用于降低毒性的免疫细胞修饰以及其在过继细胞疗法中的用途制造技术

一种免疫细胞群，所述免疫细胞群包括具有降低的炎性性质的经修饰免疫细胞，其中此类经修饰免疫细胞可以具有降低的产量的一种或多种炎性细胞因子(例如，白细胞介素2)和/或表达一种或多种炎性细胞因子(例如，白细胞介素6)的一种或多种拮抗剂。本文还提供了产生包括所述经修饰免疫细胞的此类免疫细胞群的方法以及在细胞疗法中使用此类免疫细胞群(例如，以用于治疗癌症、感染性疾病或免疫疾病)的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于降低毒性的免疫细胞修饰以及其在过继细胞疗法中的用途相关申请本申请依据35U.S.C.§119要求于2018年3月14日提交的美国临时申请序列号62/642,821的提交日权益，所述美国临时申请的全部内容通过引用并入本文。
技术介绍
过继细胞转移疗法是一种涉及自体或同种异体免疫细胞的离体扩增以及随后输注到患者中的免疫疗法的类型。可以离体对免疫细胞进行修饰以特异性靶向恶性细胞。过继细胞转移疗法的前景通常受到毒性(例如，细胞因子相关的毒性)的限制。例如，过继细胞转移免疫疗法可能触发细胞因子水平的非生理升高(细胞因子释放综合征)，这可能导致接受者死亡(参见，例如，Morgan等人,《分子疗法(MolecularTherapy)》18(4):843-851,2010)。因此，开发用于降低与过继细胞转移免疫疗法相关的毒性同时维持功效的方法具有重大意义。
技术实现思路
本公开至少部分地基于开发用于减少在过继免疫细胞疗法中使用的免疫细胞的炎性性质和与过继免疫细胞疗法相关的毒性的方法。此类方法可以包括敲除对炎性蛋白进行编码的内源性基因、敲入此类炎性蛋白的拮抗剂和免疫抑制性细胞因子或其组合。因此，本公开的一方面的特征在于免疫细胞群，其包括：(i)第一多个经修饰免疫细胞，所述第一多个经修饰免疫细胞在相同条件下与同一类型的野生型免疫细胞相比产生的一种或多种炎性蛋白的水平降低；以及(ii)第二多个经修饰免疫细胞，所述第二多个经修饰免疫细胞表达所述一种或多种炎性蛋白的一种或多种拮抗剂和/或表达一种或多种免疫抑制性细胞因子。在一些实施例中，在所述第一多个经修饰免疫细胞中的每个细胞中，所述一种或多种炎性蛋白的至少一个内源性等位基因被敲除。在一些实施例中，所述第一多个经修饰免疫细胞、所述第二多个经修饰免疫细胞或两者是T细胞或自然杀伤细胞。在一些实施例中，所述炎性蛋白包括一种或多种炎性细胞因子或其可溶性受体、一种或多种炎性生长因子、一种或多种细胞毒性分子或其组合。示例性炎性细胞因子或其可溶性受体包含但不限于IL2、IL1α、IL1β、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、sIL-1RI、sIL-2Rα、sIL6R、IFNα、IFNβ、IFNγ、MIPα、MIPβ、CSF1、LIF、G-CSF、GM-CSF、CXCL10、CCL5、嗜酸性粒细胞趋化因子、TNF、MCP1、MIG、RAGE、CRP、血管生成素-2和VWF。示例性炎性生长因子包含但不限于TGFα、VEGF、EGF、HGF和FGF。示例性细胞毒性分子包含但不限于穿孔素、颗粒酶和铁蛋白。在一些实施例中，所述第二多个经修饰免疫细胞包括对一种或多种炎性蛋白的所述一种或多种拮抗剂和/或一种或多种免疫抑制性细胞因子进行编码的一种或多种外源性核酸。所述外源性核酸中的至少一种外源性核酸可以被并入所述第一多个经修饰免疫细胞的基因组中。在一些实施例中，引入所述第二多个经修饰免疫细胞中任一个经修饰免疫细胞中的所述一种或多种炎性蛋白的所述一种或多种拮抗剂包括所述炎性蛋白的可溶性受体和/或对所述炎性蛋白具有特异性的抗体。在其它实施例中，将免疫抑制性细胞因子引入所述第二多个经修饰免疫细胞中。示例性免疫抑制性细胞因子包含但不限于TGFβ、IL-4、IL-10、IL-13、IL-33、IL-35和IL-37。在一些实施例中，本文所述的任何所述免疫细胞群的所述第一多个经修饰免疫细胞和所述第二多个免疫细胞可以属于同一类型。可替代地或另外，所述第一多个经修饰免疫细胞与所述第二多个免疫细胞重叠。在另一方面，本公开提供了一种免疫细胞群，其包括第一多个经修饰免疫细胞，所述第一多个经修饰免疫细胞在相同条件下相对于同一类型的野生型免疫细胞产生更少的白细胞介素2(IL-2)。例如，在所述第一多个经修饰免疫细胞中的每个细胞中，至少一个内源性IL-2等位基因被敲除。在一些情况下，所述第一多个经修饰免疫细胞当被活化时，相对于在相同条件下活化的所述野生型免疫细胞产生更少的IL-2。在一些情况下，所述免疫细胞群的总IL-2产量在相同条件下比野生型对应物少约30-95％。例如，所述免疫细胞群的所述总IL-2产量是所述野生型对应物的总IL-2产量的约50％。在一些实施例中，以上所述的免疫细胞群可以进一步包括第二多个经修饰免疫细胞，当与同一类型的野生型免疫细胞相比时，所述第二多个经修饰免疫细胞产生的如本文所述的一种或多种炎性蛋白的水平降低。例如，所述免疫细胞群产生的所述一种或多种炎性蛋白的总水平在相同条件下比野生型对应物的总水平低至少10％。在一些实例中，在所述第二多个经修饰免疫细胞中的每个细胞中，所述一种或多种炎性蛋白的至少一个内源性等位基因被敲除。在一些实施例中，所述第一多个经修饰免疫细胞和所述第二多个经修饰免疫细胞属于同一类型。在其它实施例中，所述第一多个经修饰免疫细胞和所述第二多个经修饰免疫细胞重叠。可替代地或另外，以上所述的免疫细胞群可以进一步包括第三多个经修饰免疫细胞，所述第三多个经修饰免疫细胞表达所述一种或多种炎性蛋白的一种或多种外源性拮抗剂或如本文所述的一种或多种免疫抑制性细胞因子。在一些特定实例中，所述一种或多种炎性蛋白包括IL6，并且IL6的拮抗剂是托珠单抗或西鲁库单抗(sirukumab)或其抗原结合片段(例如，源自托珠单抗或西鲁库单抗的单链抗体片段(scFv))。所述第三多个经修饰免疫细胞可以包括对所述一种或多种细胞因子的所述一种或多种拮抗剂进行编码的一种或多种外源性核酸。所述外源性核酸中的至少一种外源性核酸可以被并入所述第三多个经修饰免疫细胞的基因组中。在一些实例中，所述第三多个经修饰免疫细胞与所述第一多个经修饰免疫细胞、所述第二多个经修饰免疫细胞或两者属于同一类型。在一些实例中，所述第三多个经修饰免疫细胞与所述第一多个经修饰免疫细胞、所述第二多个经修饰免疫细胞或两者重叠。在本文所述的任何或免疫细胞群中，所述免疫细胞可以是T细胞、NK细胞、树突状细胞、巨噬细胞、B细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞、髓源性抑制细胞、间充质干细胞、其前体或其组合。在一些实施例中，所述免疫细胞可以被进一步修饰成表达嵌合抗原受体(CAR)和/或外源性T细胞受体。CAR可以包括胞外配体结合结构域、跨膜结构域以及一个或多个胞内信号传导结构域。在一些实例中，所述胞外配体结合结构域可以包括对细胞表面蛋白具有特异性的单链抗体片段、细胞因子受体的胞外结构域或共刺激受体的胞外结构域。可替代地或另外，所述一个或多个一个或多个胞内信号传导结构域可以包括(i)CD3ζ的信号传导结构域和(ii)来自一种或多种共刺激蛋白或细胞因子受体的一个或多个信号传导结构域。在其它实例中，CAR可以包括来自CD28、4-1BB、2B4、KIR、CD27、OX40、ICOS、MYD88、IL2受体和/或SynNotch的一个或多个刺激结构域(例如，共刺激结构域)。在又另一个实施例中，本公开提供了本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫细胞群，其包括第一多个经修饰免疫细胞，所述第一多个经修饰免疫细胞在相同条件下相对于同一类型的野生型免疫细胞产生更少的白细胞介素2(IL-2)。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180314 US 62/642,8211.一种免疫细胞群，其包括第一多个经修饰免疫细胞，所述第一多个经修饰免疫细胞在相同条件下相对于同一类型的野生型免疫细胞产生更少的白细胞介素2(IL-2)。


2.根据权利要求1所述的免疫细胞群，其中所述第一多个经修饰免疫细胞当被活化时，相对于在相同条件下活化的所述野生型免疫细胞产生更少的IL-2。


3.根据权利要求1或权利要求2所述的免疫细胞群，其中所述免疫细胞群的总IL-2产量在相同条件下比野生型对应物少约30-95％。


4.根据权利要求3所述的免疫细胞群，其中所述免疫细胞群的所述总IL-2产量是所述野生型对应物的总IL-2产量的约50％。


5.根据权利要求1到4中任一项所述的免疫细胞群，其中在所述第一多个经修饰免疫细胞中的每个细胞中，至少一个内源性IL-2等位基因被敲除。


6.根据权利要求1到5中任一项所述的免疫细胞群，其进一步包括第二多个经修饰免疫细胞，所述第二多个经修饰免疫细胞相对于同一类型的野生型免疫细胞产生的炎性蛋白中的一种或多种的水平降低，其中所述炎性蛋白包括一种或多种炎性细胞因子或其可溶性受体、一种或多种炎性生长因子、一种或多种细胞毒性分子或其组合。


7.根据权利要求6所述的免疫细胞群，其中所述一种或多种炎性细胞因子或其可溶性受体选自由以下组成的组：IL1α、IL1β、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、sIL-1RI、sIL-2Rα、sIL6R、IFNα、IFNβ、IFNγ、MIPα、MIPβ、CSF1、LIF、G-CSF、GM-CSF、CXCL10、CCL5、嗜酸性粒细胞趋化因子、TNF、MCP1、MIG、RAGE、CRP、血管生成素-2和VWF。


8.根据权利要求6所述的免疫细胞群，其中所述一种或多种炎性生长因子选自由以下组成的组：TGFα、VEGF、EGF、HGF和FGF。


9.根据权利要求6所述的免疫细胞群，其中所述一种或多种细胞毒性分子选自由穿孔素、颗粒酶和铁蛋白组成的组。


10.根据权利要求6到9中任一项所述的免疫细胞群，其中由所述免疫细胞群产生的所述一种或多种炎性蛋白的总水平在相同条件下比野生型对应物的总水平低至少10％。


11.根据权利要求6到10中任一项所述的免疫细胞群，其中在所述第二多个经修饰免疫细胞中的每个细胞中，所述一种或多种炎性蛋白的至少一个内源性等位基因被敲除。


12.根据权利要求6到11中任一项所述的免疫细胞群，其中所述第一多个经修饰免疫细胞和所述第二多个经修饰免疫细胞属于同一类型。


13.根据权利要求12所述的免疫细胞群，其中所述第一多个经修饰免疫细胞和所述第二多个经修饰免疫细胞重叠。


14.根据权利要求1到13中任一项所述的免疫细胞群，其进一步包括第三多个经修饰免疫细胞，所述第三多个经修饰免疫细胞表达所述一种或多种炎性蛋白的一种或多种外源性拮抗剂和/或一种或多种免疫抑制性细胞因子。


15.根据权利要求14所述的免疫细胞群，其中所述一种或多种免疫抑制性细胞因子选自由以下组成的组：TGFβ、IL-4、IL-10、IL-13、IL-33、IL-35和IL-37。


16.根据权利要求14所述的免疫细胞群，其中所述一种或多种炎性蛋白的所述一种或多种外源性拮抗剂包括炎性蛋白的可溶性受体和/或对炎性蛋白具有特异性的抗体。


17.根据权利要求14所述的免疫细胞群，其中所述一种或多种炎性蛋白包括IL6，并且IL6的拮抗剂是托珠单抗(tocilizumab)、西鲁库单抗(sirukumab)、沙利鲁单抗(sarilumab)、司妥昔单抗(siltuximab)、奥洛珠单抗(olokizumab)、克拉扎珠单抗(clazakizumab)或其抗原结合片段。


18.根据权利要求17所述的免疫细胞群，其中所述拮抗剂是单链抗体片段(scFv)。


19.根据权利要求18所述的免疫细胞群，其中所述scFv包括SEQIDNO:22的氨基酸序列。


20.根据权利要求14到19中任一项所述的免疫细胞群，其中所述第三多个经修饰免疫细胞包括对所述一种或多种炎性蛋白的所述一种或多种外源性拮抗剂和/或所述一种或多种免疫抑制性细胞因子进行编码的一种或多种外源性核酸。


21.根据权利要求20所述的免疫细胞群，其中所述外源性核酸中的至少一种外源性核酸被并入所述第三多个经修饰免疫细胞的基因组中。


22.根据权利要求14到21中任一项所述的免疫细胞群，其中所述第三多个经修饰免疫细胞与所述第一多个经修饰免疫细胞、所述第二多个经修饰免疫细胞或两者属于同一类型。


23.根据权利要求22所述的免疫细胞群，其中所述第三多个经修饰免疫细胞与所述第一多个经修饰免疫细胞、所述第二多个经修饰免疫细胞或两者重叠。


24.根据权利要求1到23中任一项所述的免疫细胞群，其中所述免疫细胞是T细胞、NK细胞、树突状细胞、巨噬细胞、B细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞、髓源性抑制细胞、间充质干细胞、其前体或其组合。


25.根据权利要求1到24中任一项所述的免疫细胞群，其中所述免疫细胞表达嵌合抗原受体(CAR)和/或外源性T细胞受体，其中所述CAR包括胞外配体结合结构域、跨膜结构域以及一个或多个胞内信号传导结构域，并且其中任选地，所述免疫细胞的内源性TCR被敲除。


26.根据权利要求25所述的免疫细胞群，其中所述胞外配体结合结构域包括对细胞表面蛋白具有特异性的单链抗体片段、细胞因子受体的胞外结构域或共刺激受体的胞外结构域。


27.根据权利要求26所述的免疫细胞群，其中所述一个或多个胞内信号传导结构域包括(i)CD3ζ的信号传导结构域和/或(ii)来自一种或多种共刺激蛋白或细胞因子受体的一个或多个信号传导结构域。


28.根据权利要求27所述的免疫细胞群，其中所述共刺激蛋白或细胞因子受体选自由以下组成的组：CD28、4-1BB、2B4、KIR、CD27、OX40、ICOS、MYD88、IL2受体和SynNotch。


29.一种免疫细胞群，其包括：
(i)第一多个经修饰免疫细胞，所述第一多个经修饰免疫细胞在相同条件下与同一类型的野生型免疫细胞相比产生的一种或多种炎性蛋白的水平降低；以及
(ii)第二多个经修饰免疫细胞，所述第二多个经修饰免疫细胞表达所述一种或多种炎性蛋白的一种或多种拮抗剂和/或表达一种或多种免疫抑制性细胞因子。


30.根据权利要求29所述的免疫细胞群，其中所述炎性蛋白包括一种或多种炎性细胞因子或其可溶性受体、一种或多种炎性生长因子、一种或多种细胞毒性分子或其组合。


31.根据权利要求30所述的免疫细胞群，其中所述一种或多种炎性细胞因子或其可溶性受体选自由以下组成的组：IL2、IL1α、IL1β、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、sIL-1RI、sIL-2Rα、sIL6R、IFNα、IFNβ、IFNγ、MIPα、MIPβ、CSF1、LIF、G-CSF、GM-CSF、CXCL10、CCL5、嗜酸性粒细胞趋化因子、TNF、MCP1、MIG、RAGE、CRP、血管生成素-2和VWF。


32.根据权利要求30到31中任一项所述的免疫细胞群，其中所述一种或多种炎性生长因子选自由以下组成的组：TGFα、VEGF、EGF、HGF和FGF。


33.根据权利要求30到32中任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：B胡，
申请(专利权)人：细胞编辑有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US