一种牛疱疹病毒4型抗原、制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种牛疱疹病毒4型抗原、制备方法和应用，涉及生物技术领域，本发明专利技术提供的牛疱疹病毒4型亚单位疫苗的制备方法。对牛疱疹病毒4型gB基因进行优化，构建重组质粒，转染至CHO细胞，构建表达牛疱疹病毒4型gB蛋白细胞株，培养表达牛疱疹病毒4型细胞，收获细胞培养上清液、纯化获得制备疫苗用抗原水相，将抗原水相与佐剂混合获得疫苗。该疫苗安全性好、免疫原性强、生产成本低、工艺简单、批次稳定；构建的表达BHV4型gB蛋白的CHO细胞株表达目的蛋白量高，表达蛋白为分泌蛋白更利于纯化。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，尤其是涉及一种牛疱疹病毒4型抗原、制备方法和应用。

技术介绍

1、牛疱疹病毒(bovine herpesvirus bhv-4)是丙型疱疹病毒科的新成员，首次从匈牙利患有呼吸系统疾病和结膜炎的犊牛身上分离出。后来相继从外表健康的和患有流产、子宫炎、肺炎、腹泻、呼吸道感染、乳房炎、脓泡性皮炎等牛的不同组织和细胞内分离出该病毒。现在bhv-4已蔓延世界各地，而该病多为牛的隐性感染，和其他病原共同感染牛后可能使临床症状加剧，且表现多样化，给诊断和治疗带来较大困难，对养牛业构成严重威胁。国外对bhv-4的形态结构、致病性、免疫及分子生物学等方面的研究已取得很大进展。

2、bhv-4病毒基因组为1446kb的双股线形dna分子。糖蛋白gb蛋白是在病毒膜上最丰富的蛋白之一，其编码基因是疱疹病毒科成员中最保守的一个基因。bhv-4gb是异二聚体，由orf8(11420nt～14044nt)编码874个氨基酸，被蛋白水解酶切割成2个分别为51ku和46ku的亚体组成了分子的氨基端和羧基端，但仍以二硫键相连。两个亚体分别具有15个、5个与n端本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.牛疱疹病毒4型gB蛋白，其特征在于，编码所述gB蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述的gB蛋白，其特征在于，所述蛋白由CHO细胞表达。

3.如权利要求1所述gB蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述培养步骤(3)具体为：CHO-gB细胞株在37℃下培养至第6日时，降温至32～34℃，继续培养至第10-15天收获gB蛋白抗原；

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，使用60％Dynamis+40％EX-CELL 302培养基培养，培养第6...

【技术特征摘要】

1.牛疱疹病毒4型gb蛋白，其特征在于，编码所述gb蛋白的核苷酸序列如seq id no:1所示。

2.根据权利要求1所述的gb蛋白，其特征在于，所述蛋白由cho细胞表达。

3.如权利要求1所述gb蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述培养步骤(3)具体为：cho-gb细胞株在37℃下培养至第6日时，降温至32～34℃，继续培养至第10-15天收获gb蛋白抗原；

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，使用60％dynamis+40％ex-cell 302培养基培养，培养第6日添加补料培养基cd efficient feed c，所述补料培养基的添加体积为原培养基的5％～15％。...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺笋，杜久斌，
申请(专利权)人：天康生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：