原代下丘脑神经干细胞体外定分化专用培养基及定向分化方法技术

本发明专利技术涉及干细胞定向分化技术领域，且公开了原代下丘脑神经干细胞体外定向分化专用培养基及定向分化方法。通过向下丘脑神经干细胞培养基I加入Matrigel基质胶构建干细胞三维分化模式促进内分泌的定向分化；定向分化专用培养基I包含化合物Notch通路抑制剂DAPT和神经生长因子(NGF)，定向分化专用培养基II包含NGF和脑源性神经营养因子(BDNF)。应用以上两种培养基两步培养诱导原代下丘脑神经干细胞定向分化为类GnRH(促性腺激素释放激素)神经元。本发明专利技术利用Matrigel基质胶模拟细胞基底膜结构和神经营养因子诱导实现分泌GnRH神经元的定向分化，操作便捷有效，为神经营养因子治疗GnRH神经元缺乏或功能不足提供了科学依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于神经干细胞定向分化，具体为原代下丘脑神经干细胞体外定分化专用培养基及定向分化方法。

技术介绍

1、随着年龄的增长神经内分泌紊乱，下丘脑神经元分泌功能退化。下丘脑促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasinghormone，gnrh)分泌不足引起垂体-性腺功能低下，会导致迟发性低促性腺激素性性腺功能减退症(loh)，表现为性激素下降、精子质量降低。调动内源性神经干细胞分化为新生gnrh神经元，实现机体及时补充具有脉冲生理规律的gnrh激素，是彻底解决gnrh不足缓解loh症状的长效方法。

2、内源性干细胞定向分化是弥补退化神经元的最佳来源。目前人类对干细胞定向分化技术的掌握仍不完善，对这一领域的研究具有巨大的应用前景。近10年研究发现成年哺乳类动物脑部有下丘脑神经干细胞(hypothalamic neural stem/progenitor cells，htnscs)的存活，且具有分化潜能。成年人、小鼠、大鼠、鸽下丘脑存在部分新生gnrh神经元，可能来源于htnscs。建立有效的htnscs体外定向诱导分化为类gn本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种原代下丘脑神经干细胞体外定向分化专用培养基，其特征在于，包括依次使用的以下培养基：

2.根据权利要求1所述的原代下丘脑神经干细胞体外定向分化专用培养基，其特征在于，还包括使用的以下培养基：

3.一种原代下丘脑神经干细胞体外定向分化方法，其特征在于：采用权利要求1或2所述的原代下丘脑神经干细胞体外定向分化专用培养基进行培养。

4.根据权利要求3所述的原代下丘脑神经干细胞体外定向分化方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的原代下丘脑神经干细胞体外定向分化方法，其特征在于：所述步骤S1中在35～38℃环境下消化的时间为5...

【技术特征摘要】

1.一种原代下丘脑神经干细胞体外定向分化专用培养基，其特征在于，包括依次使用的以下培养基：

2.根据权利要求1所述的原代下丘脑神经干细胞体外定向分化专用培养基，其特征在于，还包括使用的以下培养基：

3.一种原代下丘脑神经干细胞体外定向分化方法，其特征在于：采用权利要求1或2所述的原代下丘脑神经干细胞体外定向分化专用培养基进行培养。

4.根据权利要求3所述的原代下丘脑神经干细胞体外定向分化方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的原代下丘脑神经干细胞体外定向分化方法，其特征在于：所述步骤s1中在35～38℃环境下消化的时间为5～15min，每3～5min轻柔吹打一次。

6.根据权利要求4所述的原代下丘脑神经干细胞体外定向分化方法，其特征在于，所述步骤s3中将p1代干细胞常规条件下培养消化传代致p3代干细胞的过程为：

7.根据权利要求4...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗娇，蔡优，王玉龙，何伟逸，刘家榜，肖鹏，潘小华，霍永阳，赵留洋，
申请(专利权)人：深圳市大鹏新区南澳人民医院，
类型：发明
国别省市：