【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学，具体为一种生物样本rna释放保存液及其制备方法。
技术介绍
1、核酸检测作为一种常用的诊断方法，在诊断疾病、监测病毒传播、追踪疫情和采取相应的控制措施等方面都具有十分重要的意义，由于内源及外源rna酶的广泛存在，生物样本中的rna很容易在样本采集、保存、运输中发生降解，从而影响后续rna检测的准确性。
2、为了有效裂解生物样本中的细胞，并保护释放出的rna在保存和运输过程中不被降解，拭子样本释放保存液中通常需要加入高浓度的表面活性剂和胍盐等。因此，在常规病原微生物的核酸检测之前，需经过繁琐的核酸提取步骤，以避免保存液中高浓度的表面活性剂或胍盐等成分干扰后续核酸检测的pcr反应。
3、传统的核酸提取方法(磁珠法、热裂解法、柱提法)普遍耗时长，而且当样本量过多时，易在核酸提取过程中造成污染。在核酸提取过程中如不进行充分洗涤，残留的保存液成分仍易对后续pcr检测造成抑制，导致结果的异常。
4、开发一种可有效裂解拭子样本，稳定保存rna，并兼容后续pcr检测体系的样本rna释放保存液可有效缩短检测时间，提高检测效率，具有重要的意义。
5、目前已有几种无需核酸提取，可用于直扩法检测的rna保存液面世。例如申请号为：202110893486.6的中国专利公开一种生物样本核酸释放保存剂，该专利技术验证了其保存液可在常温下稳定保存β-actin基因，但对其他基因的保存效果未知，且常温保存无法满足高温天气下的样本运输等需求；
6、又如申请号为：202010538
7、还有如申请号为：202011391579.0的中国专利公开一种病毒样本rna保存液及其制备方法，该专利技术也只验证了其保存液在常温条件下对假病毒rna样本的保存效果。
8、因此本领域仍需一种能在更高温度下稳定保存拭子样本中多种rna，且兼容不同核酸检测体系的生物样本rna释放保存液。
技术实现思路
1、(一)解决的技术问题
2、为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种生物样本rna释放保存液配方，用于拭子样本中多种rna的释放与稳定保存。使用本配方保存的拭子样本无需进行后续核酸提取即可直接用于rna检测，且检测兼容探针法与染料法。本配方在37℃可稳定保存样本中rna一周以上。
3、(二)技术方案
4、基于此，本专利技术提供如下技术方案：一种生物样本rna释放保存液及其制备方法，包括以下组分：酸性缓冲液、表面活性剂、胍盐、铵盐、抗生素、rna酶抑制剂和还原剂。其中，酸性缓冲液可选择醋酸钠/醋酸缓冲液，柠檬酸钠/柠檬酸缓冲液，柠檬酸/氢氧化钠/盐酸缓冲液，琥珀酸缓冲液或邻苯二甲酸氢钾/氢氧化钠缓冲液；表面活性剂是一种或多种选自以下的非离子型表面活性剂：曲拉通x-100，吐温20，失水山梨醇单月桂酸酯(span-20)，乙基苯基聚乙二醇(np-40)；或一种或多种选自以下的阳离子型表面活性剂：季铵盐型表面活性剂，阳离子瓜尔胶；或一种或多种选自以下的阴离子型表面活性剂：十二烷基硫酸钠，烷基苯磺酸盐，烷基磺酸盐，烷基硫酸盐，月桂酰肌氨酸钠；或选自以下的两性表面活性剂：月桂基甜菜碱，羧酸基甜菜碱，磺基甜菜碱，磷酸脂甜菜碱；胍盐可选择盐酸胍或异硫氰酸胍；铵盐可选择硫酸铵或醋酸铵；抗生素可选择大观霉素，庆大霉素，链霉素，卡那霉素；还原剂可选择二硫苏糖醇，三(2-羧乙基)膦，β-巯基乙醇。
5、优选的，各组分浓度范围为：10-100mm酸性缓冲液，ph 4.5-6.0，0.1-2.0％(m/v)表面活性剂，0.1-1m胍盐，0.1-2mm铵盐，10-100μg/ml抗生素，0.5-20μg/ml rna酶抑制剂，1-6mm还原剂。
6、优选的，所述表活为吐温20/span-20/十二烷基硫酸钠/月桂酰肌氨酸钠/月桂基甜菜碱中的一种或两种或三种。
7、优选的，包括以下步骤：
8、步骤s1：使用无核酸酶水配制酸性缓冲液母液，调节ph至4.5-6.0；
9、步骤s2：使用无核酸酶水分别溶解胍盐，铵盐，抗生素和还原剂，充分颠倒混匀，制得母液；
10、步骤s3：使用无核酸酶水分别稀释表面活性剂，充分颠倒混匀，制得母液；
11、步骤s4：将各母液按比例混合均匀，最后加入rna酶抑制剂，使用无核酸酶水定容后充分颠倒混匀；
12、步骤s5：使各组分最终浓度为上述中的浓度，即制备得到生物样本rna释放保存液，此生物样本rna释放保存液可用于鼻咽拭子及唾液样本中病毒rna的释放保存。将拭子样本加入0.5-2ml保存液中，3000rpm涡旋震荡1分钟后即可用于后续rna检测，无需加热样本也无需后续核酸提取。使用此生物样本rna释放保存液，rna可在37℃稳定保存一周以上，-20℃以下可长期保存。
13、(三)有益效果
14、与现有技术相比，本专利技术提供了一种生物样本rna释放保存液及其制备方法，具备以下有益效果：
15、该一种生物样本rna释放保存液及其制备方法，本专利技术在样本处理方面比传统的核酸提取更加方便快捷，且避免多次开盖或样本量多时造成的气溶胶污染。验证结果显示，本专利技术裂解保存液可在37℃稳定保存多种rna片段，对长片段也有优秀的保存效果，保证后续检出。本专利技术保存液可兼容后续qpcr检测的探针法和染料法，对后续pcr检测试剂无特殊要求。在保存时间范围内，目的基因检出的ct值稳定，未出现ct值明显升高情况，更容易通过检测结果对原始病毒载量进行判断，对临床检测有重要帮助。
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1.一种生物样本RNA释放保存液，其特征在于：包括以下组分：醋酸钠/醋酸、曲拉通X-100、吐温20、失水山梨醇单月桂酸酯(Span-20)、盐酸胍、硫酸铵、庆大霉素、RNA酶抑制剂和二硫苏糖醇。
2.根据权利要求1所述的一种生物样本RNA释放保存液，其特征在于：各组分浓度范围为：10-100mM醋酸钠/醋酸，pH 4.5-6.0，0.1-2.0％(m/v)曲拉通X-100，0.1-2.0％(m/v)吐温20，0.1-2.0％(m/v)Span-20，0.1-1M盐酸胍，0.1-2mM硫酸铵，10-100μg/mL庆大霉素，0.5-20μg/mL RNA酶抑制剂，1-6mM二硫苏糖醇。
3.根据权利要求1所述的一种生物样本RNA释放保存液，其特征在于：所述曲拉通X-100/吐温20/Span-20为一种或两种或三种。
4.一种如权利要求1-3任意一项所述的生物样本RNA释放保存液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
【技术特征摘要】
1.一种生物样本rna释放保存液，其特征在于：包括以下组分：醋酸钠/醋酸、曲拉通x-100、吐温20、失水山梨醇单月桂酸酯(span-20)、盐酸胍、硫酸铵、庆大霉素、rna酶抑制剂和二硫苏糖醇。
2.根据权利要求1所述的一种生物样本rna释放保存液，其特征在于：各组分浓度范围为：10-100mm醋酸钠/醋酸，ph 4.5-6.0，0.1-2.0％(m/v)曲拉通x-100，0.1-2.0％(m/v)吐温20，0.1...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋丹凤，邹争争，
申请(专利权)人：新镁上海生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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