【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、过继性细胞转移疗法是一种涉及自体或同种异体免疫细胞的离体扩增以及随后输注到患者中的免疫疗法的类型。可以离体对免疫细胞进行修饰以特异性靶向恶性细胞。修饰包含对t细胞进行工程化以表达嵌合抗原受体(car)。如car t细胞(car-t)疗法等过继性细胞转移疗法的前景通常受到毒性(例如，细胞因子相关的毒性)的限制。例如，过继性细胞转移免疫疗法可能触发细胞因子水平的非生理升高(细胞因子释放综合征)，这可能导致接受者死亡(参见例如morgan等人,《分子疗法(molecular therapy)》18(4):843-851,2010)。另外，经修饰的免疫细胞无法在患者体内很好地扩增，可能在体内无法存活很长时间，并且可能对其自身在体内活动引发的细胞毒性环境敏感。
2、因此，开发改善这些经修饰的免疫细胞的增殖并降低与car-t疗法相关的毒性，同时维持或增强治疗疗效的方法具有重大意义。
技术实现思路
1、本公开至少部分地基于双特异性嵌合抗原受体(car)的开发，所述双特异性car包括双特异性细胞外抗原结合结构域，所述双特异性细胞外抗原结合结构域与两个单独抗原或抗原表位结合，由此改善在体内表达此类双特异性嵌合抗原受体的免疫细胞的治疗疗效。
2、在一些方面，本公开提供了一种双特异性嵌合抗原受体(car)多肽，所述双特异性car多肽包括：(a)第一抗原结合部分；(b)第二抗原结合部分；(c)共刺激信号传导结构域；以及(d)细胞质信号传导结构域。所述第一抗原结合部分
3、所述第一抗原结合部分与第一肿瘤相关抗原结合，并且所述第二抗原结合部分与第二肿瘤相关抗原结合，所述第二肿瘤相关抗原不同于所述第一肿瘤相关抗原。在一些情况下，所述第一肿瘤抗原和所述第二肿瘤抗原选自5t4、cd2、cd3、cd5、cd7、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd38、cd70、cd123、cd133、cd171、cea、cs1、bcma、baff-r、psma、psca、桥粒芯蛋白(dsg3)、her-2、fap、fshr、nkg2d、gd2、egfrviii、间皮素、ror1、mage、muc1、muc16、gpc3、lewis y、claudin18.2和vegfrii。在具体实例中，所述第一肿瘤抗原为cd19，并且所述第二肿瘤抗原为bcma。可替代地，所述第一肿瘤抗原为bcma，并且所述第二肿瘤抗原为cd19。
4、在一些实施例中，本文所公开的双特异性car多肽中的所述第一抗原结合部分为与cd19结合的vhh片段(抗cd19 vhh)，并且所述第二抗原结合部分为与bcma结合的scfv(抗bcma scfv)。可替代地，所述第一抗原结合部分为与bcma结合的vhh(抗bcma vhh)，并且所述第二抗原结合部分为与cd19结合的scfv片段(抗cd19 scfv)。
5、在一些实例中，所述双特异性car包括抗cd19 scfv，所述抗cd19 scfv可以包括seq id no:7、8或9的氨基酸序列。可替代地或另外地，所述双特异性car进一步包括抗bcmavhh，所述抗bcma vhh可以包括seq id no:4、5或6的氨基酸序列。在具体实例中，所述双特异性car包括seq id no:11的氨基酸序列(例如，作为细胞外双特异性抗原结合结构域)。
6、在其它实例中，所述双特异性car包括抗cd19 vhh，所述抗cd19 vhh可以包括seqid no:1、2或3的氨基酸序列。可替代地或另外地，所述双特异性car进一步包括抗bcmascfv，所述抗bcma scfv可以包括seq id no:10的氨基酸序列。此类双特异性car可以包括seq id no:11、12、71或72的氨基酸序列。在一个具体实例中，所述双特异性car包括seq idno:11的氨基酸序列(例如，作为细胞外双特异性抗原结合结构域)。在另一个具体实例中，所述双特异性car包括seq id no:12的氨基酸序列(例如，作为细胞外双特异性抗原结合结构域)。
7、在其它方面，本公开提供了一种双特异性嵌合抗原受体(car)多肽，所述双特异性car多肽包括：(a)第一抗原结合部分，所述第一抗原结合部分为与bcma结合的april截短片段；(b)第二抗原结合部分，所述第二抗原结合部分为单结构域抗体可变片段(vhh)或与肿瘤相关抗原(例如，cd19)结合的单链可变片段(scfv)；(c)共刺激信号传导结构域；以及(d)细胞质信号传导结构域。
8、在一些情况下，所述与bcma结合的april截短片段包括与seq id no:58至少90％相同的氨基酸序列。在一些实例中，所述april截短片段包括seq id no:58的氨基酸序列。可替代地或另外地，所述第二抗原结合部分为抗cd19 scfv或抗cd19 vhh。在一些实例中，所述第二抗原结合部分为抗cd19 scfv，所述抗cd19 scfv可以包括seq id no:7、8或9的氨基酸序列。在其它实例中，所述第二抗原结合部分为抗cd19 vhh，所述抗cd19 vhh可以包括seq id no:1、2或3的氨基酸序列。在具体实例中，所述双特异性car多肽可以包括seq idno:59、60、61或62的氨基酸序列(例如，作为细胞外双特异性抗原结合结构域)。
9、本文所公开的任何双特异性car多肽可以进一步包括位于所述第一抗原结合部分与所述第二抗原结合部分之间的肽接头。此类肽接头的长度可以为约4-40个氨基酸。在一些实例中，本文所公开的双特异性car多肽可以包括来自4-1bb或cd28的共刺激信号传导结构域。可替代地或另外地，所述双特异性car多肽中的所述细胞质信号传导结构域可以包括cd3z细胞质信号传导结构域、il-2rβ细胞质信号传导结构域或其组合。在具体实例中，所述双特异性car多肽中的所述细胞质信号传导结构域包括cd3□细胞质信号传导结构域和所述il-2rβ细胞质信号传导结构域两者。在一些情况下，所述细胞质信号传导结构域包括cd3z细胞质信号传导结构域，所述cd3z细胞质信号传导结构域任选地包括stat结合基序，例如，位于c末端处的stat结合基序。
10、本文所公开的任何双特异性car多肽可以进一步为跨膜结构域、铰链结构域或其组合。在一些情况下，所述跨膜结构域和/或所述铰链结构域可以位于所述第一抗原结合部分或所述第二抗原结合部分与所述共刺激结构域之间。在一些实例中，所述跨膜结构域和/或所述铰链结构域来自cd8。
11、本文所提供的示例性双特异性car多肽可以包括seq id no:63-70的任何氨基酸序列。
12、在其它方面，本公开还提供了一种基因工程化免疫细胞群体，所述基因工程化免疫细胞表达如本文所公开的双特异性car多肽。所述基因工程化免疫细胞(如t细本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种双特异性嵌合抗原受体(CAR)多肽，其包括：
2.根据权利要求1所述的双特异性CAR多肽，其中所述第一肿瘤抗原和所述第二肿瘤抗原选自由以下组成的组：5T4、CD2、CD3、CD5、CD7、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD70、CD123、CD133、CD171、CEA、CS1、BCMA、BAFF-R、PSMA、PSCA、桥粒芯蛋白(Dsg3)、HER-2、FAP、FSHR、NKG2D、GD2、EGFRVIII、间皮素、ROR1、MAGE、MUC1、MUC16、GPC3、Lewis Y、Claudin 18.2和VEGFRII。
3.根据权利要求1所述的双特异性CAR多肽，其中所述第一肿瘤抗原为CD19，并且所述第二肿瘤抗原为BCMA，或所述第一肿瘤抗原为BCMA，并且所述第二肿瘤抗原为CD19。
4.根据权利要求3所述的双特异性CAR多肽，其中所述第一抗原结合部分为与CD19结合的VHH片段(抗CD19 VHH)，并且所述第二抗原结合部分为与BCMA结合的scFv(抗BCMAscFv)；或者其中所述第一抗
5.根据权利要求4所述的双特异性CAR多肽，其中所述抗CD19 scFv包括SEQ ID NO:7、8或9的氨基酸序列；和/或其中所述抗BCMA VHH包括SEQ ID NO:4、5或6的氨基酸序列。
6.根据权利要求5所述的双特异性CAR多肽，其中a)和b)包括SEQ ID NO:11、44、63、64、67、68、71或79的氨基酸序列，任选地SEQ ID NO:11的氨基酸序列。
7.根据权利要求4所述的双特异性CAR多肽，其中所述抗CD19 VHH包括SEQ ID NO:1、2或3的氨基酸序列；和/或其中所述抗BCMA scFv包括SEQ ID NO:10的氨基酸序列。
8.根据权利要求7所述的双特异性CAR多肽，其中a)和b)包括SEQ ID NO:12、65、66、69、70、72、78或80的氨基酸序列，任选地SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
9.一种双特异性嵌合抗原受体(CAR)多肽，其包括：
10.根据权利要求9所述的双特异性CAR多肽，其中所述与BCMA结合的APRIL截短片段包括与SEQ ID NO:58至少90％相同的氨基酸序列；任选地其中所述APRIL截短片段包括SEQID NO:58的氨基酸序列。
11.根据权利要求9或权利要求10所述的双特异性CAR多肽，其中所述第二抗原结合部分为抗CD19 scFv或抗CD19 VHH。
12.根据权利要求11所述的双特异性CAR多肽，其中所述抗CD19 scFv包括SEQ ID NO:7、8或9的氨基酸序列；或者其中所述抗CD19 VHH包括SEQ ID NO:1、2或3的氨基酸序列。
13.根据权利要求12所述的双特异性CAR多肽，其中a)和b)包括SEQ ID NO:59、60、61或62的氨基酸序列。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的双特异性CAR多肽，其进一步包括位于所述第一抗原结合部分与所述第二抗原结合部分之间的肽接头，任选地其中所述肽接头的长度为约4-40个氨基酸。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的双特异性CAR多肽，其中所述共刺激信号传导结构域来自4-1BB或CD28。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的双特异性CAR多肽，其中所述细胞质信号传导结构域包括CD3z细胞质信号传导结构域、IL-2Rβ细胞质信号传导结构域或其组合。
17.根据权利要求16所述的双特异性CAR多肽，其中所述细胞质信号传导结构域包括CD3z细胞质信号传导结构域，所述CD3z细胞质信号传导结构域任选地包括STAT结合基序。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的双特异性CAR多肽，其进一步包括跨膜结构域、铰链结构域或其组合，所述跨膜结构域、铰链结构域或其组合任选地位于所述第一抗原结合部分或所述第二抗原结合部分与所述共刺激结构域之间。
19.根据权利要求18所述的双特异性CAR多肽，其中所述跨膜结构域和/或所述铰链结构域来自CD8。
20.根据权利要求1所述的双特异性CAR多肽，其包括SEQ ID NO:63-70中的任一者的氨基酸序列。
21.一种基因工程化免疫细胞群体，所述基因工程化免疫细胞表达根据权利要求1至20中任一项所...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种双特异性嵌合抗原受体(car)多肽，其包括：
2.根据权利要求1所述的双特异性car多肽，其中所述第一肿瘤抗原和所述第二肿瘤抗原选自由以下组成的组：5t4、cd2、cd3、cd5、cd7、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd38、cd70、cd123、cd133、cd171、cea、cs1、bcma、baff-r、psma、psca、桥粒芯蛋白(dsg3)、her-2、fap、fshr、nkg2d、gd2、egfrviii、间皮素、ror1、mage、muc1、muc16、gpc3、lewis y、claudin 18.2和vegfrii。
3.根据权利要求1所述的双特异性car多肽，其中所述第一肿瘤抗原为cd19，并且所述第二肿瘤抗原为bcma，或所述第一肿瘤抗原为bcma，并且所述第二肿瘤抗原为cd19。
4.根据权利要求3所述的双特异性car多肽，其中所述第一抗原结合部分为与cd19结合的vhh片段(抗cd19 vhh)，并且所述第二抗原结合部分为与bcma结合的scfv(抗bcmascfv)；或者其中所述第一抗原结合部分为与bcma结合的vhh(抗bcma vhh)，并且所述第二抗原结合部分为与cd19结合的scfv片段(抗cd19 scfv)。
5.根据权利要求4所述的双特异性car多肽，其中所述抗cd19 scfv包括seq id no:7、8或9的氨基酸序列；和/或其中所述抗bcma vhh包括seq id no:4、5或6的氨基酸序列。
6.根据权利要求5所述的双特异性car多肽，其中a)和b)包括seq id no:11、44、63、64、67、68、71或79的氨基酸序列，任选地seq id no:11的氨基酸序列。
7.根据权利要求4所述的双特异性car多肽，其中所述抗cd19 vhh包括seq id no:1、2或3的氨基酸序列；和/或其中所述抗bcma scfv包括seq id no:10的氨基酸序列。
8.根据权利要求7所述的双特异性car多肽，其中a)和b)包括seq id no:12、65、66、69、70、72、78或80的氨基酸序列，任选地seq id no:12的氨基酸序列。
9.一种双特异性嵌合抗原受体(car)多肽，其包括：
10.根据权利要求9所述的双特异性car多肽，其中所述与bcma结合的april截短片段包括与seq id no:58至少90％相同的氨基酸序列；任选地其中所述april截短片段包括seqid no:58的氨基酸序列。
11.根据权利要求9或权利要求10所述的双特异性car多肽，其中所述第二抗原结合部分为抗cd19 scfv或抗cd19 vhh。
12.根据权利要求11所述的双特异性car多肽，其中所述抗cd19 scfv包括seq id no:7、8或9的氨基酸序列；或者其中所述抗cd19 vhh包括seq id no:1、2或3的氨基酸序列。
13.根据权利要求12所述的双特异性car多肽，其中a)和b)包括seq id no:59、60、61或62的氨基酸序列。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的双特异性car多肽，其进一步包括位于所述第一抗原结合部分与所述第二抗原结合部分之间的肽接头，任选地其中所述肽接头的长度为约4-40个氨基酸。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的双特异性car多肽，其中所述共刺激信号传导结构域来自4-1bb或cd28。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的双特异性car多肽，其中所述细胞质信号传导结构域包括cd3z细胞质信号传导结构域、il-2rβ细胞质信号传导结构域或其组合。
17.根据权利要求16所述的双特异性car多肽，其中所述细胞质信号传导结构域包括cd3z细胞质信号传导结构域，所述cd3z细胞质信号传导结构域任选地包括stat结合基序。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的双特异性car多肽，其进一步包括跨膜结构域、铰链结构域或其组合，所述跨膜结构域、铰链结构域或其组合任选地位于所述第一抗原结合部分或所述第二抗原结合部分与所述共刺激结构域之间。
19.根据权利要求18所述的双特异性car多肽，其中所述跨膜结构域和/或所述铰链结构域来自cd8。
20.根据权利要求1所述的双特异性car多肽，其包括seq id no:63-70中的任一者的氨基酸序列。
【专利技术属性】
技术研发人员：B·胡，
申请(专利权)人：细胞编辑有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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