用于非洲猪瘟病毒重组毒株、Ⅰ型及Ⅱ型毒株鉴别的双重荧光定量PCR组合物及试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种用于非洲猪瘟病毒重组毒株、Ⅰ型及Ⅱ型毒株鉴别的双重荧光定量PCR组合物及试剂盒，属于病毒检测技术领域。该PCR组合物由MGF_110‑1L和O61R的引物及探针组成，MGF_110‑1L引物及探针用于检测I型毒株，O61R引物及探针用于检测II型毒株。本发明专利技术所提供的检测方法通过提取样品DNA进行双重荧光定量PCR，并根据两通道结果判定毒株类型。该方法检测灵敏度高，能检测2.95×10<supgt;‑1</supgt;copies，并且该方法的特异性好，仅检出目标病毒。除此之外，该方法的重复性好，变异系数在0.12％‑0.51％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于病毒检测，尤其涉及用于非洲猪瘟病毒重组毒株、ⅰ型及ⅱ型毒株鉴别的双重荧光定量pcr组合物及试剂盒。

技术介绍

1、非洲猪瘟(african swine fever，asf)是由非洲猪瘟病毒(african swine fevervirus，asfv)引起的家猪和野猪的一种急性传染病，具有呼吸系统障碍、神经系统症状和全身出血等特征。它的临床表现为发热、呼吸困难、咳嗽、拉稀、神志不清等，病程短促而病死率极高。asfv可通过直接接触、食入受污染的饲料和水源等方式在猪群中快速传播，一旦发生疫情，病猪数量会在短时间内急剧增加。

2、目前，asf对全球养猪业造成了巨大损失，许多国家和地区的养猪业都曾遭遇过asf疫情，导致大量猪只死亡。2018年我国首次发生ii型asf疫情，之后在我国呈广泛流行态势，由于没有有效的疫苗和治疗药物，非洲猪瘟给养猪业带来重大经济损失。2021年，我国首次报道分离出两株与nh/p68和ourt88/3高度相似的基因ⅰ型弱毒株，感染猪只都没有明显的临床症状和病毒血症，给临床的诊断和疫情的防控带来了极大的困难。

<本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于同时鉴定和检测非洲猪瘟病毒重组毒株、Ⅰ型及Ⅱ型毒株的组合物，其特征在于，所述组合物由MGF_110-1L的引物和探针以及O61R的引物和探针组成；

2.一种用于同时鉴定和检测非洲猪瘟病毒重组毒株、Ⅰ型及Ⅱ型毒株的双重荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述双重荧光定量PCR试剂盒包括：MGF_110-1L的引物和探针、O61R的引物和探针、2×AceQ Universal U+Probe Master Mix V2和ddH 2O。

3.根据权利要求2所述的双重荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述双重荧光定量PCR试剂盒的反应体系为：

4.根...

【技术特征摘要】

1.一种用于同时鉴定和检测非洲猪瘟病毒重组毒株、ⅰ型及ⅱ型毒株的组合物，其特征在于，所述组合物由mgf_110-1l的引物和探针以及o61r的引物和探针组成；

2.一种用于同时鉴定和检测非洲猪瘟病毒重组毒株、ⅰ型及ⅱ型毒株的双重荧光定量pcr试剂盒，其特征在于，所述双重荧光定量pcr试剂盒包括：mgf_110-1l的引物和探针、o61r的引物和探针、2×aceq universal u+probe master mix v2和ddh 2o。

3.根据权利要求2所述的双重荧光定量pcr试剂盒，其特征在于，所述双重荧光定量pcr试剂盒的反应体系为：

4.根据权利要求3所述的双重荧光定量pcr试剂盒，其特征在于，所述双重荧光定量pcr试剂盒的反应条件为：37℃2min；95℃5min；95℃10s，60℃3...

【专利技术属性】
技术研发人员：来冉冉，胡志强，李孝文，田晓刚，向路，武利利，李洋，樊铭玉，卞陆杰，王聪霞，杨晨，
申请(专利权)人：夏津新希望六和农牧有限公司，
类型：发明
国别省市：