【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及核酸药领域，具体而言，涉及一种核酸载体、核酸药及其制备方法和应用。
技术介绍
1、分子量较小(核苷酸数量通常不超过100)的单链或双链rna药物称之为“寡核苷酸药物”，寡核苷酸药物是与小分子药物、抗体药物完全不同的全新药物类别，其药物构成为核苷酸序列，药物机制为作用于mrna，通过基因沉默抑制靶蛋白的表达(即寡核苷酸药物作用于基因转录后，蛋白质翻译之前的阶段)，从而实现治疗疾病的目的，是生物制药创新的战略性前沿领域。
2、相比抗体药，寡核苷酸药物研发阶段不需要进行复杂蛋白修饰和cmc开发(工艺和质量控制)，生产阶段制备工艺相对简单，不需要大规模哺乳动物细胞发酵和蛋白纯化，具有候选靶点丰富、研发周期短、药效持久、临床开发成功率高等优势。寡核苷酸药物从转录后水平进行治疗，能针对难以成药的特殊蛋白靶点实现突破，有望攻克尚无药物治疗的疾病包括遗传疾病和其他难治疾病；具备针对“不可靶向”、“不可成药”疾病开发出治疗药物的巨大潜力，有望形成继小分子药物、抗体药物之后的现代新药第三次浪潮。
3、然而，寡核苷酸药物所存在的如下缺点是制约寡核苷酸药物发展的关键因素：一方面，寡核苷酸药物过分脆弱，在体内极易被核酸酶降解，化学修饰孤木难支；另一方面，寡核苷酸药物普遍具有免疫毒性，极容易给带给人体严重的副作用。因此，寡核苷酸药物的递送以及寡核苷酸药物的联合应用仍然是该领域亟待突破的一大瓶颈。
4、目前除了lnp(脂质纳米颗粒)和galnac两种经过临床验证的递送技术外，也有其他的递送方法的报道，比如圣诺
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的在于提供一种核酸载体、核酸药及其制备方法和应用，解决现有技术中各类寡核酸药递送效率低的问题，尤其是难以同时递送多种寡核苷酸药物的问题。
2、为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种核酸载体，该核酸载体包含a序列、b序列和c序列，核酸载体选自dna载体、rna载体、或dna-rna混合载体；a序列、b序列和c序列自组装形成核酸载体，其中，a序列、b序列和c序列包括载体骨架序列，载体骨架序列包括如下核心序列：a1序列、b1序列和c1序列，或者a1序列、b1序列和c1序列中至少之一的任意变异序列，变异序列包括至少一个碱基的插入、缺失或替换；dna载体中，a1序列为seq id no:1，b1序列为seq id no:2，c1序列为seq id no:3；rna载体中，a1序列为seq idno:4，b1序列为seq id no:5，c1序列为seq id no:6；其中，dna-rna混合载体为dna载体的序列和rna载体的序列的组合所自组装形成的载体；seq id no:1：acgagcgttccg；seq idno:2：cggttcgccg；seq id no:3：cggccatagccgt；seq id no:4：acgagcguuccg；seq id no:5：cgguucgccg；seq id no:6：cggccauagccgu。
3、进一步地，载体骨架序列还包括第一延长段及可选的第二延长段，第一延长段和第二延长段位于a1序列、b1序列和c1序列中任一序列的5‘端和/或3‘端；优选地，第一延长段和第二延长段各自独立地为1～14nt；优选地，第一延长段选自如下dna延长段或与dna延长段对应的rna延长段中的任意一种或多种；1)a1序列5‘端：gacgccc，c1序列3‘端：gggcgtc；2)a1序列3‘端：ggagagg，b1序列5‘端：cctctcc；3)b1序列3‘端：cgagcc，c1序列5‘端：ggctcg或ggcacg；4)a1序列5‘端：ggcgccc或gacgccc，c1序列3‘端：gggcgcc；5)a1序列3‘端：ggag，b1序列5‘端：ctcc；6)b1序列3‘端：ccagcc，c1序列5‘端：ggcacg或ggctcg；优选地，第二延长段选自如下dna延长段或与dna延长段对应的rna延长段中的任意一种或多种：1)a1序列5‘端：c或gc，c1序列的3‘端：gc或gct；2)a1序列3‘端：ag、agc或agct，b1序列5‘端：gct或ct；3)b1序列3‘端：gc、gcg或gcgt，c1序列5‘端：gc或cgc；4)a1序列3‘端：c、aggcc、aggcct或aggag，b1序列5‘端：g、ggcct或ctcct；5)b1序列3‘端：gcc或gcct，c1序列5‘端：ggc。
4、进一步地，核酸载体还包括如单链粘接桥序列和/或过渡序列，其中，单链粘接桥序列选自如下任意一种或多种：1)位于a序列的骨架序列的3‘端的：seq id no:7：tgtagcacggtggc或其互补序列seq id no:8：gccaccgtgctaca；2)位于b序列的骨架序列的3‘端的：seq id no:9：tcggcgcggccgtg或其互补序列seq id no:10：cacggccgcgccga；3)位于c序列的骨架序列的3‘端的：seq id no:11：tgctgctgctgctg或其互补序列seq id no:12：cagcagcagcagca；其中，过渡序列为连续n个u、t或a形成的序列，n为2～8，优选3-6的自然数，或者为a、u、t、c和/或g随机组合的序列，过渡序列位于核心序列的5‘端或3‘端；优选地，核酸载体中a序列、b序列及c序列分别如下：
5、a序列为：seq id no:15：gacgcccacgagcgttccgggagaggtgtagcacggtggc，其中，下划线部分为单链连接桥序列；
6、b序列为：seq id no:16：cctctcccggttcgccgcgagcctcggcgcggccgtg，其中，下划线部分为单链连接桥序列；
7、c序列为：seq id no:17：ggctcgcggccatagccgtgggcgtctgctgctgctgctg，其中，下划线部分为单链连接桥序列；或者
8、核酸载体中a序列、b序列及c序列分别如下：
9、a序列为：seq id no:18：gcgacgcccacgagcgttccgggagaggagc；
10、b序列为：seq id no:19：gctcctctcccggttcgccgcgagccgcg；
11、c序列为：
12、seqidno:20：cagcagcagcagcacgcggctcgcg本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种核酸载体，其特征在于，所述核酸载体包含a序列、b序列和c序列，所述核酸载体选自DNA载体、RNA载体、或DNA-RNA混合载体；
2.根据权利要求1所述的核酸载体，其特征在于，所述载体骨架序列还包括第一延长段及可选的第二延长段，所述第一延长段和所述第二延长段位于所述a1序列、所述b1序列和所述c1序列中任一序列的5’端和/或3’端，
3.根据权利要求1或2所述的核酸载体，其特征在于，所述核酸载体还包括如单链粘接桥序列和/或过渡序列，
4.根据权利要求1或2所述的核酸载体，其特征在于，自组装形成所述核酸载体的所述骨架序列分别选择如下任意一组：
5.根据权利要求1至4中任一项所述的核酸载体，其特征在于，所述a序列、所述b序列和所述c序列中碱基、核糖和磷酸酯中至少之一具有至少一个可修饰位点，任一所述可修饰位点具有如下至少一种修饰：-F、甲基、氨基、二硫化物、羰基、羧基、巯基、醛基及硫代；
6.一种核酸药，其特征在于，所述核酸药包括1至5中任意一项所述的核酸载体及挂载在所述核酸载体上的生物活性物质，所述生物活性物质包括寡
7.根据权利要求6所述的核酸药，其特征在于，所述核酸免疫刺激剂包括CpG2006、CpG2006变形、CpG1826、CpG2216、CpG2395、CpG-ODNT7及CpG-BYZD的一种或多种；
8.根据权利要求6所述的核酸药，其特征在于，所述siRNA包括如下任一种或多种分子的siRNA：ASAP1、ATAD2、CD24、CD47、EGFR、HBV、HSP、HS70、PD-L1、PARP-1、Survivin、TAP、TIM-3、TGF-β1及VEGF-C；
9.根据权利要求6所述的核酸药，其特征在于，所述核酸适配体包括DNA形式的核酸适配体或RNA形式的核酸适配体；
10.根据权利要求6所述的核酸药，其特征在于，具有靶向作用的所述小分子化合物选自叶酸、生物素、维生素B12和甘露糖中的一种或多种，具有靶向作用的所述小分子化合物位于所述a序列，所述b序列及所述c序列中至少之一的5’端或3’端。
11.根据权利要求6-10中任一项所述的核酸药，其特征在于，各种不同的所述寡核苷酸效应分子各自独立地通过如下任意一种或多种方式挂载在所述核酸载体上：1)单链粘接桥序列；2)所述单链粘接桥序列的互补序列；3)过渡序列，其中，所述单链粘接桥序列和所述过渡序列为权利要求3所述的核酸载体中的所述单链粘接桥序列和所述过渡序列；
12.根据权利要求11所述的核酸药，其特征在于，所述核酸药选自如下任意一种：
13.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求6至12中任一项所述的核酸药中的任意一种或多种，以及可选地药学上可接受的载体和/或辅料。
14.根据权利要求13所述的组合物，其特征在于，所述药物组合物中至少一种药物选自权利要求12所述的核酸药，所述药物组合物选自如下任意一个组合；
15.一种权利要求1至5中任一项所述的核酸载体、6至12中任一项所述的核酸药或权利要求13或14所述的药物组合物在制备用于治疗肿瘤、除了肝癌之外的肝病或冠状病毒感染导致的疾病的药物中的应用。
16.根据权利要求15所述的应用，其特征在于，所述除了肝癌之外的肝病为乙肝或丙肝；所述冠状病毒感染导致的疾病包括COVID-19；所述肿瘤为男科肿瘤、妇科肿瘤、呼吸系统肿瘤、消化系统肿瘤、血液科肿瘤、泌尿系统肿瘤、骨髓肿瘤、神经科肿瘤、皮肤科肿瘤、普外科肿瘤或五官科肿瘤；
17.一种权利要求6至16中任一项所述的核酸药的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括将含有a序列、b序列及c序列的核酸载体及挂载于所述核酸载体上的至少一个寡核苷酸效应分子通过至少一条链自组装的方式得到所述核酸药；
18.根据权利要求17所述的制备方法，其特征在于，通过2-8条，优选3～6条链自组装的方式得到所述核酸药。
19.根据权利要求18所述的制备方法，其特征在于，当通过大于3链自组装时，所述制备方法包括：
20.根据权利要求19所述的制备方法，其特征在于，所述寡核苷酸效应分子包括siRNA时，
21.根据权利要求19所述的制备方法，其特征在于，所述寡核苷酸效应分子包括miRNA和/或所述核酸免疫刺激剂，所述miRNA直接合成和/或所述核酸免疫刺激剂通过过渡序列合成于修饰或未修饰的所述a序...
【技术特征摘要】
1.一种核酸载体，其特征在于，所述核酸载体包含a序列、b序列和c序列，所述核酸载体选自dna载体、rna载体、或dna-rna混合载体；
2.根据权利要求1所述的核酸载体，其特征在于，所述载体骨架序列还包括第一延长段及可选的第二延长段，所述第一延长段和所述第二延长段位于所述a1序列、所述b1序列和所述c1序列中任一序列的5’端和/或3’端，
3.根据权利要求1或2所述的核酸载体，其特征在于，所述核酸载体还包括如单链粘接桥序列和/或过渡序列，
4.根据权利要求1或2所述的核酸载体，其特征在于，自组装形成所述核酸载体的所述骨架序列分别选择如下任意一组：
5.根据权利要求1至4中任一项所述的核酸载体，其特征在于，所述a序列、所述b序列和所述c序列中碱基、核糖和磷酸酯中至少之一具有至少一个可修饰位点，任一所述可修饰位点具有如下至少一种修饰：-f、甲基、氨基、二硫化物、羰基、羧基、巯基、醛基及硫代；
6.一种核酸药，其特征在于，所述核酸药包括1至5中任意一项所述的核酸载体及挂载在所述核酸载体上的生物活性物质，所述生物活性物质包括寡核苷酸效应分子及靶向递送所述寡核苷酸分子的靶向分子，其中，所述寡核苷酸效应分子选自如下至少一种：核酸免疫刺激剂、核酸适配体、sirna、mirna及aso；且
7.根据权利要求6所述的核酸药，其特征在于，所述核酸免疫刺激剂包括cpg2006、cpg2006变形、cpg1826、cpg2216、cpg2395、cpg-odnt7及cpg-byzd的一种或多种；
8.根据权利要求6所述的核酸药，其特征在于，所述sirna包括如下任一种或多种分子的sirna：asap1、atad2、cd24、cd47、egfr、hbv、hsp、hs70、pd-l1、parp-1、survivin、tap、tim-3、tgf-β1及vegf-c；
9.根据权利要求6所述的核酸药，其特征在于，所述核酸适配体包括dna形式的核酸适配体或rna形式的核酸适配体；
10.根据权利要求6所述的核酸药，其特征在于，具有靶向作用的所述小分子化合物选自叶酸、生物素、维生素b12和甘露糖中的一种或多种，具有靶向作用的所述小分子化合物位于所述a序列，所述b序列及所述c序列中至少之一的5’端或3’端。
11.根据权利要求6-10中任一项所述的核酸药，其特征在于，各种不同的所述寡核苷酸效应分子各自独立地通过如下任意一种或多种方式挂载在所述核酸载体上：1)单链粘接桥序列；2)所述单链粘接桥序列的互补序列；3)过渡序列，其中，所述单链粘接桥序列和所述过渡序列为权利要求3所述的核酸载体中的所述单链粘接桥序列和所述过渡序列；
12.根据权利要求11所述的核酸药，其特征在于，所述核酸药选自如下任意一种：
13.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求6至12中任一项所述的核酸药中的任意一种或多种，以及可选地药学上可接受的载体和/或辅料。
14.根据权利要求13所述的组合物，其特征在于，所述药物组合物中至少一种药物选自权利要求12所述的核酸药，所述药物...
【专利技术属性】
技术研发人员：王力源，魏鸿，王萌，
申请(专利权)人：百药智达北京纳米生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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