【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物制剂领域，更具体地，涉及一种重组腺相关病毒x(raavx)载体制剂。
技术介绍
1、基因治疗为治疗基因缺陷疾病以及病毒感染等引起的多种疾病提供了一种新的思路和解决方案，随着一些重大疾病的基因治疗获得成功，标志着基因治疗已取得重大突破。重组腺相关病毒(raav)作为基因治疗载体，具有非常多的优势，如感染效率高、感染范围广、长期表达和高安全性等(david af等，2007，bmc bio 7:75)，已被广泛应用于临床试验。
2、根据衣壳蛋白的不同，腺相关病毒(aav)可分为多种血清型，例如aav1-aav12(高光平等，2004，j virolm 78:6381-6388；mori s等，2004，virology 330:375-383；schmidtm等，2008，j virol 82:1399-1406)，主要以人类和灵长类动物为宿主。其中aav1-6是从人类组织中分离获得的；aav7和aav8是高光平等通过基因工程手段从猕猴心脏组织拯救得到的；而aav9-12是利用同类技术路线分别从人和短尾猴的组织中制备的。尽管不同血清型的aav病毒都具有正二十面体的结构，但其衣壳蛋白在序列与空间构象上存在多样性，使得其细胞表面的结合受体以及对细胞的感染嗜性存在显著差异(timpe j等，2005，curr genether 5:273-284)。例如，在感染嗜性方面，aav2的感染谱较广，尤对神经细胞效果最好；aav1和aav7在骨骼肌中的转导效率较高；aav3易于转导巨核细胞；aav5和aav6感染呼吸
3、目前对于腺相关病毒(aav)衣壳蛋白改造的研究越来越多，改造的目的一方面能够增强病毒载体的靶向性，另一方面能够降低病毒载体的免疫原性。改造方法包括利用dna改组(dna shuffling)或易错pcr的方法，获得功能优化的新型aav病毒载体的衣壳蛋白。例如，grimm等人利用aav构建的改组文库，在静脉注射免疫球蛋白的严格筛选情况下，得到一个aav2，8，9组成的嵌合体aav-dj，该载体对成纤维细胞和肺等多种细胞系有更高的转导效率(grimm d等，2008，j virol 82：5887-5911)。jang等人利用dna改组文库筛选到了一个能高效感染神经干细胞的aav变体r3.45(jang j h，2011，mol ther 19：667-675)。aavx即是利用dna shuffling技术获得的新型aav载体(xiao xiao等，us9186419b2)，研究表明aavx对于肝脏靶向具有很好的转导效率(参见，例如wo2022/100748a1)。
4、虽然重组腺相关病毒(raav)作为一种基因治疗载体，在基因治疗方面具有广阔的应用前景，但是基于aav基因治疗的制剂开发仍处于早期阶段(例如，yu(zoe)zhang.international journal of pharmaceutics,2021,606:120912)，尤其对于raavx，其制剂目前尚无相关报道。
5、临床和商业化的aav产品需要具有长期储存稳定性以维持其功效，大多数临床和商业aav产品是冷冻储存的(arvind srivastava.journal of pharmaceutical sciences,2021,000:1-16)。在冻融过程中，潜在的病毒颗粒聚集是aav产品制剂开发的主要挑战之一，例如上市产品zolgensma要求在-60℃以下保存，解冻后在2-8℃保存，且不可再次冻融(zolgensma,2019,package insert.novartis gene therapies,inc.)，这表明产品在冻融条件下的稳定性有待提高。
6、对于采用静脉注射的aav产品来说，渗透压是需要考虑的另外一个因素。正常人体血液的渗透压摩尔浓度范围为285-310mosmol/kg(中国药典2020年版，0632渗透压摩尔浓度测定法，85-86)，超过这个范围，给药时病人会有痛感。zolgensma的nacl浓度为200mm，制剂渗透压约为400mosmol/kg，因此给药时要求单剂量静脉输注60分钟以上。该制剂中采用了较高的离子强度，虽然可以在一定程度上防止aav聚集，但同时也会带来渗透压方面的问题。
7、基于以上问题，仍然需要对raav制剂进行改进，尤其是对raavx制剂进行开发研究，以使aav产品，尤其是raavx产品在储存和运输过程中，在不同的温度环境下都可以保持更高的稳定性。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种重组腺相关病毒(raav)载体的制剂，所述制剂包含重组腺相关病毒(raav)载体、药学上可接受的缓冲液、非离子表面活性剂和糖类。
2、重组腺相关病毒(raav)载体
3、根据本专利技术中所述的重组腺相关病毒(raav)载体的制剂，在一些实施方案中，所述重组腺相关病毒(raav)载体具有来源于aavx的衣壳蛋白。
4、在一些具体实施方案中，所述来源于aavx的衣壳蛋白包含如seq id no：1所示的氨基酸序列或seq id no：1所示的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基而得到的氨基酸序列，或与seq id no：1所示氨基酸序列具有80％以上(例如，85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97、98％或99％)序列同一性的氨基酸序列。
5、糖类
6、根据本专利技术中所述的重组腺相关病毒(raav)载体的制剂，在一些实施方案中，所述制剂中的糖类包括蔗糖、海藻糖或其组合，优选为蔗糖。
7、在一些具体实施方案中，所述糖类(例如，蔗糖、海藻糖或其组合)的浓度为0.5％-3.5％(w/v)，在一些具体实施方案中，所述糖类浓度优选为0.5％-3％(w/v)、0.8％-2.5％(w/v)更优选为1.0％-2.0％(w/v)。在某些具体实施方案中，所述蔗糖浓度为1.0％(w/v)，1.1％(w/v)，1.2％(w/v)，1.3％(w/v)，1.4％(w/v)，1.5％(w/v)，1.6％(w/v)，1.7％(w/v)，1.8％(w/v)，1.9％(w/v)，2.0％(w/v)，优选1.0％(w/v)，1.5％(w/v)，2.0％(w/v)，更优选1.5％(w/v)。
8、缓冲液
9、根据本专利技术中所述的重组腺相关病毒载体的制剂，在一些实施方案中，所述药学上可接受的缓冲液包含磷酸盐缓冲液或tris缓冲液，优选为磷酸盐缓冲液。在一些具体实施方案中，所述磷酸盐缓冲液包含氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾。
10、在某些具体实施方案中，所述氯化钠的终浓度为4.0mg/ml-12.0mg/ml，优选为5.0mg/ml-11.0mg/ml，6.0mg/ml-10.0mg/ml，更优选7.0mg/ml-9.0mg/ml。在一些具体实施方案中，所本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组腺相关病毒(rAAV)载体制剂，其特征在于，所述制剂包含重组腺相关病毒(rAAV)载体、药学上可接受的缓冲液、非离子表面活性剂以及糖类。
2.如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述重组腺相关病毒(rAAV)载体具有来源于AAVX的衣壳蛋白。
3.如权利要求2所述的制剂，其特征在于，所述AAVX衣壳蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示；或由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列经过取代、缺失和/或添加一个或多个氨基酸残基而得到的氨基酸序列；或与SEQ ID NO：1所示氨基酸序列具有80％以上序列同一性的氨基酸序列。
4.如权利要求1-3任一项所述的制剂，其特征在于，所述糖类为蔗糖、海藻糖或其组合，优选为蔗糖。
5.如权利要求4所述的制剂，其特征在于，所述糖类的浓度为0.5％-3.5％(w/v)，优选为1.0％-2.0％(w/v)，更优选为1.5％(w/v)。
6.如权利要求1-5中任一项所述的制剂，其特征在于，所述药学上可接受的缓冲液为磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液，优选为磷酸盐缓冲液。
7
8.如权利要求7所述的制剂，其特征在于，所述氯化钠的终浓度为4.0mg/ml-12.0mg/ml，优选7.0mg/ml-9.0mg/ml，更优选为8.0mg/ml；
9.如权利要求1-8任一项所述的制剂，其特征在于，所述非离子表面活性剂为聚山梨酯80、泊洛沙姆188或其组合，优选为泊洛沙姆188。
10.如权利要求9所述的制剂，其特征在于，所述非离子表面活性剂的浓度为0.0005％-0.05％(w/v)，优选为0.001％-0.01％(w/v)，更优选为0.005％(w/v)。
11.如权利要求1-10任一项所述的制剂，其特征在于，所述重组腺相关病毒载体的基因组滴度为1.0×109vg/ml-8.0×1013vg/ml，优选为2.0×1011vg/ml-5.0×1013vg/ml。
12.如权利要求11所述的制剂，其特征在于，所述重组腺相关病毒载体的基因组滴度为2.0×1011vg/ml、3.5×1012vg/ml或5.0×1013vg/ml，更优选为3.5×1012vg/ml。
13.如权利要求1-12中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂的pH值为6.0-9.0，优选为7.3-8.5，更优选为7.3。
14.如权利要求1-13中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂包含：
15.如权利要求14所述的制剂，其特征在于，所述制剂包含：
16.如权利要求15所述的制剂，其特征在于，所述制剂包含：
...【技术特征摘要】
1.一种重组腺相关病毒(raav)载体制剂，其特征在于，所述制剂包含重组腺相关病毒(raav)载体、药学上可接受的缓冲液、非离子表面活性剂以及糖类。
2.如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述重组腺相关病毒(raav)载体具有来源于aavx的衣壳蛋白。
3.如权利要求2所述的制剂，其特征在于，所述aavx衣壳蛋白的氨基酸序列如seq idno：1所示；或由seq id no：1所示的氨基酸序列经过取代、缺失和/或添加一个或多个氨基酸残基而得到的氨基酸序列；或与seq id no：1所示氨基酸序列具有80％以上序列同一性的氨基酸序列。
4.如权利要求1-3任一项所述的制剂，其特征在于，所述糖类为蔗糖、海藻糖或其组合，优选为蔗糖。
5.如权利要求4所述的制剂，其特征在于，所述糖类的浓度为0.5％-3.5％(w/v)，优选为1.0％-2.0％(w/v)，更优选为1.5％(w/v)。
6.如权利要求1-5中任一项所述的制剂，其特征在于，所述药学上可接受的缓冲液为磷酸盐缓冲液或tris缓冲液，优选为磷酸盐缓冲液。
7.如权利要求6所述的制剂，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液包含氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾。
8.如权利要求7所述的制剂，其特征在于，所述氯化钠的终浓度为4.0mg/ml-12.0mg/ml，优选...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈丙权，张雪瑾，何峻，
申请(专利权)人：北京三诺佳邑生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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