敲除Roquin-1和/或Regnase-1基因的肿瘤浸润淋巴细胞及其应用制造技术

本发明专利技术公开了敲除Roquin‑1和/或Regnase‑1基因的肿瘤浸润淋巴细胞及其应用。本发明专利技术通过在肿瘤浸润淋巴细胞中敲除Roquin‑1和/或Regnase‑1基因，提高了肿瘤浸润淋巴细胞的增殖能力与抗瘤能力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞治疗领域，特别涉及经修饰的肿瘤浸润淋巴细胞及其应用。

技术介绍

1、细胞治疗是目前肿瘤免疫疗法的热门领域，目前已有多款细胞治疗药品上市，其中最多的一种产品形式为car-t细胞，除此之外，如tcr-t、nk、car-m以及til等疗法也都是众多药企和生物技术公司争相研发的产品。然而，尽管目前car-t及tcr-t疗法已经在临床取得一些进展，但是针对实体瘤的疗效还有所缺陷，尤其是在克服肿瘤微环境，促进增殖，减少耗竭，增强肿瘤杀伤持续性等方面还具有非常大的挑战。

2、肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,til)疗法是一种新型的细胞免疫疗法。这类淋巴细胞一般通过两个主要步骤获得，首先使用含有高浓度白介素-2(interleukin-2,il-2)的培养基培养从患者处获取的肿瘤组织碎片，使t细胞爬出肿瘤组织，从而获得少量til；然后与人源pbmc滋养层细胞共培养，使til大量扩增，从而获取足够临床使用的til。这类细胞因为具有天然的归巢能力，可以很好地浸润到肿瘤组织中。p>

3、相对于本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种经修饰的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)，其中Roquin-1基因或其基因产物的表达和/或功能被降低或清除。

2.一种经修饰的肿瘤浸润淋巴细胞，其中Roquin-1和Regnase-1基因或其基因产物的表达和/或功能被降低或清除。

3.根据权利要求1或2任一项所述经修饰的TIL，与未修饰或对照TIL相比，所述TIL的Roquin-1和/或Regnase-1基因或其基因产物的表达和/或功能被分别降低了至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或100％。

4.根据权利要求1-3任一项所述经修饰的TIL，与未修饰或对照TIL相...

【技术特征摘要】

1.一种经修饰的肿瘤浸润淋巴细胞(til)，其中roquin-1基因或其基因产物的表达和/或功能被降低或清除。

2.一种经修饰的肿瘤浸润淋巴细胞，其中roquin-1和regnase-1基因或其基因产物的表达和/或功能被降低或清除。

3.根据权利要求1或2任一项所述经修饰的til，与未修饰或对照til相比，所述til的roquin-1和/或regnase-1基因或其基因产物的表达和/或功能被分别降低了至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或100％。

4.根据权利要求1-3任一项所述经修饰的til，与未修饰或对照til相比，所述til的性质获得改善。

5.根据权利要求4所述经修饰的til，所述改善的til性质包含选自以下组的一种或多种：til细胞增殖能力提高、细胞因子分泌能力提高、颗粒酶分泌能力提高、中央记忆t细胞(central memory t cell,tcm)比例提高、il-2依赖降低、肿瘤细胞杀伤能力提高。

6.一种制备权利要求1-5任一项所述经修饰的til的方法，其中roquin-1和/或regnase-1基因或其基因产物采用以下处理方式中的一种或多种：基因编辑技术、rna干扰技术、protac技术、抗体或小分子抑制剂。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其中基因编辑技术采用以下方式中的一种或多种：crispr/cas技术、转录激活样效应因子核酸酶(transcription activator-like effectornuclease,talen)技术、锌指核酸酶(zinc-finger nuclease,zfn)技术、单或者多碱基突变、先导编辑或定点敲入。

8.根据权利要求7所述的crispr/cas技术，其中所述cas类型包括：cas9、cas12a、cas3、cas13、cas14、cas7、cas8、cas10和cas11。

9.根据权利要求8所述的crispr/cas9技术，其中所述cas9类型包括：spcas9、sacas9、spcas9-hf、espcas9、xcas9和cpf1。

10.根据权利要求6-9任一项所述制备方法，其中roquin-1和/或regnase-1基因通过crispr/cas技术被破坏和/或敲除。

11.根据权利要求6-10任一项所述制备方法，其中roquin-1和/或regnase-1基因通过crispr/cas9技术被破坏和/或敲除。

12.根据权利要求6-11任一项所述制备方法，其中所述crispr/cas9技术包含向权利要求1-5任一项所述til中引入同时含有靶向目标基因的单链指导rna(sgrna)及cas9核酸酶的crispr/cas9体系。

13.根据权利要求6-12任一项所述制备方法，其中所述sgrna包括靶向roquin-1基因的sgrna和靶向regnase-1基因的sgrna。

14.根据权利要求6-13任一项所述制备方法，其中所述crispr/cas9技术可分别或同时使用靶向roquin-1基因的sgrna和靶向regnase-1基因的sgrna。

15.根据权利要求6-14任一项所述制备方法，其中所述靶向roquin-1基因的sgrna中的靶向序列为cctgaataaactccaccgca(seq id no:1)或者与seq id no:1具...

【专利技术属性】
技术研发人员：董晨，邹江波，龚剑，张松梅，谢玲，李洪霞，李健强，李鑫磊，
申请(专利权)人：毕诺济上海生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：