【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学，特别是涉及一种检测膀胱癌的试剂盒。
技术介绍
1、膀胱癌是全球第九位最常见的恶性肿瘤，也是男性和女性最常见的泌尿生殖系统恶性肿瘤，而且男性的发病率比女性高出4倍以上。膀胱癌的5年生存率与诊断时的疾病分期相关，原位癌的5年生存率高达95.8％，而转移性膀胱癌的5年生存率低至4.6％。因此，准确和及时的诊断对于膀胱癌患者的预后至关重要。
2、目前，膀胱镜检查和尿液脱落细胞学检查是诊断膀胱癌的两种主要方式，但尿液脱落细胞学检查的灵敏度相对较低，膀胱镜检查和病理活检是膀胱癌诊断的金标准。与目前的其它方法相比，虽然膀胱镜诊断的灵敏度更高，然而，膀胱镜检查是一种侵入性操作，患者不得不承受痛苦，而且操作膀胱镜受尿道狭窄的影响，可能会造成尿道穿孔、出血或感染等。近日也出现了一些非侵入性的诊断方法，例如检测尿液中的蛋白质标记物核基质蛋白22(nmp-22)和膀胱肿瘤抗原(bta)等来诊断膀胱癌，但其特异性不高。
技术实现思路
1、本专利技术经研究发现，通过检测chr10:101140208～101140464的正链或负链的全长或部分区域的甲基化水平、或者检测chr10:101140208～101140464的正链或负链的全长或部分区域和chr12:52006931～52007494的正链或负链的全长或部分区域的组合的甲基化水平来诊断膀胱癌的灵敏度高，特异性好，可以改善现有的膀胱癌检测方法特异性不高的缺陷。
2、基于此，本申请提供一种检测标志区的甲基化水
3、在其中一个实施例中，所述标志区包括chr10:101140241～101140431的全长或部分区域；或，所述标志区为chr10:101140241～101140431的全长或部分区域和chr12：52007046～52007471的全长或部分区域。
4、在其中一个实施例中，所述标志区包括下述区域之一：区域1：chr10:101140208～101140464的正链；区域2：chr10:101140431～101140214；区域7：chr10:101140255～101140395的正链；区域8：chr10:101140325～101140440的正链；区域9：chr10:101140237～101140445的正链；区域10：chr10:101140401～101140241；区域11：chr10:101140385～101140254；区域12：chr10:101140374～101140226；
5、或者，所述标志区为第一区与第二区的组合，其中：所述第一区为下述区域之一：区域1：chr10:101140208～101140464的正链；区域2：chr10:101140431～101140214；区域7：chr10:101140255～101140395的正链；区域8：chr10:101140325～101140440的正链；区域9：chr10:101140237～101140445的正链；区域10：chr10:101140401～101140241；区域11：chr10:101140385～101140254；区域12：chr10:101140374～101140226；所述第二区为下述区域之一：区域3：chr12:52006931～52007205的正链；区域4：chr12:52007242～52007466的正链；区域5：chr12:52007494～52007312；区域6：chr12:52007301～52006941；区域13：chr12:52007046～52007189的正链；区域14：chr12:52007315～52007462的正链；区域15：chr12:52007471～52007372；区域16：chr12:52007170～52007087。
6、一种检测膀胱癌的试剂盒，包括用于检测标志区的甲基化水平的试剂，以grch38.p14为参考，所述标志区包括chr10:101140208～101140464的全长或部分区域；或者，所述标志区包括chr10:101140208～101140464的全长或部分区域和chr12:52006931～52007494的全长或部分区域。
7、在其中一个实施例中，所述试剂通过如下方法中的一种或多种实现对所述标志区的甲基化水平的检测：甲基化特异性pcr、亚硫酸氢盐测序法、甲基化特异性微阵列法、全基因组甲基化测序法、焦磷酸测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字pcr法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法、甲基化敏感性限制性内切酶法和甲基化荧光定量pcr法。
8、在其中一个实施例中，所述试剂包括检测引物对，所述检测引物对包括如下引物对中的至少一组：用于检测chr10:101140208～101140464的正链的全长或部分区域的甲基化水平的区域1引物对；用于检测chr10:101140431～101140214的全长或部分区域的甲基化水平的区域2引物对；用于检测chr10:101140255～101140395的正链的全长或部分区域的甲基化水平的区域7引物对；用于检测chr10:101140325～101140440的正链的全长或部分区域的甲基化水平的区域8引物对；用于检测chr10:101140237～101140445的正链的全长或部分区域的甲基化水平的区域9引物对；用于检测chr10:101140401～101140241的全长或部分区域的甲基化水平的区域10引物对；用于检测chr10:101140385～101140254的全长或部分区域的甲基化水平的区域11引物对；用于检测chr10:101140374～101140226的全长或部分区域的甲基化水平的区域12引物对。
9、在其中一个实施例中，所述区域1引物对的核苷酸序列如seq id no:19～22所示；及/或，所述区域2引物对的核苷酸序列如seq id no:23～26所示；及/或，所述区域7引物对的核苷酸序列如seq id no:63～64所示；及/或，所述区域8引物对的核苷酸序列如seq idno:66～67所示；及/或，所述区域9引物对的核苷酸序列如seq id no:69～70所示；及/或，所述区域10引物对的核苷酸序列如seq id no:72～73所示；及/或，所述区域11引物对的核苷酸序列如seq id no:75～76所示；及/或，所述区域12引物对的核苷酸序列如seq id no:78～79所示；。
10、在其中一个实施例中，所述检测引物对还包括如下引物对中的至少一组：本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.检测标志区的甲基化水平的试剂在制备膀胱癌的诊断产品中的应用，其特征在于，以GRCh38.p14为参考，所述标志区包括Chr10:101140208～101140464的全长或部分区域；或者，所述标志区包括Chr10:101140208～101140464的全长或部分区域和Chr12:52006931～52007494的全长或部分区域。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述标志区包括Chr10:101140241～101140431的全长或部分区域；
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述标志区包括下述区域之一：
4.一种检测膀胱癌的试剂盒，其特征在于，包括用于检测标志区的甲基化水平的试剂，以GRCh38.p14为参考，所述标志区包括Chr10:101140208～101140464的全长或部分区域；或者，所述标志区包括Chr10:101140208～101140464的全长或部分区域和Chr12:52006931～52007494的全长或部分区域。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂通过如下方
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括检测引物对，所述检测引物对包括如下引物对中的至少一组：
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述区域1引物对的核苷酸序列如SEQID NO:19～22所示；及/或，所述区域2引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:23～26所示；及/或，所述区域7引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:63～64所示；及/或，所述区域8引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:66～67所示；及/或，所述区域9引物对的核苷酸序列如SEQ IDNO:69～70所示；及/或，所述区域10引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:72～73所示；及/或，所述区域11引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:75～76所示；及/或，所述区域12引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:78～79所示。
8.根据权利要求6或7所述的试剂盒，其特征在于，所述检测引物对还包括如下引物对中的至少一组：
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述区域3引物对的核苷酸序列如SEQID NO:27～30所示；及/或，所述区域4引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:31～34所示；及/或，所述区域5引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:35～38所示；及/或，所述区域6引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:39～42所示；及/或，所述区域13引物对的核苷酸序列如SEQ IDNO:81～82所示；及/或，所述区域14引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:84～85所示；及/或，所述区域15引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:87～88所示；及/或，所述区域16引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:90～91所示。
10.根据权利要求7或9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂还包括与所述检测引物对对应的检测探针，所述检测探针上连接有荧光基团，其中：
11.根据权利要求4～7和9中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括核酸提取试剂、甲基化转化试剂、质控试剂、PCR反应试剂和测序试剂中的至少一种。
...【技术特征摘要】
1.检测标志区的甲基化水平的试剂在制备膀胱癌的诊断产品中的应用，其特征在于，以grch38.p14为参考，所述标志区包括chr10:101140208～101140464的全长或部分区域；或者，所述标志区包括chr10:101140208～101140464的全长或部分区域和chr12:52006931～52007494的全长或部分区域。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述标志区包括chr10:101140241～101140431的全长或部分区域；
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述标志区包括下述区域之一：
4.一种检测膀胱癌的试剂盒，其特征在于，包括用于检测标志区的甲基化水平的试剂，以grch38.p14为参考，所述标志区包括chr10:101140208～101140464的全长或部分区域；或者，所述标志区包括chr10:101140208～101140464的全长或部分区域和chr12:52006931～52007494的全长或部分区域。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂通过如下方法中的一种或多种实现对所述标志区的甲基化水平的检测：
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括检测引物对，所述检测引物对包括如下引物对中的至少一组：
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述区域1引物对的核苷酸序列如seqid no:19～22所示；及/或，所述区域2引物对的核苷酸序列如seq id no:23～26所示；及/或，所述区域7引物对的核苷酸序列如seq id no:63～64所示；及...
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡迪，董兰兰，张良禄，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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