【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及蛋白检测，具体为一种用于天然自免抗原纯化的色谱柱串联与质谱结合方法。
技术介绍
1、体外诊断中，自免抗原是用于检测自身免疫性疾病(如：红斑狼疮、类风湿、i型糖尿病、白癜风等。)的主要原料。自免抗原种类繁多，属性不一。当前，市面上的自免抗原基本源于进口的天然抗原。
2、当前，自免抗原的纯化主要采用：
3、1)蛋白提取-蛋白浓缩沉淀-离子交换色谱-分子筛。该方法运用比较普遍，主要是通过将组织捣碎后，用蛋白提取缓冲液提取总蛋白，然后通过硫酸铵或者丙酮对蛋白进行沉淀浓缩，接着根据不同蛋白等电点的差异性将沉淀溶解后通过离子交换层析柱进行初步分离，分离所得组分通过western blot找出目的蛋白所在位置，并根据蛋白分子量的差异性，将对应目的组分通过分子筛进一步分离纯化，收集各纯化组分后再次通过wb检测目的蛋白所在组分，从而得到相对高纯度的目的蛋白；
4、2)通过免疫分离纯化获得目的蛋白。主要原理是根据抗原抗体的亲和结合将目的蛋白从混合物中纯化出来：提取总蛋白，将总蛋白通过固定有目标蛋白对应抗体的固定相(磁珠或琼脂糖)，目的蛋白与固定相的抗体相结合，然后洗掉非结合蛋白，最后经过洗脱就能获得高纯度的目的蛋白。
5、然而1)中的每一步骤都需要通过wb检测目的蛋白；此外，每轮纯化都只能针对某一个蛋白(抗原)，这些都大大增加了纯化时间及耗材成本(主要是wb检测的抗体成本)；并且2)仅适于常规科研的少量需求，很难大量纯化实现生产。
技术实现思路
...【技术保护点】
1.一种用于天然自免抗原纯化的色谱柱串联与质谱结合方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种用于天然自免抗原纯化的色谱柱串联与质谱结合方法，其特征在于，所述总蛋白提取物是通过硫酸铵沉淀后得到的。
3.根据权利要求1所述的一种用于天然自免抗原纯化的色谱柱串联与质谱结合方法，其特征在于，所述缓冲液为20mM HEPES，pH 8.0。
4.根据权利要求1所述的一种用于天然自免抗原纯化的色谱柱串联与质谱结合方法，其特征在于，所述阳离子-阴离子交换柱是通过FPLC蛋白纯化系统以串联形式安装的。
5.根据权利要求1所述的一种用于天然自免抗原纯化的色谱柱串联与质谱结合方法，其特征在于，所述洗脱液为20mM HEPES，pH 8.0，1M NaCl。
6.根据权利要求1所述的一种用于天然自免抗原纯化的色谱柱串联与质谱结合方法，其特征在于，所述质谱鉴定是用于确定自免抗原在阳离子或阴离子交换柱中的洗脱位置。
7.根据权利要求1所述的一种用于天然自免抗原纯化的色谱柱串联与质谱结合方法，其特征在于，所述分子筛纯
8.一种用于天然自免抗原纯化的色谱柱串联与质谱结合的系统，基于如权利要求1-7任一项所述的一种用于天然自免抗原纯化的色谱柱串联与质谱结合方法，其特征在于，包括：
9.根据权利要求8所述的一种用于天然自免抗原纯化的色谱柱串联与质谱结合的系统，其特征在于，所述阳离子和阴离子交换柱通过FPLC蛋白纯化系统进行串联。
10.根据权利要求8所述的一种用于天然自免抗原纯化的色谱柱串联与质谱结合的系统，其特征在于，所述质谱仪用于分析从阳离子和阴离子交换柱洗脱得到的各组分。
...【技术特征摘要】
1.一种用于天然自免抗原纯化的色谱柱串联与质谱结合方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种用于天然自免抗原纯化的色谱柱串联与质谱结合方法，其特征在于，所述总蛋白提取物是通过硫酸铵沉淀后得到的。
3.根据权利要求1所述的一种用于天然自免抗原纯化的色谱柱串联与质谱结合方法，其特征在于，所述缓冲液为20mm hepes，ph 8.0。
4.根据权利要求1所述的一种用于天然自免抗原纯化的色谱柱串联与质谱结合方法，其特征在于，所述阳离子-阴离子交换柱是通过fplc蛋白纯化系统以串联形式安装的。
5.根据权利要求1所述的一种用于天然自免抗原纯化的色谱柱串联与质谱结合方法，其特征在于，所述洗脱液为20mm hepes，ph 8.0，1m nacl。
6.根据权利要求1所述的一种用于天然...
【专利技术属性】
技术研发人员：熊志军，白方文，王康鑫，谢露露，张承峰，刘蝶，
申请(专利权)人：安徽梅赛泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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