针对新冠病毒RBD的单克隆抗体、其制备方法及应用技术

技术编号：40077356 阅读：7 留言：0更新日期：2024-01-17 01:41

本发明专利技术涉及特异性结合SARS‑CoV‑2RBD结构域的单克隆抗体或其抗原结合片段、其相关产品、制备方法及用途。本发明专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段能以较高的亲和力与SARS‑CoV‑2RBD抗原结合，且能以较高的中和活性中和SARS‑CoV‑2原型毒株及其一系列变异毒株，从而抑制其感染，因此，在临床治疗、预防和/或检测SARS‑CoV‑2原型毒株及其变异毒株感染方面具有巨大的潜在应用价值。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药，具体涉及特异性结合sars-cov-2 rbd结构域的单克隆抗体或其抗原结合片段、其制备方法、相关产品及其在制备预防、治疗和/或检测新冠病毒感染的药物中的应用。

技术介绍

1、

2、由于暂时没有有效的特效药，目前防治新型冠状病毒的方式主要为接种疫苗。当面临病毒攻击时，记忆t细胞和记忆b细胞是提供主要的保护作用，而其中更加重要的就是中和抗体。面对已感染人群，fda批准使用抗病毒药物veklury(remdesivir)或免疫调节剂olumiant(baricitinib)进行治疗或使用抗体治疗。

3、新型冠状病毒初期，fda批准使用高滴度的抗sars-cov-2的恢复期血清进行治疗，随着研究的不断进行，实验人员不断分离出了有效的中和单抗，除单独使用外也可以将两个抗体组合使用形成抗体鸡尾酒疗法。目前，fda批准的抗体鸡尾酒疗法包括regen-cov(casirivimab和imdevimab)，ly-cov016+ly-cov555(bamlanivilab+etesevimab),evusheld(tixagevimab+cilgavimab)以及单抗s309(sotrovimab)，ly-cov1404(bebtelovimab)；这些抗体均靶向sars-cov-2病毒表面s蛋白的受体结合区域(rbd)，该区域是直接与受体结合的区域，也是中和抗体的重要靶点之一。

4、随着病毒的不断变异，目前已有的治疗性抗体出现了对新的突变株及流行株的中和能力降低，防治能力变差的情况。根

技术实现思路

1、专利技术目的

2、本专利技术的目的在于提供一种特异性结合sars-cov-2 rbd结构域的单克隆抗体或其抗原结合片段、其制备方法、相关产品及其在制备预防、治疗和/或检测新冠病毒感染的药物中的应用。

3、解决方案

4、智飞(zf2001)是国内首个基于sars-cov-2 rbd区设计的重组蛋白疫苗，具有良好的免疫原性和安全性。除sars-cov-2原型毒株外，zf2001也能够提供很好的针对其他变异株的保护。中国在2020年进行了紧急批准使用，目前，该疫苗已在四个国家中完成了三期临床试验。

5、根据目前fda批准使用的高中和治疗性抗体均靶向rbd的情况，通过从免疫sars-cov-2rbd区域蛋白疫苗的志愿者体内分离高中和水平抗体无疑是一个更加快速的开发新治疗性抗体的方法。因此，本申请的专利技术人尝试从免疫zf2001的志愿者体内分离能够广谱中和目前最值得关注的突变株(voi strains)的抗体。通过抗体功能筛选，专利技术人获得了多株高中和性、高亲和力的抗体，其可作为新冠病毒原型株及其一系列变异株的治疗性抗体或其免疫检测试剂使用。

6、具体地，本专利技术提供了如下技术方案：

7、第一方面，本专利技术提供了特异性结合sars-cov-2 rbd结构域的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含如下重链可变区和/或轻链可变区：

8、所述重链可变区包含：

9、氨基酸序列分别如seq id no:1、seq id no:2和seq id no:3所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；或

10、氨基酸序列分别如seq id no:11、seq id no:12和seq id no:13所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；

11、所述轻链可变区包含：

12、氨基酸序列分别如seq id no:4、seq id no:5和seq id no:6所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或

13、氨基酸序列分别如seq id no:14、seq id no:15和seq id no:16所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。

14、在优选实施方案中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：

15、(i)重链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:1、seq id no:2和seqidno:3所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和，轻链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:4、seq id no:5和seq id no:6所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；

16、或者包含：

17、(ii)重链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:11、seq id no:12和seqidno:13所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和，轻链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq idno:14、seq id no:15和seq id no:16所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。

18、在进一步优选的具体实施方案中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：

19、(i)重链可变区，其包含如seq id no:7所示的氨基酸序列或与seq id no:7所示的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，或由其组成；和，轻链可变区，其包含如seq id no:8所示的氨基酸序列或与seq id no:8所示的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，或由其组成；

20、或者包含：

21、(ii)重链可变区，其包含如seq id no:17所示的氨基酸序列或与seq id no:17所示的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，或由其组成；和，轻链可变区，其包含如seq id no:18所示的氨基酸序列或与seq id no:18所示的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，或由其组成。

22、作为进一步优选的具体实施方案的示例，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：

23、(i)重链可变区，其氨基酸序列如seq id no:7所示；和，轻链可变区，其氨基酸序列如seq id no:8所示；

24、或者包含：

25、(ii)重链可变区，其氨基酸序列如seq id no:17所示；和，轻链可变区，其氨基酸序列如seq id no:18所示。

26、在本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段的上述实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段还包括恒定区；

27、优选地，所述恒定区为选自以下的任意一种：igg、iga或igm抗体的恒定区；

28、进一步优选地，所述恒定区为igg抗体的恒定区。

29、在更进一步优选的具体实施方案中，所本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.特异性结合SARS-CoV-2RBD结构域的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和/或轻链可变区，其中，

2.如权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：

3.如权利要求1或2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：

4.如权利要求3所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：

5.如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段还包括恒定区；

6.如权利要求1-5任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：

7.如权利要求6所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：

8.如权利要求1-7任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、Fab'-SH、Fv、scFv、F(ab')2、Fd、dAb、互补决定区片段、人抗体、嵌合抗体或双特异或多特异抗体。