【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞培养，具体涉及一种基于嵌入式微载体细胞大规模培养的细胞样本的检测方法。
技术介绍
1、细胞治疗是一种将细胞材料注射或以其他方式移植到患者体内的疗法，目前一般认为细胞需要达到一定的数量级才能取得治疗作用，因而细胞大规模培养技术得到了快速发展。嵌入式微载体细胞培养是目前公认的最有发展前途的一种动物细胞大规模培养技术，其兼具悬浮培养和贴壁培养的优点，放大容易。微载体的特殊微观结构可以为细胞创造一个微环境，有利于细胞的生长和分化，并且会将细胞固定在微载体上。
2、对于嵌入式为载体细胞大规模培养技术，通常需要通过细胞观察、细胞计数、细胞凋亡率或细胞活率检测等技术手段对生产工艺进行监测和优化。目前用于细胞上述检测的方法有以下几种。①方法一，利用低渗消化法消化细胞，然后通过计数仪计数。主要缺陷在于，嵌入式微载体细胞是空心状态，会形成一个微环境，消化液或者染液难以渗透进入。通过多次实验，包括提高消化液浓度，延长消化时间等，嵌入式微载体内部仍有大量细胞无法消化或者冲出。导致计数结果严重偏小，数据的不可靠性。实验数据与理论值相差较大，存在数量级的差距。低渗消化的主要缺点：在培养前天细胞渗入嵌入式微载体较少，计数比较符合要求；在培养后期细胞渗入到嵌入式微载体内部较多，难以消化，细胞计数严重偏小。②方法二：通过建立标准曲线的方法，利用吸光值的方法来计算得到细胞总数。首先，对个人的操作要求较高，不同人操作结果偏差较大，重复性较低。其次，标准曲线是通过不带细胞的嵌入式微载体建立的，与带细胞后的嵌入式微载体细胞相比较，缺乏说服性
3、可见，嵌入式微载体细胞培养在细胞染色观察，细胞数量，细胞凋亡率或细胞活率检测等方面的检测技术是目前行业的痛点，导致难以有效监控嵌入式微载体细胞大规模培养的过程。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术旨在提供一种适用于嵌入式微载体细胞大规模培养所得细胞样本的检测方法。
2、本专利技术的技术方案具体如下：
3、一种基于嵌入式微载体细胞大规模培养的细胞样本的检测方法，包括以下步骤：
4、s1、用细胞固定液处理细胞样本以固定细胞结构，对固定后的细胞样本进行制片，得到切片；或对细胞样本直接制片，得到切片；
5、s2、对s1所得切片进行染色；
6、s3、获取染色后切片的显微扫描图像，对显微扫描图像分析。
7、在上述检测方法中，细胞样本是通过微载体培养获得的，故细胞样本中的细胞贴附在微载体内部和表面生长。
8、在上述检测方法中，对细胞样本进行制片的目的在于获取微载体内部的细胞信息。
9、在上述检测方法中，用细胞固定液处理细胞样本的目的在于：尽可能使细胞中的各种细胞器以及大分子结构保持生活状态，并牢固地固定在它们原来所在的位置上，达到固定细胞结构的技术效果。本专利技术方法中的细胞处理液可采用现有技术中的固定液，只要能达到上述目的即可。
10、在本专利技术一具体的实施例中，步骤s1中固定细胞结构的操作方法具体为：筛网过滤并用pbs冲洗，以除去细胞样本中的培养基；用细胞固定液固定20-30min，筛网过滤并用pbs洗涤以除去细胞固定液，得到固定后的细胞样本。
11、优选地，在上述检测方法中，步骤s1采用超微切片技术对固定后的细胞样本进行制片，其操作方法包括以下步骤：取部分固定后的细胞样本与琼脂混合均匀，晾干后脱水，再用石蜡包埋，切片。
12、优选地，在上述检测方法中，步骤s1采用冰冻切片技术对细胞样本直接制片，具体操作为：筛网过滤并用pbs冲洗，以除去细胞样本中的培养基；将去除培养基的细胞样本置于超低温条件下使其固定成块体，然后进行切片。
13、在上述检测方法中，染色是利用染料与切片上细胞内的某种成分发生作用，进而通过颜色在区分细胞的各种成分，故在实际操作中，技术人员可根据实际需求选择相应的染色实际和染色方式。
14、在上述检测方法中，步骤s4通过软件分析或者人工的方法计算细胞数量，细胞凋亡率或细胞活率；进而再通过软件分析或者人工数单球细胞个数，利用数学方法，计数方法，计数细胞总数量。此处分析和计算方式可参考现有技术，不再赘述。
15、相对于现有技术，本专利技术的有益效果为：
16、对于通过嵌入式微载体细胞大规模培养技术得到的细胞样本，本专利技术通过制片技术充分展示了嵌入在微载体中的细胞状态，然后通过试剂盒病理染色技术，结合软件分析获取并计算得到细胞数量、细胞凋亡率或细胞活率等信息。本专利技术首先避免了人为偏差，分析结果更可靠，一致性更好；其次通过超微切片技术切开嵌入式微载体，能够更直观的观察到嵌入式微载体细胞内部的生长情况，观察到单个细胞。根据本专利技术方法获取的检测结果更为可靠，故对于微载体细胞大规模培养工艺条件如调整细胞上罐，细胞培养补料，细胞收获等条件，更具有明确的指导意义，有助于达到细胞生产的要求。
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1.一种基于嵌入式微载体细胞大规模培养的细胞样本的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，用细胞固定液处理细胞样本的方法为：利用PBS去除细胞样本中的培养基杂质，用细胞固定液固定20-30min，过滤后用PBS去除细胞固定液，即得固定后的细胞样本。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，步骤S1采用超微切片技术对固定后的细胞样本进行制片。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，采用超微切片技术进行制片的过程包括：取部分固定后的细胞样本与琼脂混合均匀，晾干后脱水，再用石蜡包埋，切片。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤S2采用冰冻切片技术对细胞样本直接制片。
【技术特征摘要】
1.一种基于嵌入式微载体细胞大规模培养的细胞样本的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，用细胞固定液处理细胞样本的方法为：利用pbs去除细胞样本中的培养基杂质，用细胞固定液固定20-30min，过滤后用pbs去除细胞固定液，即得固定后的细胞样本。
3.根据权利要求2所述的检...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘恒，问健，孙发，方锐，
申请(专利权)人：武汉仝干医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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