【技术实现步骤摘要】
本专利技术属生物，具体涉及一种基于酮体代谢酶编码基因的结肠癌检测试剂盒及应用。
技术介绍
1、结肠癌(colonic carcinoma)是发生在大肠腺上皮的恶性肿瘤，近年来发病率逐年升高，在发达国家，由于早期检测和更加有效的治疗方式，结肠癌的死亡率显著降低，但在全世界癌症死亡率原因中，结肠癌仍排在第四位，主要表现为便血、腹痛、体重下降、肠梗阻等，严重威胁患者的生活质量，随着肿瘤检测手段与治疗方法的进步，结肠癌患者的存活率得到显著提高，但总体生存期以及无进展生存期仍然较低。结肠癌是发展相对较慢的肿瘤，其早期症状常缺乏特异性，很多结肠癌患者发现时已属中晚期，且超过1/3的病人在诊断时已经发生了转移。因此对于结肠癌的治疗还是应注重早期发现早期诊断和早期治疗。此外，临床上常选用免疫治疗和靶向药物治疗作为结肠癌术后的辅助治疗，然而，近30％的患者术后肿瘤复发。因此，如果能够通过有效的早期诊断结肠癌或者判断患者预后，预测肿瘤复发，可降低复发转移率，延长患者的生存期。而筛选出可靠的诊断或预测结肠癌的分子标志物是需要迫切解决的问题，对于诊断结肠癌、降低复发转移率，延长患者的生存时间有重要的临床意义。
2、基于酮体生成的基因包括bdh2、acat1、hmgcs2、oxct1，研究表明这些基因不仅参与代谢过程，还可作为肿瘤诊断和预后的分子标志物，之前我们研究发现bdh2、acat1、hmgcs2、oxct1在鼻咽癌和肾透明细胞癌中表达差异显著，通过生物信息学发现，这些基因在结肠癌中表达差异同样显著，尤其联合四个基因做联合分析。因此，它
3、现如今，rt-pcr技术常被用于肿瘤检测，敏感性比ihc提高10-100倍，在基因表达水平分析和定量检测等方面得到广泛应用。实时荧光定量rt-pcr是在实时rt-pcr基础上发展起来的一项新技术，其探针特异地同目的模板结合，与其他rt-pcr技术相比，实时rt-pcr对mrna的检测和定量能提供更多的信息，耗时更少，灵敏性、特异性、准确性都大大提高。
4、目前尚无基于酮体生成的基因bdh2、acat1、hmgcs2、oxct1在结肠癌中相关的研究报道，这些基因在结肠癌发生发展中的分子机制仍不清楚。并且目前还未见bdh2、acat1、hmgcs2、oxct1在制备结肠癌诊断或预测结肠癌患者预后的应用的研究报道。
技术实现思路
1、针对上述现有技术存在的问题，本专利技术提供一种基于酮体代谢酶编码基因的结肠癌检测试剂盒及应用，目的在于通过实时快速地荧光定量rt-pcr对待测样品中的酮体生成基因bdh2、acat1、hmgcs2、oxct1进行定量检测，以作为结肠癌诊断的依据之一，为结肠癌早期筛查和预后制定相应的治疗方案提供依据。
2、为了实现上述目的，本专利技术的具体方案如下：
3、一种酮体代谢酶编码基因bdh2、acat1、hmgcs2、oxct1在制备结肠癌检测试剂盒中的应用。
4、rt-pcr扩增酮体代谢酶编码基因bdh2、acat1、hmgcs2、oxct1的引物在制备结肠癌检测试剂盒中的应用。
5、进一步地，所述bdh2基因核苷酸序列如seq id no.1和seq id no.2所示，acat1基因核苷酸序列如seq id no.3和seq id no.4所示，hmgcs2基因核苷酸序列如seq id no.5和seq id no.6所示，oxct1基因核苷酸序列如seq id no.7和seq id no.8所示。
6、一种基于酮体代谢酶编码基因的结肠癌检测试剂盒，包括酮体代谢酶编码基因bdh2、acat1、hmgcs2、oxct1或rt-pcr扩增酮体代谢酶编码基因bdh2、acat1、hmgcs2、oxct1的引物。
7、进一步地，还包括以人的β-actin基因作为内参对照，所述β-actin基因核苷酸序列如seq id no.9和seq id no.10所示。
8、本专利技术的优点
9、与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：
10、(1)以本专利技术标记物酮体代谢酶编码基因bdh2、acat1、hmgcs2、oxct1为基础，构建结肠癌的诊断模型，该诊断模型特异性好，由于该酮体代谢酶编码基因bdh2、acat1、hmgcs2、oxct1在结肠正常组织或良性病变中有很高的特异性表达，而在结肠癌中低表达，因此检测患者的外周血、肿瘤组织等标本中有无bdh2、acat1、hmgcs2、oxct1的表达，能对结肠癌的诊断(尤其是对肿瘤良性和恶性的鉴别)和预后治疗提供有力的证据，还能为肿瘤转移和复发情况的监测提供帮助。
11、(2)本专利技术标记物酮体代谢酶编码基因bdh2、acat1、hmgcs2、oxct1能对肿瘤的良性和恶性进行初步鉴别，联合四基因auc可达0.997，诊断效果快速且良好。
12、(3)该检测方法改进现有的荧光定量rt—pcr技术，并建立了一套完全的质量控制方法，使之具有灵敏、稳定、操作简便等的特点，消除了bdh2、acat1、hmgcs2、oxct1基因mrna荧光定量rt-pcr检测的假阳性和假阴性，使之成为一种结肠癌临床诊断的实用性诊断方法，且耗时短，仅需要4小时左右完成测试，需要检测的样品量极少。
13、(4)该检测方法建立了质控品，为严格对pcr检测进行定量控制提供了必要条件，目前研究资料还无此报道，在量化处理结肠癌临床诊断结果方面，为消除bdh2、acat1、hmgcs2、oxct1基因荧光定量rt-pcr检测的假阳性和假阴性打下了基础。
14、(5)该检测方法建立了一套完整的质量控制方法，重点在消除临床样本检测的假阴性和假阳性，这一套完整的质量控制方法是互相联系，不可分割的，所以称之为质量控制方法的一种组合，具有可靠性和安全性，不仅对于结肠癌临床样本检测的准确性很高，而具有广泛的实用性，能在临床上推广，对于其它mrna荧光定量rt-pcr检测的实用性，临床上推广也具有重要参考价值。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.酮体代谢酶编码基因BDH2、ACAT1、HMGCS2、OXCT1在制备结肠癌检测试剂盒中的应用。
2.RT-PCR扩增权利要求1中酮体代谢酶编码基因BDH2、ACAT1、HMGCS2、OXCT1的引物在制备结肠癌检测试剂盒中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述BDH2基因核苷酸序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示，ACAT1基因核苷酸序列如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示，HMGCS2基因核苷酸序列如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示，OXCT1基因核苷酸序列如SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示。
4.一种基于酮体代谢酶编码基因的结肠癌检测试剂盒，其特征在于，包括酮体代谢酶编码基因BDH2、ACAT1、HMGCS2、OXCT1或RT-PCR扩增酮体代谢酶编码基因BDH2、ACAT1、HMGCS2、OXCT1的引物。
5.根据权利要求4所述的一种基于酮体代谢酶编码基因的结肠癌检测试剂盒，其特征在于，还包括以人的β-actin基因作为内参对照，
...【技术特征摘要】
1.酮体代谢酶编码基因bdh2、acat1、hmgcs2、oxct1在制备结肠癌检测试剂盒中的应用。
2.rt-pcr扩增权利要求1中酮体代谢酶编码基因bdh2、acat1、hmgcs2、oxct1的引物在制备结肠癌检测试剂盒中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述bdh2基因核苷酸序列如seq id no.1和seq id no.2所示，acat1基因核苷酸序列如seq id no.3和seq id no.4所示，hmgcs2基因核苷酸序列如seq id no.5和seq id no.6所示...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁紫渊，周晓莹，潘信利，张哲，胡文进，赵蔚林，黄婷婷，褚洁梅，肖雪，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。