【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗体制备，特别涉及抗小鼠白细胞介素10的兔单克隆抗体及其应用。
技术介绍
1、白细胞介素10(interlenkin 10，il-10)，简称白介素10，也称为细胞因子合成抑制因子(cytokine synthesis inhibitory factor，csif)，是一种多效性细胞因子，其主要由抗原呈递细胞分泌，如活化的t细胞(主要包括th2细胞)、单核细胞、b细胞和巨噬细胞。小鼠和人il-10基因都定位于第1号染色体，其基因组包括5个外显子和4个内含子。人和小鼠il-10在dna和氨基酸水平上分别有81％和73％的同源性，人il-10可作用于鼠源性细胞，而小鼠il-10对人的细胞则无交叉反应。il-10具有双向免疫调节作用，可以在多种类型细胞中发挥免疫抑制或免疫刺激的作用，一方面，il-10可以通过降低树突状细胞、巨噬细胞表面主要组织相容性抗原ⅱ(mhc2)类分子的表达，削弱抗原呈递细胞(apc)的功能，还能下调t淋巴细胞活性，抑制炎性细胞的激活、迁移和粘附，在肿瘤环境中对免疫应答具有负向调节作用；另一方面，il-10对t、b淋巴细胞具有刺激作用，并且在肿瘤环境中il-10也能发挥刺激作用。il-10的双向调节作用不仅影响免疫系统，而且可以通过调节生长因子、细胞因子影响许多病理生理过程，包括血管生成、肿瘤形成和感染，还能通过诱导调节性t细胞在外周耐受中建立作用。
2、il-10表达异常如过度表达和缺乏都具有病理生理学意义，肿瘤生长、全身性红斑狼疮(sle)、淋巴瘤、皮肤癌属于il-10表达过多的疾病
3、开发特异性好的抗il-10抗体是实现精确、灵敏检测il-10的基础。目前，已有专利公开了用于il-10蛋白的免疫检测抗体的开发，采用的免疫原主要是人源、禽源或鱼源的il-10重组蛋白，并无针对鼠源il-10蛋白开发的单克隆抗体。然而，相当多的il-10研究相关的动物疾病模型是用小鼠物种造模的，因此开发一种性能优良的抗小鼠白细胞介素10的单克隆抗体对深入研究该蛋白的生物学功能和对il-10抗原在相关疾病中的表达水平检测具有非常重要的意义和临床使用价值。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的上述问题，本专利技术提供了抗小鼠白细胞介素10的兔单克隆抗体及其应用，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。
2、为实现上述目的，本专利技术具体通过以下技术方案实现：
3、本专利技术第一方面提供了一种抗小鼠白细胞介素10的兔单克隆抗体，包括兔单克隆抗体2h4和/或兔单克隆抗体3f5，所述兔单克隆抗体包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区和所述重链可变区均包括3个互补决定区(cdr)；其中：所述兔单克隆抗体2h4的轻链cdr1、轻链cdr2和轻链cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.3-5所示，重链cdr1、重链cdr2和重链cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.8-10所示；所述兔单克隆抗体3f5的轻链cdr1、轻链cdr2和轻链cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.13-15所示，重链cdr1、重链cdr2和重链cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.18-20所示。
4、进一步地，所述兔单克隆抗体2h4的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示，重链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示；所述兔单克隆抗体3f5的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.12所示，重链可变区的氨基酸序列如seq id no.17所示。
5、进一步地，所述兔单克隆抗体还包括轻链恒定区和重链恒定区，所述兔单克隆抗体2h4和所述兔单克隆抗体3f5的轻链恒定区均为κ链，重链恒定区均为igg1型。
6、进一步地，所述兔单克隆抗体2h4的轻链的氨基酸序列如seq id no.1所示，重链的氨基酸序列如seq id no.6所示；所述兔单克隆抗体3f5的轻链的氨基酸序列如seq idno.11所示，重链的氨基酸序列如seq id no.16所示。
7、本专利技术第二方面提供了一种核酸分子，所述核酸分子用于编码如上所述的兔单克隆抗体2h4和/或兔单克隆抗体3f5。
8、进一步地，所述兔单克隆抗体2h4的轻链可变区的核苷酸序列如seq id no.21所示，重链可变区的核苷酸序列如seq id no.22所示；所述兔单克隆抗体3f5的轻链可变区的核苷酸序列如seq id no.23所示，重链可变区的核苷酸序列如seq id no.24所示。
9、本专利技术第三方面提供了一种重组载体，所述重组载体包含用于编码如上所述的兔单克隆抗体2h4和/或兔单克隆抗体3f5的核酸分子。
10、本专利技术第四方面提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如上所述的重组载体或者所述宿主细胞的基因组中整合有编码如上所述的兔单克隆抗体2h4和/或兔单克隆抗体3f5的核酸分子。
11、本专利技术第五方面提供了一种免疫检测小鼠白细胞介素10的试剂盒，所述试剂盒包括如上所述的兔单克隆抗体2h4和/或兔单克隆抗体3f5。
12、进一步地，免疫检测方法包括酶免疫分析法、酶联免疫吸附法、酶联免疫斑点法、免疫组织化学法、免疫荧光法、免疫印迹法和流式细胞术中的一种或多种。
13、进一步地，免疫检测方法为双抗夹心酶联免疫吸附法，所述双抗体夹心酶联免疫吸附法中，捕获抗体为所述兔单克隆抗体2h4，检测抗体为经可检测标记物标记的所述兔单克隆抗体3f5。
14、进一步地，免疫检测样本为表达il-10蛋白的组织样本、表达il-10蛋白的细胞系样本、分泌il-10蛋白的血清样本和重组表达的il-10蛋白中的一种或多种。
15、本专利技术的优点及积极效果为：
16、1、本专利技术提供的兔单克隆抗体2h4和/或兔单克隆抗体3f5对小鼠白细胞介素10的亲和力高且特异性好，在用于免疫检测小鼠il-10蛋白具有高准确性、良好的可靠性和优良的抗干扰能力，为免疫检测小鼠il-10蛋白的分布、表达水平或生物学功能提供了有效的抗体原材料。
17、2、本专利技术提供的兔单克隆抗体2h4和3f5识别和特异性结合小鼠il-10蛋白表面不同的抗原表位且互不干扰，可作为双抗夹心酶联免疫吸附法的配对抗体，以兔单克隆抗体2h4为捕获抗体，兔单克隆抗体3f5为检测抗体，检测小鼠il-10蛋白的检测限为1.965pg/ml，建立的双抗夹心酶联免疫吸附法具有特异性高、抗干扰能力强、检测灵敏度高和稳定性好等诸多优点。
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1.一种抗小鼠白细胞介素10的兔单克隆抗体，其特征在于，包括兔单克隆抗体2H4和/或兔单克隆抗体3F5，所述兔单克隆抗体包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区和所述重链可变区均包括3个互补决定区；其中：
2.根据权利要求1所述的抗小鼠白细胞介素10的兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体2H4的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示；
3.根据权利要求1所述的抗小鼠白细胞介素10的兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体还包括轻链恒定区和重链恒定区，所述兔单克隆抗体2H4和所述兔单克隆抗体3F5的所述轻链恒定区均为κ链，所述重链恒定区均为IgG1型。
4.根据权利要求1所述的抗小鼠白细胞介素10的兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体2H4的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；
5.一种核酸分子，其特征在于，用于编码如权利要求1-4任一项所述的兔单克隆抗体2H4和/或兔单克隆抗体3F5。
7.一种重组载体，其特征在于，包含用于编码如权利要求1-4任一项所述的兔单克隆抗体2H4和/或兔单克隆抗体3F5的核酸分子。
8.一种宿主细胞，其特征在于，包含如权利要求7所述的重组载体或者所述宿主细胞的基因组中整合有编码如权利要求5所述的核酸分子。
9.一种免疫检测小鼠白细胞介素10的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-4任一项所述的兔单克隆抗体2H4和/或兔单克隆抗体3F5；
10.根据权利要求9所述的免疫检测小鼠白细胞介素10的试剂盒，其特征在于，免疫检测方法为双抗夹心酶联免疫吸附法，所述双抗体夹心酶联免疫吸附法中，捕获抗体为所述兔单克隆抗体2H4，检测抗体为经可检测标记物标记的所述兔单克隆抗体3F5。
...【技术特征摘要】
1.一种抗小鼠白细胞介素10的兔单克隆抗体，其特征在于，包括兔单克隆抗体2h4和/或兔单克隆抗体3f5，所述兔单克隆抗体包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区和所述重链可变区均包括3个互补决定区；其中：
2.根据权利要求1所述的抗小鼠白细胞介素10的兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体2h4的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示，重链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示；
3.根据权利要求1所述的抗小鼠白细胞介素10的兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体还包括轻链恒定区和重链恒定区，所述兔单克隆抗体2h4和所述兔单克隆抗体3f5的所述轻链恒定区均为κ链，所述重链恒定区均为igg1型。
4.根据权利要求1所述的抗小鼠白细胞介素10的兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体2h4的轻链的氨基酸序列如seq id no.1所示，重链的氨基酸序列如seq id no.6所示；
5.一种核酸分子，其特征在于，用于编码如权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：张云，吴海，景攀，熊英，李博晗，吴琬昕，程朝霞，
申请(专利权)人：武汉爱博泰克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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