【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于实验动物生产领域，涉及一种中国地鼠的超数排卵方法。
技术介绍
1、超数排卵，简称“超排”，是一种应用外源性促性腺激素诱发卵巢多个卵泡发育，获得较多胚胎的技术。“超排”是建立转基因动物模型中较为重要的一个环节，增加可获的胚胎数量、提高胚胎发育质量成为了后续研究中的前提条件。超数排卵技术充分挖掘了雌性动物的繁殖潜力，减少了动物使用量，是获得大量整齐、优质的卵子或胚胎的一种有效方法，为胚胎移植、克隆和转基因动物生产等提供了卵子和胚胎来源，为获得大量胚胎来源提供了技术支撑和保证。
2、超数排卵存在的主要问题有供体的选择、超数排卵药物和生产应用方案的研究以及操作水平等几个方面。对于常用啮齿类动物大、小鼠超数排卵一般采用孕马血清促性腺激素(pmsg)配合人绒毛膜促性腺激素(hcg)激素。但是对于激素自身而言，pmsg在动物体内半衰期长，使用后易引发卵巢囊肿，卵巢易出现大量不排卵卵泡，黄体早期退化，胚胎发育不正常，季节性超数排卵变异范围大等异常现象。因此在使用此激素时，用量和注射时机就显得至关重要，这就需要研究人员针对各个鼠种摸索出一套最适方案，最大程度上避免激素对动物自身产生不良副作用。在超数排卵激素处理时，供体的性周期阶段、同期发情的处理方法与时间、供体营养状况、超数排卵季节、环境条件、遗传性状等因素，不但独立影响卵巢对超数排卵的反应，还会协同影响卵巢对超数排卵的反应。因此，在超数排卵方法研究上应综合考虑多因素相互协同作用对超数排卵效果的影响性。
3、中国地鼠作为我国特色的实验动物资源，在生物医学领域
4、常见的大、小鼠超数排卵程序十分成熟，可稳定获得大量的卵细胞来源。在已知的超数排卵程序中，pmsg和hcg这两种超排激素应用范围十分广泛。pmsg同时具有促卵泡生长激素(fsh)和促黄体生成素(lh)的生物学性质，对卵泡的生长发育有显著的促进作用，伴有一定的促排卵、促黄体生成作用。hcg具有类似于lh的生物学性质，促进成熟卵泡排出卵巢。使用超排激素组合pmsg+hcg对小鼠进行超排可稳定获得卵子来源，但有研究发现pmsg+hcg激素组合会降低小鼠超排及妊娠率，并可能影响着床期小鼠卵巢和子宫的基因表达导致妊娠失败。专利技术人在研究中发现，对于中国地鼠，hcg诱导超数排卵的效果不稳定，且其诱导雌鼠超数排卵后卵巢中含有许多但未破裂的卵泡，这些卵泡中含有大量成熟卵母细胞(mⅱ细胞)，大多数卵子在成熟的早期阶段就被阻滞。排卵失败也有可能是由于hcg水平不足，伴随着内源性lh释放不足从而导致卵泡壁过早黄体化，因此既不允许卵母细胞完全成熟，也不允许卵泡壁破裂。目前中国地鼠还没有成熟统一的超数排卵程序，这严重影响了其胚胎生物学的研究。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种中国地鼠的超数排卵方法。
2、本专利技术的目的可通过以下技术方案实现：
3、一种中国地鼠的超数排卵方法，挑选9-14周，体重27-35g且具有4d稳定发情周期成熟雌性中国地鼠，将发情后期视为发情周期第一天，于当天进行超数排卵，程序如下：发情周期第一天下午19:00腹腔注射第一针孕马血清pmsg，剂量为0.3iu/g；间隔60h后腹腔注射第二针孕马血清pmsg，剂量为0.4iu/g；7h后于发情前期腹腔注射第三针促黄体生成激素释放激素lhrh，剂量为0.016μg/g，于当天19:30将已注射促排卵激素且处于发情期的雌性中国地鼠与单笼饲养的雄鼠进行交配。交配结束后通过阴道栓或阴道涂片中的精子来确认交配。
4、其中，所述的发情后期可通过阴道涂片确定，发情后期阴道涂片特征：细胞类型种类增多，出现有核上皮细胞和白细胞，无核角化细胞数量大幅减少，整体着色深，如图2所示。
5、作为本专利技术的一种优选，第一针孕马血清pmsg，剂量为0.3iu/g。
6、作为本专利技术的进一步优选，发情周期第一天下午19:00腹腔注射第一针孕马血清pmsg。
7、作为本专利技术的一种优选，第一针注射pmsg间隔60h后腹腔注射第二针孕马血清pmsg，剂量为0.4iu/g。
8、作为本专利技术的一种优选，于发情前期腹腔注射第三针促黄体生成激素释放激素lhrh，剂量为0.016μg/g。
9、作为本专利技术的更进一步优选，所述的中国地鼠的超数排卵方法包括，挑选9-14周，体重27-35g且具有4d稳定发情周期成熟雌性中国地鼠，将发情后期视为发情周期第一天，于当天进行超数排卵，程序如下：发情周期第一天下午19:00腹腔注射第一针孕马血清pmsg，剂量为0.3iu/g；间隔60h后腹腔注射第二针孕马血清pmsg，剂量为0.4iu/g；7h后于发情前期腹腔注射第三针促黄体生成激素释放激素lhrh，剂量为0.016μg/g，于当天19:30将已注射促排卵激素且处于发情期的雌性中国地鼠与单笼饲养的雄鼠进行交配。交配结束后通过阴道栓或阴道涂片中的精子来确认交配。
10、本专利技术详述
11、中国地鼠在恒定实验室条件下，黄体生成素高峰出现在发情前期14:00-15:00，排卵发生在次日凌晨3:本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种中国地鼠的超数排卵方法，其特征在于，挑选9-14周，体重27-35g且具有4d稳定发情周期成熟雌性中国地鼠，将发情后期视为发情周期第一天，于当天进行超数排卵，程序如下：发情周期第一天下午19:00腹腔注射第一针孕马血清PMSG，剂量为0.3IU/g；间隔60h后腹腔注射第二针孕马血清PMSG，剂量为0.4IU/g；7h后于发情前期腹腔注射第三针促黄体生成激素释放激素LHRH，剂量为0.016μg/g，于当天19:30将已注射促排卵激素且处于发情期的雌性中国地鼠与单笼饲养的雄鼠进行交配。交配结束后通过阴道栓或阴道涂片中的精子来确认交配。
2.根据权利要求1所述的中国地鼠的超数排卵方法，其特征在于，第一针孕马血清PMSG，剂量为0.3IU/g。
3.根据权利要求2所述的中国地鼠的超数排卵方法，其特征在于，发情周期第一天下午19:00腹腔注射第一针孕马血清PMSG。
4.根据权利要求1所述的中国地鼠的超数排卵方法，其特征在于，第一针注射PMSG间隔60h后腹腔注射第二针孕马血清PMSG，剂量为0.4IU/g。
5.根据权利要求1所
6.根据权利要求1-5中任一项所述的中国地鼠的超数排卵方法，其特征在于，挑选9-14周，体重27-35g且具有4d稳定发情周期成熟雌性中国地鼠，将发情后期视为发情周期第一天，于当天进行超数排卵，程序如下：发情周期第一天下午19:00腹腔注射第一针孕马血清PMSG，剂量为0.3IU/g；间隔60h后腹腔注射第二针孕马血清PMSG，剂量为0.4IU/g；7h后于发情前期腹腔注射第三针促黄体生成激素释放激素LHRH，剂量为0.016μg/g，于当天19:30将已注射促排卵激素且处于发情期的雌性中国地鼠与单笼饲养的雄鼠进行交配。交配结束后通过阴道栓或阴道涂片中的精子来确认交配。
...【技术特征摘要】
1.一种中国地鼠的超数排卵方法，其特征在于，挑选9-14周，体重27-35g且具有4d稳定发情周期成熟雌性中国地鼠，将发情后期视为发情周期第一天，于当天进行超数排卵，程序如下：发情周期第一天下午19:00腹腔注射第一针孕马血清pmsg，剂量为0.3iu/g；间隔60h后腹腔注射第二针孕马血清pmsg，剂量为0.4iu/g；7h后于发情前期腹腔注射第三针促黄体生成激素释放激素lhrh，剂量为0.016μg/g，于当天19:30将已注射促排卵激素且处于发情期的雌性中国地鼠与单笼饲养的雄鼠进行交配。交配结束后通过阴道栓或阴道涂片中的精子来确认交配。
2.根据权利要求1所述的中国地鼠的超数排卵方法，其特征在于，第一针孕马血清pmsg，剂量为0.3iu/g。
3.根据权利要求2所述的中国地鼠的超数排卵方法，其特征在于，发情周期第一天下午19:00腹腔注射第一针孕马血清pmsg。
4.根据权利要求1所述的中国地鼠的超数...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋国华，杨钧婷，王晓堂，常潇琪，马云辉，陈朝阳，高继萍，闫晓如，
申请(专利权)人：山西医科大学，
类型：发明
国别省市：
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