【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物计数领域，具体涉及一种akkermansia muciniphila的计数培养基及其应用。
技术介绍
1、益生菌作为微生态制剂的主要成分，可以调节肠道菌群平衡、提升机体的免疫力，已被广泛应用于普通食品、保健食品、医药、农用等领域。而益生菌的活菌数水平直接关系到这些产品的质量，影响到益生菌的益生作用。因此，食品中益生菌的活菌数是该类食品检验的核心内容。目前我国产品标准规定发酵乳制品及活菌型乳酸菌饮料中乳酸菌活菌数不得少于1×106cfu/g(ml)，其检测方法标准一般为国标gb 4789.35-2016。
2、目前本领域对益生菌进行计数的培养基大多为mrs培养基、改良mrs培养基、ypd培养基等。中国专利申请202010817025.6公开了一种凝结芽孢杆菌计数培养基，所述计数培养基ypd固体培养基，其按质量百分比的配方如下：2％葡萄糖，2％蛋白胨，1％酵母粉，用氢氧化钠调ph至7.0，加1.5％-2.0％琼脂粉，121℃灭菌20min。中国专利申请201610571863.3公开了一种保加利亚杆菌的选择性计数培养基，其组成如下：以重量份计，葡萄糖8.8-11.2份，大豆蛋白胨8.5-11.5份，酵母粉4.6-5.4份，k2hpo4 1.8-2.2份，琼脂12.0-18.0份，无水乙酸钠23.0-27.0份。
3、目前本领域还未有专门用于akkermansia muciniphila的活菌计数培养基。
技术实现思路
1、akkermansi
2、由于akkermansia muciniphila对营养条件要求极高，采用现有的益生菌计数培养基进行检验时，其计数结果偏低，或无法计数。
3、为了克服现有技术的缺陷，本专利技术特此提出了以下技术方案：
4、在一个方面，本专利技术提供了一种akkermansia muciniphila的计数培养基，所述计数培养基的组分包括：胰蛋白胨，胰蛋白胨大豆肉汤，脑心浸粉，氯化钠，葡萄糖，碳酸氢二钠(12h2o)，特殊蛋白胨，酵母提取物，半胱氨酸盐酸盐，氯化血红素，琼脂粉，tris buffer和无菌脱纤维羊血。
5、在一些实施方案中，所述计数培养基至少包含1.5g/l特殊蛋白胨。
6、在一些实施方案中，所述计数培养基包含1.5-3.5g/l特殊蛋白胨。
7、在一些优选的实施方案中，所述计数培养基包含1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5g/l特殊蛋白胨。
8、在一些优选的实施方案中，所述计数培养基包含2.5g/l特殊蛋白胨。
9、在一些实施方案中，所述计数培养基至少包含4.0g/l胰蛋白胨大豆肉汤。
10、在一些实施方案中，所述计数培养基包含4.0-6.0g/l胰蛋白胨大豆肉汤。
11、在一些优选的实施方案中，所述计数培养基包含4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0g/l胰蛋白胨大豆肉汤。
12、在一些实施方案中，所述计数培养基至少包含0.3g/l tris buffer。
13、在一些实施方案中，所述计数培养基包含0.3-0.5g/l tris buffer。
14、在一些优选的实施方案中，所述计数培养基包含0.375g/l tris buffer。
15、在一些优选的实施方案中，所述计数培养基的组分包括：胰蛋白胨5.0g/l，胰蛋白胨大豆肉汤5.0g/l，脑心浸粉8.75g/l，氯化钠2.5g/l，葡萄糖3.5g/l，碳酸氢二钠(12h2o)1.25g/l，特殊蛋白胨2.5g/l，酵母提取物2.5g/l，半胱氨酸盐酸盐0.2g/l，氯化血红素0.005g/l，琼脂粉20g/l，tris buffer 0.375g/l，5％(v/v)无菌脱纤维羊血。
16、在一些实施方案中，所述计数培养基还包括微量元素盐。
17、在一些实施方案中，所述微量元素盐包括，但不限于k2hpo4·7h2o、mgso4·7h2o或mnso4·4h2o。
18、在一些实施方案中，所述计数培养基的ph为7.3-7.7。
19、在另一个方面，本专利技术提供了前述任一计数培养基在akkermansia muciniphila计数中的应用。
20、在又一个方面，本专利技术提供了前述任一计数培养基在益生菌制品检验和/或质量控制中的应用，所述益生菌制品包含akkermansia muciniphila。
21、在又一个方面，本专利技术提供了一种用于akkermansia muciniphila计数的试剂，所述试剂包括前述任一计数培养基。
22、在又一个方面，本专利技术提供了一种用于akkermansia muciniphila计数的试剂盒，所述试剂盒包括前述任一计数培养基或前述任一所述试剂。
23、在一些实施方案中，所述试剂盒还包括容纳所述计数培养基或试剂的容器。
24、在一些实施方案中，所述试剂盒还包括稀释液，优选0.9％(v/v)生理盐水。
25、在一些实施方案中，所述试剂盒还包括放大镜或菌落计数器。
26、与现有计数培养基相比，本专利技术提供的计数培养基适用于akkermansiamuciniphila的活菌计数，解决了现有计数培养基营养成分不适合或无法培养akkermansiamuciniphila，从而导致的计数结果偏低、无法准确计数或无法计数的技术缺陷。
27、本专利技术的计数培养基显著提高了akkermansia muciniphila在计数过程中的活力，与传统bhi计数培养基相比，akkermansia muciniphila活菌数显著提高了约4个数量级；经过专利技术人研究，国标gb 4789.35-2016提供的计数培养基无法培养akkermansiamuciniphila。此外，本专利技术提供的计数培养基还具有计数周期短的优势，可将计数周期缩短至3天。因此，本专利技术的计数培养基在益生菌制品检验和/或质量控制上具有较高的应用价值。
28、保藏信息：
29、生物材料：akk probio
30、分类命名：akkermansia muciniphila
31、保藏编号：cgmcc no.20955...
【技术保护点】
1.一种Akkermansia muciniphila的计数培养基，其特征在于，所述计数培养基的组分包括：胰蛋白胨，胰蛋白胨大豆肉汤，脑心浸粉，氯化钠，葡萄糖，碳酸氢二钠(12H2O)，特殊蛋白胨，酵母提取物，半胱氨酸盐酸盐，氯化血红素，琼脂粉，Tris Buffer和无菌脱纤维羊血。
2.根据权利要求1所述的计数培养基，其特征在于，所述计数培养基至少包含1.5g/L特殊蛋白胨；
3.根据权利要求2所述的计数培养基，其特征在于，所述计数培养基至少包含4g/L胰蛋白胨大豆肉汤；
4.根据权利要求1-3中任一所述的计数培养基，其特征在于，所述计数培养基至少包含0.3g/L Tris Buffer；
5.根据权利要求4的计数培养基，其特征在于，所述计数培养基的组分包括：胰蛋白胨5.0g/L，胰蛋白胨大豆肉汤5.0g/L，脑心浸粉8.75g/L，氯化钠2.5g/L，葡萄糖3.5g/L，碳酸氢二钠(12H2O)1.25g/L，特殊蛋白胨2.5g/L，酵母提取物2.5g/L，半胱氨酸盐酸盐0.2g/L，氯化血红素0.005g/L，琼脂粉20g/
6.根据权利要求5所述的计数培养基，其特征在于，所述计数培养基还包括微量元素盐；和/或
7.根据权利要求1-6中任一所述的计数培养基在Akkermansia muciniphila计数中的应用。
8.根据权利要求1-6中任一所述的计数培养基在益生菌制品检验和/或质量控制中的应用，其特征在于，所述益生菌制品包含Akkermansia muciniphila。
9.一种用于Akkermansia muciniphila计数的试剂，其特征在于，所述试剂包含权利要求1-6中任一所述的计数培养基。
10.一种用于Akkermansia muciniphila计数的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-6中任一所述的计数培养基；
...【技术特征摘要】
1.一种akkermansia muciniphila的计数培养基，其特征在于，所述计数培养基的组分包括：胰蛋白胨，胰蛋白胨大豆肉汤，脑心浸粉，氯化钠，葡萄糖，碳酸氢二钠(12h2o)，特殊蛋白胨，酵母提取物，半胱氨酸盐酸盐，氯化血红素，琼脂粉，tris buffer和无菌脱纤维羊血。
2.根据权利要求1所述的计数培养基，其特征在于，所述计数培养基至少包含1.5g/l特殊蛋白胨；
3.根据权利要求2所述的计数培养基，其特征在于，所述计数培养基至少包含4g/l胰蛋白胨大豆肉汤；
4.根据权利要求1-3中任一所述的计数培养基，其特征在于，所述计数培养基至少包含0.3g/l tris buffer；
5.根据权利要求4的计数培养基，其特征在于，所述计数培养基的组分包括：胰蛋白胨5.0g/l，胰蛋白胨大豆肉汤5.0g/l，脑心浸粉8.75g/l，氯化钠2.5g/l，葡萄糖3.5g/l，碳酸氢二钠(12h2o)1.25g/l，特殊蛋...
【专利技术属性】
技术研发人员：马新，温海霞，喻扬，郁雪平，李娜，
申请(专利权)人：善恩康生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：
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