【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及对组织或细胞中的含二醇基的物质进行特异性染色的荧光染色方法。
技术介绍
1、病理组织诊断是通过显微镜诊断病变部的组织学形态变化的医疗行为，决定患者的治疗策略的核心相关的重要诊断技术。病理组织诊断是通过对薄切片的组织用苏木精、伊红染色(he染色)进行染色制作的载玻片由训练有素的病理诊断医生进行镜检而实施的。除此以外，为了进行更准确的诊断，并用被称为特殊染色的pas染色或pam染色、阿尔新蓝(alcian blue)染色这样的对组织内的特定结构物进行染色的方法的观察在很多疾病的确定诊断中有效。
2、另一方面，在基础生命科学领域中，各种最尖端的成像技术近年来取得了令人瞩目的进展。特别是通过对组织进行透明化才能实现的三维成像方法是近年来引起广泛关注的一项技术，cubic(清晰无障碍的大脑/身体成像鸡尾酒和计算分析，clear，unobstructedbrain/body imaging cocktails and computational analysis)法是其代表方法之一。在使用cubic法的三维观察中，据报道，通过与现有的荧光探针或标记化抗体的组合，能够以单细胞水平的分辨率，观察组织的立体结构(非专利文献1)。
3、在这样的最尖端的三维成像法中，尖端荧光显微镜成为技术的基础，因此需要利用荧光探针或荧光标记抗体进行组织的全组织包埋(whole-mount)染色(不进行薄切片，而将组织片整体染色的方法)。关于荧光探针，只有对应于细胞核或肌动蛋白这样的一部分结构物的探针，从与临床病理诊断中的特殊染
4、现有技术文献
5、专利文献
6、专利文献1：日本特开2018－162986号公报
7、非专利文献
8、非专利文献1：satoshi nojima et al.，scientific reports(2014)7：9269
技术实现思路
1、专利技术所要解决的技术问题
2、本专利技术的目的之一是开发一种能够进行清晰的三维观察的荧光染色方法，其是能够与对含二醇基的物质、例如含有大量多糖类的结构物(粘液、基底膜等)进行染色的特殊染色pas染色互换的荧光染色方法。
3、用于解决技术问题的技术方案
4、本专利技术的专利技术人着眼于在专利文献1的方法中使用的荧光探针的激发波长，基于该激发波长为短波长，因此激发光的组织穿透性低，结果难以实现清晰的三维成像(3d成像)的预测，使用激发波长为较长波长的各种化合物尝试了荧光染色。其结果发现，在使用具有荧光素骨架的化合物的情况下，为能够与pas染色互换的特殊染色，且通过与组织透明化技术和3d成像技术组合，能够实现清晰的三维观察。
5、即，根据本专利技术的一个方面，提供了一种对组织或细胞样品中的含二醇基的物质进行荧光染色的方法，其包括：使以下的通式(i)所示的化合物或其盐与该组织或细胞样品接触的步骤。
6、
7、[通式(i)中，
8、r1表示羧基、可以被取代的烷基、可以被取代的烷氧基或卤原子；
9、r2、r3、r4、r5、r6和r7分别独立地表示氢原子、羟基(oh基)、卤原子或可以被取代的直链或支链烷基；
10、x表示酰肼基、氨基脲基、氨基硫脲基、肼基、羟基氨基、氨基或烷基氨基；
11、y不存在，或者表示酰胺基、酯基、脲基、硫脲基、氨基甲酸酯基、碳酸酯基或氧原子；
12、l表示－(直链或支链亚烷基)n－(n为1～10的整数)、－(直链或支链亚烷基－o－)n－(n为1～10的整数)或－(直链或支链亚烷基－o－)n－(直链亚烷基)m－(n和m分别独立地为1～10的整数)，或者表示单键；
13、p表示0～4的整数，在p为2以上的情况下，r1可以相同也可以不同；
14、q表示1～2的整数，在q为2的情况下，(x－l－y)所示的结构可以相同也可以不同，p与q之和为5以下的整数。]
15、根据本专利技术的其他方面，提供一种检测组织或细胞样品中的含二醇基的物质的方法，其包括：通过上述荧光染色方法，对该组织或细胞样品中的含二醇基的物质进行荧光染色的步骤；和测定从上述化合物发出的荧光的步骤。
16、根据本专利技术的其他方面，提供一种使含有含二醇基的物质的组织或细胞可视化的方法，其包括：通过上述荧光染色方法，对组织或细胞样品中的含二醇基的物质进行荧光染色的步骤；和对从上述化合物发出的荧光进行测定并图像化的步骤。
17、根据本专利技术的其他方面，提供一种判定组织或细胞样品中的大量含有含二醇基的物质的组织和/或病变的方法，其包括：通过上述荧光染色方法，对组织或细胞样品中的含二醇基的物质进行荧光染色的步骤；和判定在被染色的部位存在该组织和/或病变的步骤。
18、根据本专利技术的其他方面，提供一种筛选伴随含有含二醇基的物质的组织或细胞的病变的疾病的治疗药的方法，其包括：对患有该疾病的个体投予治疗药候补物的步骤；从该个体采集产生该病变的组织或细胞样品的步骤；通过上述荧光染色方法，对该组织或细胞样品中的含二醇基的物质进行荧光染色的步骤；对从上述化合物发出的荧光进行测定并图像化，将含有含二醇基的物质的组织或细胞可视化的步骤；和根据可视化的该含有含二醇基的物质的组织或细胞的图像，判定治疗药候补物的治疗效果的步骤。
19、根据本专利技术的其他方面，提供一种荧光染色用组合物，其包含上述通式(i)所示的化合物或其盐，上述荧光染色用组合物用于将含有含二醇基的物质的组织或细胞可视化。
20、根据本专利技术的其他方面，提供一种伴随含有含二醇基的物质的组织或细胞的病变的疾病的诊断用组合物，其包含上述通式(i)所示的化合物或其盐。
21、专利技术的效果
22、根据本专利技术，通过使用上述通式(i)所示的化合物(以下，有时称为化合物(i))作为染色剂，能够对含二醇基的物质进行特异性荧光染色。另外，通过将本专利技术的荧光染色方法与组织透明化技术和3d成像技术组合，能够将存在于组织深处的该物质染色，并能够将含该物质的组织、细胞或结构三维可视化。
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1.一种对组织或细胞样品中的含二醇基的物质进行荧光染色的方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，包括：
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：
6.一种检测组织或细胞样品中的含二醇基的物质的方法，其特征在于，包括：
7.一种使含有含二醇基的物质的组织或细胞可视化的方法，其特征在于，包括：
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：
9.如权利要求7所述的方法，其特征在于：
10.一种判定组织或细胞样品中的大量含有含二醇基的物质的组织和/或病变的方法，其特征在于，包括：
11.如权利要求10所述的方法，其特征在于：
12.一种筛选伴随含有含二醇基的物质的组织或细胞的病变的疾病的治疗药的方法，其特征在于，包括：
13.如权利要求12所述的方法，其特征在于：
14.一种荧光染色用组合物，其特征在于：
15.如权利
16.如权利要求14所述的荧光染色用组合物，其特征在于：
17.一种伴随含有含二醇基的物质的组织或细胞的病变的疾病的诊断用组合物，其特征在于：
18.如权利要求17所述的诊断用组合物，其特征在于：
19.如权利要求17所述的诊断用组合物，其特征在于：
20.一种下述通式(I)所示的化合物或其盐，其特征在于：
21.一种下述通式(I)所示的化合物或其盐，其特征在于：
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种对组织或细胞样品中的含二醇基的物质进行荧光染色的方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，包括：
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：
6.一种检测组织或细胞样品中的含二醇基的物质的方法，其特征在于，包括：
7.一种使含有含二醇基的物质的组织或细胞可视化的方法，其特征在于，包括：
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：
9.如权利要求7所述的方法，其特征在于：
10.一种判定组织或细胞样品中的大量含有含二醇基的物质的组织和/或病变的方法，其特征在于，包括：
11.如权利要求10所述的方法，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：野岛聪，森井英一，铃木悠记，箕浦逸史，
申请(专利权)人：国立大学法人大阪大学，
类型：发明
国别省市：
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