【技术实现步骤摘要】
本专利技术登革热病毒检测领域，特别涉及一种针对4种血清型登革热病毒的全基因组捕获试剂盒及应用。
技术介绍
1、登革热病毒(denv)是黄病毒科黄病毒属蚊媒病原体，该病毒主要在其载体埃及伊蚊和白纹伊蚊存在的热带地区的城市或半城市地区传播，估计每年感染3.9亿人，其中约1亿人表现出临床症状。登革热病毒(dengue virus)有四种主要的血清型，分别是den-1、den-2、den-3和den-4，这四种血清型是属于同一种病毒，但是在人体内表现为不同的免疫反应。人感染一种血清型的登革热病毒后，会产生对该血清型的免疫保护，但对其他血清型的登革热病毒可能没有足够的免疫力，多次感染不同血清型的登革热病毒可能增加患严重登革热的风险，因为交叉反应的免疫反应可能引发更严重的疾病。
2、从历史上看，denv的分子系统发育研究依赖于包膜(e)基因(～1.5kbp)的测序，该基因编码病毒的主要表面抗原，但是如果为了获取更好的系统发育分辨率就需要获得更长的序列，例如病毒的完整(～10.2kbp)编码区，目前的现有技术的实现方法无法很好地全面覆盖检测登革热病毒全基因组。
3、实现这一目标的现有方法包括在单管反应中扩增5个长(1-2.5kbp)扩增子的血清型特异性pcr扩增，然后进行凝胶电泳进行条带纯化，并在sanger毛细管或illumina平台上测序。在该方法中，在测序前对denv基因组进行pcr扩增有助于提高该方法的灵敏度，便于从低病毒载量的临床样本中恢复序列数据，但是值得注意的是，由于引物与病毒基因组之间的不一致，pcr扩
4、另一种宏基因组学的方法是对样本中存在的所有核酸进行测序，而不使用靶向pcr步骤。从理论上讲，该方法的确可以检测任何感染病毒的序列数据，不论血清型或毒株都无需先验鉴定。然而这种方法也有缺点，其对待测病毒的敏感性低，因为与宿主相比，病毒遗传物质通常含量较少，特别是当病毒载量低时则含有的病毒遗传物质就更少。因此，宏基因组测序的灵敏度较差，需要减少可同时测序的样品数量，这大大增加了成本。
5、第三种denv分离检测方法是基于生物素磁珠结合的寡核苷酸探针杂交捕获，这些探针用于特异性结合和分离病毒核酸，因此受到其与病毒基因组退火能力的限制，且该方法因核酸回收效率低，具有反应时间长、修饰探针成本高的缺点。
6、综上所述，目前市面上针对于登革热病毒的分型检测仅能测定1-2种血清型，且具有对样本的要求较高或者反应条件要求高的问题。
技术实现思路
1、本方案提供了一种的针对4种血清型登革热病毒的全基因组捕获试剂盒及应用，能从血液、咽拭子、感染组织环境中提取的核酸样本中进行登革热病毒全基因组的反转录与富集扩增，可以用于检测与鉴定登革热病毒，也可为登革热病毒的进化分析、分子流行病学研究及科学防控提供了有力的技术手段。
2、本方案提供的针对4种血清型登革热病毒的全基因组捕获试剂盒不仅可用于登革热病毒全基因组的扩增与测序，而且还可用于登革热病毒全基因组的快速检测与鉴定，不仅适用于近几年流行毒株，而且还适用于回溯性队列研究，具有操作简便、特异性强、灵敏度高和准确性好的优点，同时也为登革热病4种血清型的进化分析、分子流行病学研究及科学防控提供了有力的技术手段。
3、为实现以上专利技术目的，本方案提供了一种针对4种血清型登革热病毒的全基因组捕获试剂盒，包括：两组引物池，其中第一引物池内的引物含有引物序列如seq id no.1-seq id no.22所示的靶向引物；第二引物池内的引物含有引物序列如seq id no 23-seqid no.41所示的靶向引物。
4、具体的，第一引物池内的靶向引物的引物序列如下表一所示：
5、表一第一引物池的靶向引物
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9、其中第一引物池中的seq id no.1-seq id no.44所示的靶向引物中相邻序号的正向的靶向引物和反向的靶向引物依次序两两组成一个引物对，seq id no.1，seq idno.3，seq id no.5，seq id no.7，seq id no.9，seq id no.11，seq id no.13，seq idno.15，seq id no.17，seq id no.19，seq id no.21，no.23，seq id no.25，seq id no.27，seq id no.29，seq id no.31，seq id no.33，seq id no.35，seq id no.37，seq idno.39，seq id no.41和seq id no.43对应的是正向的靶向引物，seq id no.2，seq idno.4，seq id no.6，seq id no.8，seq id no.10，seq id no.12，seq id no.14，seq idno.16，seq id no.18，seq id no.20，seq id no.22，seq id no.24，seq id no.26，seq idno.28，seq id no.30，seq id no.32，seq id no.34，seq id no.36，seq id no.38，seq idno.40，seq id no.42和seq id no.44对应的是反向的靶向引物。
10、具体的，第二引物池内的的靶向引物的引物序列如下表二所示：
11、表二第二引物池的靶向引物
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15、其中第二引物池中的seq id no.45-seq id no.89所示的靶向引物中相邻序号的正向的靶向引物和反向的靶向引物依次序组成一个引物对，seq id no.45，seq id no.47，seq id no.49，seq id no.51，seq id no.53，seq id no.55，seq id no.56，seq idno.58，seq id no,60，seq id no.62，seq id no.64，seq id no.66，seq id no.68，seq idno.70，seq id no.72，seq id no.74，seq id no.76，seq id no.78，seq id no.80，seq idno.82，seq id no.84，seq id no.86和seq id no.88对应的是正向的靶向引物，seq idno.46，seq id no.48，seq id no.50，seq id no.52，seq id no.54，seq id no.57，seq idno本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种针对4种血清型登革热病毒的全基因组捕获试剂盒，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的针对4种血清型登革热病毒的全基因组捕获试剂盒，其特征在于，两组引物池中的每一引物由如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.41其中的靶向引物、UMI序列和barcdoe序列排列组成。
3.根据权利要求1所述的针对4种血清型登革热病毒的全基因组捕获试剂盒，其特征在于，第一引物池中的SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.44所示的靶向引物中相邻序号的正向的靶向引物和反向的靶向引物依次序两两组成一个引物对，第二引物池中的SEQ ID NO.45-SEQID NO.89所示的靶向引物中相邻序号的正向的靶向引物和反向的靶向引物依次序组成一个引物对。
4.根据权利要求1所述的针对4种血清型登革热病毒的全基因组捕获试剂盒，其特征在于，两组引物池内的引物分别对登革热病毒进行多重PCR扩增，且两组引物池的多重PCR扩增条件相同。
5.根据权利要求4所述的针对4种血清型登革热病毒的全基因组捕获试剂盒，其特征在于，多重PCR扩增条件如下表所示：<...
【技术特征摘要】
1.一种针对4种血清型登革热病毒的全基因组捕获试剂盒，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的针对4种血清型登革热病毒的全基因组捕获试剂盒，其特征在于，两组引物池中的每一引物由如seq id no.1-seq id no.41其中的靶向引物、umi序列和barcdoe序列排列组成。
3.根据权利要求1所述的针对4种血清型登革热病毒的全基因组捕获试剂盒，其特征在于，第一引物池中的seq id no.1-seq id no.44所示的靶向引物中相邻序号的正向的靶向引物和反向的靶向引物依次序两两组成一个引物对，第二引物池中的seq id no.45-seqid no.89所示的靶向引物中相邻序号的正向的靶向引物和反向的靶向引物依次序组成一个引物对。
4.根据权利要求1所述的针对4种血清型登革热病毒的全基因组捕获试剂盒，其特征在于，两组引物池内的引物分别对登革热病毒进行多重pcr扩增，且两组引物池的多重pcr扩增条件相同。
5.根据权利要求4所述的针对4种血清型登革热病毒的全基因组捕获试剂盒，其特征在于，多重pcr扩增条件如下表所示：
6.一种针对4种血清型登...
【专利技术属性】
技术研发人员：倪敏君，毛凌峰，马思杰，胡群，王敏，吴斯豪，龙再浩，刘永磊，
申请(专利权)人：杭州柏熠科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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