基于生物素连接酶的蛋白邻近标记系统、方法及应用技术方案

本发明专利技术提供基于生物素连接酶的蛋白邻近标记系统、方法及应用，该蛋白邻近标记系统包括含有生物素连接酶TurboID编码核苷酸序列的重组质粒、含有目标蛋白编码核苷酸序列的重组质粒以及用于诱导表达生物素连接酶TurboID和目标蛋白的细胞系。本发明专利技术利用含有生物素连接酶TurboID编码核苷酸序列的重组质粒和含有目标蛋白编码核苷酸序列的重组质粒在大肠杆菌中共表达，在体内进行邻近标记，纯化后直接获得一种Biotin‑EFTu（生物素标记的目标蛋白），经质谱鉴定，该生物素标记时为单一位点标记，标记效率高，表达完即标记完，不需要进行额外的操作，工艺简单，操作便捷，可为高通量表达与筛选蛋白提供思路。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及蛋白生物素标记，具体涉及基于生物素连接酶的邻近标记蛋白、方法及应用。

技术介绍

1、蛋白生物素标记主要有2种方法，一种是化学法，一种是酶催化法。酶活化法，是依靠生物素连接酶。生物素连接酶 (biotin ligase)由bira基因bira ligase (uniprot idp06709)编码所得，能活化生物素并特异地转移到生物素受体标签蛋白（如avitag 融合蛋白）上，使标签蛋白生物素化。化学法需要对生物素进行特定修饰并活化，与目标蛋白进行氨基偶联反应，从而使蛋白偶联上生物素。化学法存在以下不足：（1）活化的生物素容易失活。（2）标记后的蛋白需要脱盐操作，增加操作步骤。（3）有可能在活性位点上标记，影响蛋白活性。

2、目前，商业化的生物素连接酶只有avidity公司的avb99，avb100，avb101三个菌株，其中avb99把bira构建在载体上，由iptg诱导共表达的原理进行生物素标记。因此，有必要进一步扩大对生物素连接酶的相关研究，以期获得更好的商业化产品。

技术实现思路

<本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于生物素连接酶的蛋白邻近标记系统，其特征在于，包括含有生物素连接酶TurboID编码核苷酸序列的重组质粒、含有目标蛋白编码核苷酸序列的重组质粒以及用于诱导表达生物素连接酶TurboID和目标蛋白的细胞系；所述生物素连接酶TurboID的编码核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；所述目标蛋白编码核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；所述目标蛋白含有短肽标签Avi-tag，所述Avi-tag的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

2.根据权利要求1所述的蛋白邻近标记系统，其特征在于：所述含有生物素连接酶TurboID编码核苷酸序列的重组质粒是将生物素连接酶Tur...

【技术特征摘要】

1.一种基于生物素连接酶的蛋白邻近标记系统，其特征在于，包括含有生物素连接酶turboid编码核苷酸序列的重组质粒、含有目标蛋白编码核苷酸序列的重组质粒以及用于诱导表达生物素连接酶turboid和目标蛋白的细胞系；所述生物素连接酶turboid的编码核苷酸序列如seq id no:4所示；所述目标蛋白编码核苷酸序列如seq id no:5所示；所述目标蛋白含有短肽标签avi-tag，所述avi-tag的氨基酸序列如seq id no:3所示。

2.根据权利要求1所述的蛋白邻近标记系统，其特征在于：所述含有生物素连接酶turboid编码核苷酸序列的重组质粒是将生物素连接酶turboid的编码核苷酸序列克隆到载体获得。

3.根据权利要求2所述的蛋白邻近标记系统，其特征在于：所述载体选自puc、pbr322、pet、pget、pcole1、pr6k、pacyc、psc101、pbluescript、pgem中的一种。

4.根据权利要求3所述的蛋白邻近标记系统，其特征在于：所述载体选自pbr322、pet、pget、pcole1、pacyc中的一种。

5.根据权利要求4所述的蛋白邻近标记系统，其特征在于：所述载体选自pacyc。

6.根据权利要求1所述的蛋白邻近标记系统，其特征在于：所述含有目标蛋白编码核苷酸序列的重组质粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：温家明，覃健萍，张齐，王占新，吕丽萍，方焕新，顾嘉运，苏观志，范兴裕，彭昌胤，
申请(专利权)人：温氏食品集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：