【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物。更具体地，涉及一种用于干扰wsv108基因表达的重组菌及其应用。
技术介绍
1、凡纳滨对虾(litopenaeus vannamei)是我国重要的海水养殖品种，其年产量约占我国对虾养殖总产量的80％。近年来，由于对虾传染性病害频发，给对虾养殖业造成了巨大的经济损失。对虾白斑综合征(white spot syndrome，wss)是由白斑综合征病毒(whitespot syndrome virus，wssv)感染导致的一种传染性病害，对对虾养殖业的危害最为严重。wss的典型病理特征为对虾甲壳上出现白色斑块，可伴有身体发红、食欲减退、行动缓慢、血淋巴变稀、肝胰腺肿胀及甲壳易剥离等症状，死亡率极高。目前尚无能有效防治wss的药物或方法。
2、病毒进入宿主细胞后，经基因组复制和病毒蛋白合成，释放出子代病毒完成一个病毒复制周期。通过干预病毒的复制来抑制病毒的感染是一个有前景的防控策略。现有研究发现，通过免疫小鼠制备得到的针对wssv囊膜蛋白(vp28蛋白)的单克隆抗体能够在对虾体内中和wssv，抑制wssv的复制，延缓被wssv感染的对虾的死亡。研制针对wssv的蛋白的单克隆抗体虽能防治wss，但制备单克隆抗体的价格高昂。因此，还需开发其他可通过抑制蛋白表达来防治wss的产品和方法。
3、rna干扰(rna interference，rnai)技术是指利用外源或内源的双链rna(double-stranded rna，dsrna)抑制体内同源基因表达的技术。rnai技术运用过程中有两种方式；一种
技术实现思路
1、本专利技术针对上述现有技术的不足，提供了一种可抑制wssv中wsv108基因表达的dsrna，即wsv108-dsrna，利用所述dsrna可以有效抑制wssv的复制，降低wssv感染对虾后对虾的死亡率。在此基础上，本专利技术还提供了一种用于干扰wsv108基因表达的重组菌，其能够高效表达wsv108-dsrna且对对虾无害，有利于对虾白斑综合征的预防和治疗。
2、本专利技术的第一个目的是提供抑制白斑综合征病毒wsv108基因表达的制剂在制备预防和/或治疗对虾白斑综合征的产品中的应用。
3、本专利技术的第二个目的是提供抑制白斑综合征病毒wsv108基因表达的制剂在制备抑制白斑综合征病毒的产品中的应用。
4、本专利技术的第三个目的是提供一种用于干扰wsv108基因表达的dsrna。
5、本专利技术的第四个目的是提供一种用于表达靶向wsv108基因的dsrna的重组质粒。
6、本专利技术的第五个目的是提供一种用于干扰wsv108基因表达的重组菌。
7、本专利技术的第六个目的是提供所述dsrna、所述重组质粒或所述重组菌在制备用于预防和/或治疗对虾白斑综合征的产品中的应用。
8、本专利技术的第七个目的是提供所述dsrna、所述重组质粒或所述重组菌在制备抑制白斑综合征病毒的产品中的应用。
9、本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
10、本专利技术通过体外合成法合成特异性针对wsv108的dsrna并注射到对虾体内发现，所述dsrna能够敲降wsv108的表达，其能够有效减少wssv在对虾体内的复制，降低wssv引起的血细胞的细胞凋亡水平，降低感染了wssv的对虾的死亡率。鉴于体外合成dsrna的成本高，使用时需注射到对虾体内，费时费力且效率低。为此，本专利技术以wsv108功能区域的mrna为dsrna合成模板构建了能够表达特异性干扰wsv108的dsrna的重组质粒重组菌，发现利用所述重组菌可以敲降wsv108的表达，减少wssv在对虾体内的复制，降低感染了wssv的对虾的死亡率，有利于对虾白斑综合征的预防和治疗。
11、本专利技术请求保护抑制白斑综合征病毒wsv108基因表达的制剂在制备预防和/或治疗对虾白斑综合征的产品中的应用。
12、本专利技术还请求保护抑制白斑综合征病毒wsv108基因表达的制剂在制备抑制白斑综合征病毒的产品中的应用。
13、具体地，所述wsv108基因编码的wsv108蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示。
14、wsv108基因的orf区的核苷酸序列如seq id no.2所示。
15、作为一种可选的实施方式，所述制剂为干扰wsv108基因表达的rnai片段。
16、可选地，所述rnai片段为靶向wsv108基因的dsrna。
17、本专利技术还提供了一种用于干扰wsv108基因表达的dsrna，所述dsrna是基于seq idno.3所示核苷酸序列制备得到。
18、具体地，所述dsrna是基于seq id no.3所示核苷酸序列经逆转录酶逆转得到。
19、可选地，所述dsrna是基于seq id no.3所示核苷酸序列，使用t7ribomaxtmexpress rnai系统，通过体外转录生成得到。
20、本专利技术还提供了一种用于表达靶向wsv108基因的dsrna的重组质粒，所述重组质粒中含有seq id no.3所示核苷酸序列。
21、可选地，构建重组质粒所用质粒为l4440。
22、本专利技术还提供了一种用于干扰wsv108基因表达的重组菌，所述重组菌中含有上述重组质粒。
23、本专利技术还请求保护所述dsrna、所述重组质粒或所述重组菌在制备用于预防和/或治疗对虾白斑综合征的产品中的应用。
24、本专利技术还请求保护所述dsrna、所述重组质粒或所述重组菌在制备抑制白斑综合征病毒的产品中的应用。
25、本专利技术还提供了一种对虾饲料，所述饲料中含有本专利技术所述重组菌。
26、具体地，所述对虾饲料的制备方法包括以下步骤：
27、s1.按照重组菌菌体与对虾饲料为50g：0.8～1.2kg的比例混合均匀；
28、s2.按照海藻酸钠粉末与步骤s1所得混合物为20g：0.8～1.2kg的比例加入海藻酸钠粉末并混合均匀；
29、s3.按照cacl2溶液与步骤s2所得混合物为200ml：0.8～1.2kg的比例加入0.04mol/l的cacl2溶液，混合均匀直至海藻酸钠在饲料表面形成凝胶包膜。
30、优选地，重组菌菌体与对虾饲料的比例为50g：1kg。
31、优选地，步骤s1所得混合物与海藻酸钠粉末的比例为20g本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.抑制白斑综合征病毒wsv108基因表达的制剂在制备预防和/或治疗对虾白斑综合征的产品中的应用。
2.抑制白斑综合征病毒wsv108基因表达的制剂在制备抑制白斑综合征病毒的产品中的应用。
3.根据权利要求1或2所述应用，其特征在于，所述制剂为干扰wsv108基因表达的RNAi片段。
4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述RNAi片段为靶向wsv108基因的dsRNA，wsv108基因编码的wsv108蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
5.一种用于干扰wsv108基因表达的dsRNA，其特征在于，所述dsRNA是基于SEQ ID NO.3所示核苷酸序列制备得到。
6.一种用于表达靶向wsv108基因的dsRNA的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒中含有SEQ ID NO.3所示核苷酸序列。
7.一种用于干扰wsv108基因表达的重组菌，其特征在于，所述重组菌中含有权利要求6所述重组质粒。
8.权利要求5所述dsRNA、权利要求6所述重组质粒或权利要求7所述重组菌在制备用于预防和
9.权利要求5所述dsRNA、权利要求6所述重组质粒或权利要求7所述重组菌在制备抑制白斑综合征病毒的产品中的应用。
10.一种对虾饲料，其特征在于，所述饲料中含有权利要求9所述的重组菌。
...【技术特征摘要】
1.抑制白斑综合征病毒wsv108基因表达的制剂在制备预防和/或治疗对虾白斑综合征的产品中的应用。
2.抑制白斑综合征病毒wsv108基因表达的制剂在制备抑制白斑综合征病毒的产品中的应用。
3.根据权利要求1或2所述应用，其特征在于，所述制剂为干扰wsv108基因表达的rnai片段。
4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述rnai片段为靶向wsv108基因的dsrna，wsv108基因编码的wsv108蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示。
5.一种用于干扰wsv108基因表达的dsrna，其特征在于，所述dsrna是基于seq id no.3所示核苷酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨林蔚，徐晓鹏，何建国，左洪亮，翁少萍，王子昂，韩德宇，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：
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