【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗体，尤其涉及taq dna聚合酶抗体及其组合物、其修饰的taq dna聚合酶及其应用。
技术介绍
1、聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，pcr）是利用dna在体外高温条件下变性解链形成单链，低温条件下引物与单链按碱基互补配对的原则结合，当温度为dna聚合酶最适反应温度时，dna聚合酶沿着磷酸到五碳糖（5'-3'）的方向合成互补链。pcr通过模板dna变性、模板dna与引物退火、引物的延伸等步骤，经多次循环得到目的片段，dna聚合酶是实现dna复制的关键。
2、taq dna聚合酶是从水生栖热菌yt-1分离的耐热dna聚合酶。然而，在pcr反应体系中，低温条件下taq dna聚合酶仍有活性，导致碱基互补配对，进而容易产生非特异性扩增和引物二聚体。为解决该问题，现有技术通过蜡隔绝法、基因突变、化学修饰、抗体修饰、核酸适配体或共价键结合修饰taq dna聚合酶，即通过控制taq dna聚合酶在高温条件下才具有活性，克服原有taq dna聚合酶的缺陷。
3、利用热启动taq dna聚合酶进行扩增是提高pcr扩增特异性、提升扩增灵敏度的主要方法。热启动taq dna聚合酶的修饰方法主要包括化学修饰、抗体修饰、蛋白修饰以及配体肽修饰，或者多种修饰方法混合使用以达到对taq dna聚合酶活性的封闭作用，常温或者低温条件下，taq dna聚合酶活性被封闭，大量减少非特异性反应，保持酶活稳定性，再通过95℃高温使封闭酶活的物质脱落、失活，释放taq dna聚合酶活性，从而达
技术实现思路
1、本专利技术提供taq dna聚合酶抗体及其组合物、其修饰的taq dna聚合酶及其应用。
2、本专利技术通过利用taq dna聚合酶作为免疫原免疫动物、经细胞融合和筛选，得到了两株杂交瘤细胞株2c11与6b9及其产生的单克隆抗体2c11和6b9。利用上述抗体修饰taqdna聚合酶，可以在低温时使taq dna聚合酶的活性位点被封闭，单独每个抗体修饰均具有较好的封闭效果，且两个抗体组合封闭时，封闭效果明显优于每个抗体；当温度升高时，抗体失活，taq dna聚合酶活性释放，发挥热启动的作用，用于pcr能够有效减少非特异性扩增和引物二聚体的产生；而且，本专利技术的抗体修饰taq dna聚合酶具有较高的稳定性，经储存后仍具有较好的热启动以及降低非特异性扩增和引物二聚体的效果。
3、具体地，本专利技术提供以下技术方案：
4、第一方面，本专利技术提供taq dna聚合酶抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区的互补决定区cdr1的氨基酸序列如seq id no.1所示、cdr2的氨基酸序列为aas，cdr3的氨基酸序列如seq id no.2所示，重链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.3、4、5所示。
5、优选地，所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.9所示或与如seq id no.9所示序列具有至少80%的相似性，重链可变区的氨基酸序列如seqid no.10所示或与如seq id no.10所示序列具有至少80%的相似性。
6、在本专利技术的一些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.9所示，重链可变区的氨基酸序列如seq id no.10所示。
7、本专利技术提供的上述抗体能够与taq dna聚合酶结合，具有较高的亲和力，上述抗体与taq dna聚合酶结合后，在低温时能够封闭taq dna聚合酶的活性位点，高温时抗体失活，taq dna聚合酶活性释放，实现热启动效果，能够有效减少pcr中的非特异性扩增和引物二聚体的产生，提高目的片段的扩增效率和扩增特异性，且抗体结合的taq dna聚合酶具有较高的储存稳定性和较好的热稳定性。
8、优选地，所述抗体或其抗原结合片段为单克隆抗体、fab、fab'、f(ab')2、fv、单链抗体或多特异抗体。
9、在本专利技术的一些实施方式中，所述抗体为单克隆抗体。所述抗体还包含恒定区序列。所述恒定区序列选自igg1、igg2、igg3、igg4、iga、igm、ige或igd的恒定区序列。所述恒定区可为鼠的igg1、igg2、igg3、igg4、iga、igm、ige或igd的恒定区。
10、第二方面，本专利技术提供编码所述抗体或其抗原结合片段的核酸分子。
11、根据上述抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列，本领域技术人员可获得编码上述抗体或其抗原结合片段的核酸分子的核苷酸序列。由于密码子的简并性，编码上述抗体或其抗原结合片段的核酸分子的核苷酸序列并不唯一，所有能够编码产生上述抗体或其抗原结合片段的核酸分子均在本专利技术的保护范围内。
12、在本专利技术的一些实施方式中，编码所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区的核酸分子的核苷酸序列如seq id no.13所示，编码所述抗体或其抗原结合片段的重链可变区的核酸分子的核苷酸序列如seq id no.14所示。
13、第三方面，本专利技术提供含有所述核酸分子的生物材料；所述生物材料为表达盒、载体或宿主细胞。
14、上述表达盒可通过在所述核酸分子的上游连接启动子等转录或翻译调控元件和/或在其下游连接终止子等转录或翻译调控元件得到。
15、上述载体包括但不限于质粒载体、噬菌体载体、病毒载体、人工染色体载体等。
16、上述宿主细胞包括微生物细胞、昆虫细胞或其它动物细胞。
17、第四方面，本专利技术提供抗体偶联物，其为将所述taq dna聚合酶抗体或其抗原结合片段与标记物偶联得到，所述标记物选自酶标记、生物素标记、荧光染料标记、化学发光染料标记、放射性标记中的一种或多种。
18、第五方面，本专利技术提供taq dna聚合酶的抗体组合物，所述抗体组合物包含以下（1）和（2）中的抗体：
19、（1）轻链可变区的互补决定区cdr1的氨基酸序列如seq id no.1所示、cdr2的氨基酸序列为aas，cdr3的氨基酸序列如seq id no.2所示，重链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.3、4、5所示本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.Taq DNA聚合酶抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区的互补决定区CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示、CDR2的氨基酸序列为AAS，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，重链可变区的互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3、4、5所示。
2.根据权利要求1所述的Taq DNA聚合酶抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示或与如SEQ ID NO.9所示序列具有至少80%的相似性，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示或与如SEQID NO.10所示序列具有至少80%的相似性。
3.根据权利要求1或2所述的Taq DNA聚合酶抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段为单克隆抗体、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、单链抗体或多特异抗体。
4.核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1~3任一项所述的Taq DNA聚合酶抗体或其抗原结合
5.生物材料，其特征在于，所述生物材料含有权利要求4所述的核酸分子；
6.Taq DNA聚合酶的抗体组合物，其特征在于，所述抗体组合物包含以下（1）和（2）中的抗体：
7.权利要求1~3任一项所述的Taq DNA聚合酶抗体或其抗原结合片段或权利要求4所述的核酸分子或权利要求5所述的生物材料或权利要求6所述的Taq DNA聚合酶的抗体组合物的如下任一种应用：
8.一种热启动Taq DNA聚合酶，其特征在于，所述热启动Taq DNA聚合酶包含Taq DNA聚合酶，还包含权利要求1~3任一项所述的Taq DNA聚合酶抗体或其抗原结合片段或权利要求6所述的Taq DNA聚合酶的抗体组合物。
9.权利要求8所述的热启动Taq DNA聚合酶的制备方法，其特征在于，所述方法包括：采用权利要求1~3任一项所述的Taq DNA聚合酶抗体或其抗原结合片段或权利要求6所述的Taq DNA聚合酶的抗体组合物修饰Taq DNA聚合酶。
10.权利要求8所述的热启动Taq DNA聚合酶的以下任一种应用：
...【技术特征摘要】
1.taq dna聚合酶抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区的互补决定区cdr1的氨基酸序列如seq id no.1所示、cdr2的氨基酸序列为aas，cdr3的氨基酸序列如seq id no.2所示，重链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.3、4、5所示。
2.根据权利要求1所述的taq dna聚合酶抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.9所示或与如seq id no.9所示序列具有至少80%的相似性，重链可变区的氨基酸序列如seq id no.10所示或与如seqid no.10所示序列具有至少80%的相似性。
3.根据权利要求1或2所述的taq dna聚合酶抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段为单克隆抗体、fab、fab'、f(ab')2、fv、单链抗体或多特异抗体。
4.核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1~3任一项所述的taq dna聚合酶抗体...
【专利技术属性】
技术研发人员：李凤娇，赵海龙，马玉岭，陈新新，苑晓松，路轲，王芳，魏彦辉，
申请(专利权)人：北京索莱宝科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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