【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸领域。更具体地说，本专利技术涉及一种枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸和制备方法。
技术介绍
1、血管内血栓的异常形成往往与心脑血管疾病有关，如动脉粥样硬化、心肌梗死等，如今已成为一个全球性的医疗保健问题。冠状动脉或脑循环中血栓的形成(分别导致急性心肌梗死和缺血性脑卒中)是造成心脑血管疾病患者死亡的最常见原因。
2、纳豆激酶是从日本传统食品—纳豆(natto)中提取的活性物质，不仅在日本广泛使用，在中国也有很大的应用市场。1980年，日本的须见洋行博士在纳豆菌丝中的提取物中发现其对人工血栓具有溶解作用，具有纤维蛋白溶解活性，1987年该提取物被命名为纳豆激酶。与临床溶栓药物(尿激酶和链激酶等)相比，纳豆激酶具有安全、低成本、易口服、易吸收、不易导致出血倾向、并发症少等优点，是一种理想的绿色溶栓药物，具有广阔的开发和应用前景。
3、枯草芽孢杆菌纤溶酶是一种分子量在27kd左右纤溶蛋白酶，口服和注射给药可用于人体内血栓疾病的治疗。其中包括枯草芽孢杆菌纳豆菌bacillus subtilis natto发酵产生的纳豆激酶。枯草芽孢杆菌bacillus subtilis qk02发酵可产生一种与纳豆激酶高度同源的蛋白酶，subtilisin qk，命名为纤溶酶qk。试验证明与已有的临床溶栓药物相比，纤溶酶qk具有更强的溶栓特异性，更高的溶栓活性，更低的出血风险。开发溶栓药物具有巨大的应用前景，其中鉴别检验是药物最重要的一项检验。此外，纳豆激酶作为一种枯草芽孢杆菌纤溶酶，
4、当前针对纤溶酶或纳豆激酶主要依靠纤维蛋白平板的方法通过纤溶圈的大小评估溶栓活性。此方法不仅误差很大，而且不具备特异性和专属性。近年实验室研究多采用elisa法或wb法进行特异性鉴别检验，但是操作需要专业技术人员，且需要配备专用仪器设备。所以本领域迫切需要一种简单、快速的检测方法，用于枯草芽孢杆菌纤溶酶的鉴别和检测
技术实现思路
1、本专利技术的首要目的在于提供一种枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸，该试纸使用方便、快捷，可检测枯草芽孢杆菌纤溶酶，用于枯草芽孢杆菌纤溶酶的鉴别和检测。
2、本专利技术的另一目的在于提供上述枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸的制备方法。
3、本专利技术的再一目的在于提供上述枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸的应用。
4、为了实现根据本专利技术的这些目的和其它优点，一方面，本专利技术的一优选实施方案提供了一种枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸，包括：
5、底板；
6、吸水滤纸和样品吸收垫，而二者设在所述底板表面，所述吸水滤纸和样品吸收垫间隔设置，二者之间形成一显示窗口；
7、硝酸纤维膜，其面贴设置在所述底板上，且内嵌于所述显示窗口内，所述吸水滤纸和所述硝酸纤维膜在竖直方向上实现部分重叠；
8、对照线c和检测线t，均设置在所述硝酸纤维膜的上表面；
9、玻璃纤维膜，其面贴设置在所述硝酸纤维膜的上表面，所述玻璃纤维膜夹设在所述硝酸纤维膜和所述样品吸收垫之间，所述玻璃纤维膜夹设在所述硝酸纤维膜之间存在部分重叠，所述玻璃纤维膜和所述样品吸收垫之间存在部分重叠；
10、其中，所述玻璃纤维膜上设置有含胶体金标记的第一抗体，所述硝酸纤维膜位于检测线t的位置上设置有第二抗体，所述硝酸纤维膜位于对照线c的位置上设置有二抗igg。
11、优选地，所述第一抗体为枯草芽孢杆菌纤溶酶单克隆抗体qkma-9a10，所述第二抗体为枯草芽孢杆菌纤溶酶单克隆抗体qkma-1g41。
12、优选地，第一抗体包括重链和轻链，其重链的编码氨基酸序列如seq id no：1所示，重链包含重链可变区vh，重链可变区vh氨基酸序列为seq id no：1中的第1-120位；其轻链的编码氨基酸序列如seq id no：2所示，轻链包含轻链可变区vl，轻链可变区vl氨基酸序列为seq id no：2中的第1-106位。
13、优选地，所述第二抗体包括重链和轻链，其重链的编码氨基酸序列如seq id no：3所示，重链包含重链可变区vh，重链可变区vh氨基酸序列为seq id no：3中的第1-119位；所述轻链的编码氨基酸序列如seq id no：4所示，轻链包含轻链可变区vl，轻链可变区vl氨基酸序列为seq id no：4中的第1-113位。
14、优选地，所述第一抗体的vh和vl抗原决定簇互补决定区cdr由cdr1、cdr2、cdr3组成，其中：
15、vh-cdr1的氨基酸序列为seq id no:1中的第27-34位，序列为glypheserleuthrthrtyrhis；
16、vh-cdr2的氨基酸序列为seq id no:1中的第51-57位，序列为mettrpasnasnglyaspthr；
17、vh-cdr3的氨基酸序列为seq id no:1中的第96-109位，序列为alaargglμglyphelysseraspserhisvalmetaspala；
18、vl-cdr1的氨基酸序列为seq id no:2中的第26-31位，序列为glnasnileasnlystyr；
19、vl-cdr2的氨基酸序列为seq id no:2中的第50-52位，序列为histhrasn；
20、vl-cdr3的氨基酸序列为seq id no:2中的第89-96位，序列为leμglnhisasnserleutrpthr。
21、优选地，所述第二抗体的vh和vl抗原决定簇互补决定区cdr由cdr1、cdr2、cdr3组成，其中：
22、vh-cdr1的氨基酸序列为seq id no:3中的第27-34位，序列为
23、glypheserleusersertyrhis；
24、vh-cdr2的氨基酸序列为seq id no:3中的第51-57位，序列为
25、mettrpasnasnglyaspthr；
26、vh-cdr3的氨基酸序列为seq id no:3中的第96-109位，序列为
27、alaargglμglythrthrvalvalthrvaltrpasptyr；
28、vl-cdr1的氨基酸序列为seq id no:4中的第26-31位，序列为glnasnvalasnargphe；
29、vl-cdr2的氨基酸序列为seq id no:4中的第49-51位，序列为asnthrasn；
30、vl-cdr3的氨基酸序列为seq id no:4中的第88-96位，序列为
31、l本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸，其特征在于，所述第一抗体为枯草芽孢杆菌纤溶酶单克隆抗体QKMA-9A10，所述第二抗体为枯草芽孢杆菌纤溶酶单克隆抗体QKMA-1G41。
3.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸，其特征在于，第一抗体包括重链和轻链，其重链的编码氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，重链包含重链可变区VH，重链可变区VH氨基酸序列为SEQ ID NO：1中的第1-120位；其轻链的编码氨基酸序列如SEQID NO：2所示，轻链包含轻链可变区VL，轻链可变区VL氨基酸序列为SEQ ID NO：2中的第1-106位。
4.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸，其特征在于，所述第二抗体包括重链和轻链，其重链的编码氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，重链包含重链可变区VH，重链可变区VH氨基酸序列为SEQ ID NO：3中的第1-119位；所述轻链的编码氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，轻链包含轻链可变区VL
5.根据权利要求3所述的枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸，其特征在于，所述第一抗体的VH和VL抗原决定簇互补决定区CDR由CDR1、CDR2、CDR3组成，其中：
6.根据权利要求4所述的枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸，其特征在于，所述第二抗体的VH和VL抗原决定簇互补决定区CDR由CDR1、CDR2、CDR3组成，其中：
7.根据权利要求3所述的枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸，其特征在于，所述玻璃纤维膜中胶体金标记第一抗体的标记pH为7.5-8.0，胶体金和第一抗体的配比为10-20μg第一抗体/mL胶体金。
8.根据权利要求3所述的枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸，其特征在于，所述的硝酸纤维膜中第二抗体包被浓度为1.2mg/mL，包被量1-5μl/cm；二抗IgG包被浓度为1.5mg/mL，包被量1-5μl/cm。
9.如权利要求1-8任一所述的枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述的枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸的制备方法，其特征在于，所述玻璃纤维膜由以下步骤制备：
...【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸，其特征在于，所述第一抗体为枯草芽孢杆菌纤溶酶单克隆抗体qkma-9a10，所述第二抗体为枯草芽孢杆菌纤溶酶单克隆抗体qkma-1g41。
3.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸，其特征在于，第一抗体包括重链和轻链，其重链的编码氨基酸序列如seq id no：1所示，重链包含重链可变区vh，重链可变区vh氨基酸序列为seq id no：1中的第1-120位；其轻链的编码氨基酸序列如seqid no：2所示，轻链包含轻链可变区vl，轻链可变区vl氨基酸序列为seq id no：2中的第1-106位。
4.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌纤溶酶的快速检测试纸，其特征在于，所述第二抗体包括重链和轻链，其重链的编码氨基酸序列如seq id no：3所示，重链包含重链可变区vh，重链可变区vh氨基酸序列为seq id no：3中的第1-119位；所述轻链的编码氨基酸序列如seq id no：4所示，轻链包含轻链可变区vl，轻链可变区vl氨基酸序列为seq id no：...
【专利技术属性】
技术研发人员：廖园园，董艳山，张建宇，高丽，王业富，
申请(专利权)人：武汉真福创新生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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