【技术实现步骤摘要】
本专利技术申请涉及分子生物学，具体涉及赤水河流域近缘高粱种质资源的多态性标记及鉴定方法。
技术介绍
1、高粱是我国主要的粮食作物之一，也是一种重要的白酒酿造原料作物。近年来，随着人们对食品安全和营养健康的关注度不断提高，高粱作为一种富含营养、健康绿色的粮食作物，受到越来越多的关注和重视。
2、高粱品种选育是提高高粱产量和质量的重要途径，近年来，国内外在高粱品种选育上都取得了较大进展。白酒酿造企业越来越重视高粱原料的生产，酒用高粱品种的选育是高粱育种的重要研究方向，种质资源的鉴定和保存是高粱新品种选育的基础。赤水河流域的酒用高粱种质资源丰富，但农艺性状相近，从表型性状上难以区分不同的高粱种质，2018-2020年利用系谱法和集团选择法相结合的育种技术，在仁怀和海南基地进行加代，从赤水河流域的高粱资源中定向选拔(f2-f6代)，2020年选留性状表现突出、稳定的种质，进行产量比较试验，代号为rn005、rn109、rb104、rb142的种质材料表现突出，平均亩产380kg以上，较对照品种红缨子增产10.8％以上。此外4个种质资源抗病性强，未发现丝黑穗病，其他病害，如大小斑病，炭疽病等高粱主要病害发病轻，生产上抗性较好；分别命名为酒粱1(rn005)、酒粱2(rn109)、酒粱3(rb104)、酒粱4(rb142)，上述近缘高粱种质在产量和品质表现等方面各有所不同，为了在种质资源保存、生产实践和市场上种子鉴定方面需要加以区分。近年来在赤水河流域出现了很多性状相似的品种，例如：黔高8号，茅糯粱2号，红国粱，茅台红2号，然而
3、公开于该
技术介绍
部分的信息仅用于加深对本公开的
技术介绍
的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成本领域技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
1、本申请提供一种近缘高粱种质的多态性标记及鉴定方法，旨在解决近缘高粱品种及种质[茅台红2号、茅糯粱2号、红国粱、红缨子、黔高8号、酒粱1(rn005)、酒粱2(rn109)、酒粱3(rb104)、酒粱4(rb142)]难以低成本的快速、准确的鉴别的技术问题。
2、本专利技术提供了一组检测近缘高粱种质的多态性引物，为下列三对引物中的一对以上的组合：
3、s1005-13：f：5’-gggtttatcaatcattccg-3’；
4、r：5’-acctgctacgcttctcctt-3’；
5、s272-9：f：5’-tactctgccactggtgatgcg-3’；
6、r：5’-gggctgcctgtgattggatt-3’；
7、s505-4：f：5’-aacagaaccgtagaagtgaaa-3’；
8、r：5’-acaagggacatccaaccaaa-3’。
9、在本专利技术的一种实施方式中，所述近缘高粱种质包括茅台红2号、茅糯粱2号、红国粱、红缨子、黔高8号、rn005、rn109、rb104和/或rb142。
10、本专利技术提供了一种检测近缘高粱种质的产品，所述产品中含有所述多态性引物。
11、在本专利技术的一种实施方式中，所述产品中还含有pcr扩增试剂。
12、在一种实施方式中，所述pcr扩增试剂包括dnataq聚合酶、dntps和mg+。
13、在本专利技术的一种实施方式中，所述产品包括检测试剂盒。
14、本专利技术提供了一种鉴定近缘高粱种质的方法，包括如下步骤：
15、(1)提取待鉴定高粱种质的dna；
16、(2)以步骤(1)提取的dna为模板，以所述多态性引物进行pcr扩增；
17、在本专利技术的一种实施方式中，所述近缘高粱种质包括茅台红2号、茅糯粱2号、红国粱、红缨子、黔高8号、rn005、rn109、rb104和/或rb142。
18、以s1005-13为引物所得扩增片段为323bp的品种或种质为红缨子、rn005或rn109，所得扩增片段为448bp的品种或种质为茅台红2号、rb104或rb142，所得扩增片段同时有323bp和448bp的品种或种质为黔高8号、茅糯粱2号或红国粱；
19、以s272-9为引物所得扩增片段为218bp的品种或种质茅糯粱2号、红国粱、茅台红2号、红缨子、rn005或rb142，所得扩增片段为319bp的品种或种质为黔高8号、rn109或rb104；
20、以s505-4为引物所得扩增片段为393bp的品种或种质为黔高8号、茅糯粱2号、茅台红2号、rn005、rn109或rb104，所得扩增片段为532bp的品种或种质为红国粱、红缨子或rb142。
21、在本专利技术的一种实施方式中，在所述步骤(2)中，先以s1005-13为引物鉴别出品种或种质黔高8号、茅糯粱2号、红国粱与红缨子、rn005、rn109以及茅台红2号、rb104、rb142；再以s272-9为引物区分开黔高8号与茅糯粱2号、红国粱，同时区分rn109与红缨子、rn005，以及同时区分rb104与茅台红2号、rb142，从而鉴定区分开黔高8号、rn109、rb104；再以s505-4为引物把茅糯粱2号与红国粱区分开，红缨子与rn005区分开；茅台红2号与rb142区分开，从而分别鉴定区别茅糯粱2号、红国粱、红缨子、rn005、茅台红2号、rb142。
22、在本专利技术的一种实施方式中，在所述步骤(2)中，所涉及的扩增体系为：pcr采用15μl扩增体系：dna 1μl，上下游引物各1μl，2xtaq plus master mix 7μl，ddh2o 5μl；扩增程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸45s，35个循环，72℃延伸10min，最后4℃保存。
23、本专利技术还提供了所述多态性引物或所述产品在检测近缘高粱种质中的应用。
24、在本专利技术的一种实施方式中，所述近缘高粱种质包括茅台红2号、茅糯粱2号、红国粱、红缨子、黔高8号、rn005、rn109、rb104和/或rb142。
25、有益效果：
26、1.本申请提供的多态性标记引物特异性好、灵敏度高，由其建立的鉴定方法时效性好，成本低。
27、2.本申请标记引物及鉴定方法能够快速准确的鉴定区分近缘高粱品种及种质黔高8号、茅糯粱2号、红国粱、茅台红2号、红缨子、rn005、rn109、rb104、rb142。
28、3.本申请标记引物及鉴定方法能够用于近缘高粱品种的鉴别以及酿酒高粱原料来源的鉴定，准确可靠，且鉴定成本低。
29、4.本申请标记引物及鉴定本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一组检测近缘高粱种质的多态性引物，其特征在于，为下列三对引物中的一对以上的组合：
2.一种检测近缘高粱种质的产品，其特征在于，所述产品中含有权利要求1所述多态性引物。
3.根据权利要求2所述的产品，其特征在于，所述产品中还含有PCR扩增试剂。
4.根据权利要求2或3所述的产品，其特征在于，所述产品包括检测试剂盒。
5.一种鉴定近缘高粱种质的方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述近缘高粱种质包括茅台红2号、茅糯粱2号、红国粱、红缨子、黔高8号、RN005、RN109、RB104和/或RB142。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，以S1005-13为引物所得扩增片段为323bp的品种或种质为红缨子、RN005或RN109，所得扩增片段为448bp的品种或种质为茅台红2号、RB104或RB142，所得扩增片段同时有323bp和448bp的品种或种质为黔高8号、茅糯粱2号或红国粱；
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所
9.权利要求1所述多态性引物或2～4任一所述产品在检测近缘高粱种质中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述近缘高粱种质包括茅台红2号、茅糯粱2号、红国粱、红缨子、黔高8号、RN005、RN109、RB104和/或RB142。
...【技术特征摘要】
1.一组检测近缘高粱种质的多态性引物，其特征在于，为下列三对引物中的一对以上的组合：
2.一种检测近缘高粱种质的产品，其特征在于，所述产品中含有权利要求1所述多态性引物。
3.根据权利要求2所述的产品，其特征在于，所述产品中还含有pcr扩增试剂。
4.根据权利要求2或3所述的产品，其特征在于，所述产品包括检测试剂盒。
5.一种鉴定近缘高粱种质的方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述近缘高粱种质包括茅台红2号、茅糯粱2号、红国粱、红缨子、黔高8号、rn005、rn109、rb104和/或rb142。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，以s1005-13为引物所得扩增片段为323bp的品种或种质为红缨子、rn005或rn109，所得扩增片段为44...
【专利技术属性】
技术研发人员：李磊，涂华彬，杨帆，王莉，杨龙平，江锋，宋迎辉，赵振宇，
申请(专利权)人：贵州茅台酒股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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