抗体39#、40#或其抗原结合片段，
3、其d21重链可变区的三个互补决定区cdr具有选自下组的氨基酸序列：
4、如seq id no:1所示的cdr1，
5、如seq id no:2所示的cdr2，和
6、如seq id no:3所示的cdr3；
7、其d21轻链可变区的三个互补决定区cdr具有选自下组的氨基酸序列：
8、如seq id no:4所示的cdr1，
9、如seq id no:5所示的cdr2，和
10、如seq id no:6所示的cdr3。
11、其d68重链可变区的三个互补决定区cdr具有选自下组的氨基酸序列：
12、如seq id no:7所示的cdr1，
13、如seq id no:8所示的cdr2，和
14、如seq id no:9所示的cdr3；
15、其d68轻链可变区的三个互补决定区cdr具有选自下组的氨基酸序列：
16、如seq id no:10所示的cdr1，
17、如seq id no:11所示的cdr2，和
18、如seq id no:12所示的cdr3。
19、其39#重链可变区的三个互补决定区cdr具有选自下组的氨基酸序列：
20、如seq id no:13所示的cdr1，
21、如seq id no:14所示的cdr2，和
22、如seq id no:15所示的cdr3；
23、其39#轻链可变区的三个互补决定区cdr具有选自下组的氨基酸序列：
24、如seq id no:16所示的cdr1，
25、如seq id no:17所示的cdr2，和
26、如seq id no:18所示的cdr3。
27、其40#重链可变区的三个互补决定区cdr具有选自下组的氨基酸序列：
28、如seq id no:19所示的cdr1，
29、如seq id no:20所示的cdr2，和
30、如seq id no:21所示的cdr3；
31、其40#轻链可变区的三个互补决定区cdr具有选自下组的氨基酸序列：
32、如seq id no:22所示的cdr1，
33、如seq id no:23所示的cdr2，和
34、如seq id no:24所示的cdr3。
35、其中，“抗原结合片段”是指抗体的抗原结合片段及抗体类似物，其通常包括至少部分母体抗体的抗原结合区或可变区，例如一个或多个cdr。抗体的片段保留母体抗体的至少某些结合特异性。
36、在一个实施方案中，所述d21抗体或其抗原结合片段含有：
37、如seq id no:25所示的重链可变区，和
38、如seq id no:26所示的轻链可变区。
39、在一个实施方案中，所述d68抗体或其抗原结合片段含有：
40、如seq id no:27所示的重链可变区，和
41、如seq id no:28所示的轻链可变区。
42、在一个实施方案中，所述39#抗体或其抗原结合片段含有：
43、如seq id no:29所示的重链可变区，和
44、如seq id no:30所示的轻链可变区。
45、在一个实施方案中，所述40#抗体或其抗原结本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.中和猴痘病毒单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其是针对猴痘病毒B6抗原（a）或M1抗原（b）的中和抗体，
2.如权利要求1所述的猴痘病毒中和抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述针对猴痘病毒B6抗原的抗体，其含有如SEQ ID NO:25所示的重链可变区，和如SEQ ID NO:26所示的轻链可变区；
3.如权利要求1或2所述的猴痘病毒中和抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体类型为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD；
4.如权利要求1至3任一项所述的猴痘病毒中和抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其是Fab、Fab'、Fab'-SH、Fv、scFv、F(ab')2、双抗体、抗体组合物。
5.一种多核苷酸，其编码如权利要求1至4任一项所述的猴痘病毒中和抗体或其抗原结合片段。
6.一种表达载体，其包含如权利要求5所述的多核苷酸。
7.一种宿主细胞，其包含如权利要求6所述的表达载体。
8.如权利要求1至4任一项所述的猴痘病毒中和抗体或其抗原结合片段在制备
9.一种药物组合物，其含有如权利要求1至4任一项所述的猴痘病毒中和抗体或其抗原结合片段和药用载体，任选还包括赋形剂。
10.如权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型是口服剂，或非口服剂；更具体地，所述口服剂是片剂、粉末剂、丸剂、散剂、颗粒剂、细粒剂、软/硬胶囊剂、薄膜包衣剂、小丸剂、舌下片、膏剂等；所述非口服剂是注射剂、栓剂、经皮剂、软膏剂、硬膏剂、外用液剂等。
...【技术特征摘要】
1.中和猴痘病毒单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其是针对猴痘病毒b6抗原（a）或m1抗原（b）的中和抗体，
2.如权利要求1所述的猴痘病毒中和抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述针对猴痘病毒b6抗原的抗体，其含有如seq id no:25所示的重链可变区，和如seq id no:26所示的轻链可变区；
3.如权利要求1或2所述的猴痘病毒中和抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体类型为igg1、igg2、igg3、igg4、iga、igm、ige或igd；
4.如权利要求1至3任一项所述的猴痘病毒中和抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其是fab、fab'、fab'-sh、fv、scfv、f(ab')2、双抗体、抗体组合物。
5.一种多核苷酸，其编码如权利要求1至4任一项所述的猴痘病毒中和抗...
【专利技术属性】
技术研发人员：王奇慧，高福，仵丽丽，赵润初，刘德志，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：
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