【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，具体涉及一种a9区多巴胺能神经元的制备方法、试剂盒及应用。
技术介绍
1、帕金森病（parkinson’s disease，pd）是由位于中脑黑质（substantia nigra，sn）的多巴胺能神经元进行性退化引起的，超过1%的60岁以上人群患有该病。由于帕金森病的神经退行性病理学仅限于a9区多巴胺能神经元，受损的神经元位于中脑黑质并投射到纹状体，因此细胞疗法被认为是治疗帕金森病的一种有前途的策略。胎儿腹侧中脑（fetalventral mesencephalon，fvm）组织移植在一些帕金森患者中显示出显著疗效，但在两项双盲安慰剂对照临床试验中并未达到主要终点。因此研究人员也在尝试将转分化而来的多巴胺能神经元用于治疗帕金森病。
2、根据目前文献报道，利用分化而来的多巴胺能神经元治疗帕金森病时，基本都需要20-30天，甚至更长的时间才能得到th阳性的多巴胺能神经元；而且仅有10%左右的细胞为th阳性的细胞，分化效率很低。
3、因此，本领域技术人员希望开发周期短且更高分化效率的制备多巴胺
【技术保护点】
1.一种A9区多巴胺能神经元的制备方法，其特征在于，包括：在神经干细胞中，对以下靶基因中任意一个或两个以上的组合进行基于CRISPR的激活：ATOH1、NEUROG2、ASCL1；然后经分化培养和鉴定，即制备得到A9区多巴胺能神经元。
2.如权利要求1所述的A9区多巴胺能神经元的制备方法，其特征在于，进行所述基于CRISPR的激活包括，使所述神经干细胞表达与转录激活因子融合的内切酶缺陷Cas9和对所述靶基因特异的向导RNA；
3.如权利要求2所述的A9区多巴胺能神经元的制备方法，其特征在于，所述转录激活因子为具有独立招募RNA聚合酶能力的转录因
【技术特征摘要】
1.一种a9区多巴胺能神经元的制备方法，其特征在于，包括：在神经干细胞中，对以下靶基因中任意一个或两个以上的组合进行基于crispr的激活：atoh1、neurog2、ascl1；然后经分化培养和鉴定，即制备得到a9区多巴胺能神经元。
2.如权利要求1所述的a9区多巴胺能神经元的制备方法，其特征在于，进行所述基于crispr的激活包括，使所述神经干细胞表达与转录激活因子融合的内切酶缺陷cas9和对所述靶基因特异的向导rna；
3.如权利要求2所述的a9区多巴胺能神经元的制备方法，其特征在于，所述转录激活因子为具有独立招募rna聚合酶能力的转录因子蛋白。
4.如权利要求3所述的a9区多巴胺能神经元的制备方法，其特征在于，所述转录激活因子包括vp64、p65、rta中的一种或两种以上的组合。
5.如权利要求2所述的a9区多巴胺能神经元的制备方法，其特征在于，进行所...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈志国，李欣，韩德强，
申请(专利权)人：首都医科大学宣武医院，
类型：发明
国别省市：
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