【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及兽用疫苗及微生物细胞培养，尤其涉及一种提高csfv-e2蛋白表达量的培养基的应用。
技术介绍
1、csfv-e2蛋白，即猪瘟病毒e2蛋白，因其具有相较优势的序列保守性和免疫显性，在猪瘟病毒疫苗的开发中具有广泛应用。
2、本领域常使用cho细胞（中国仓鼠卵巢细胞）用于csfv-e2蛋白的表达。早期的cho细胞表达csfv-e2蛋白时，存在细胞过早凋亡，蛋白表达量低的问题。高密度培养cho细胞时，受到培养条件等诸多因素影响，同样存在细胞表达蛋白效率较低的问题。
3、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种提高csfv-e2蛋白表达量的培养基的应用。具体的，本专利技术的技术方案如下：
2、第一方面，本专利技术提供了一种提高csfv-e2蛋白表达量的培养基在发酵生产csfv-e2蛋白中的应用，所述培养基以cd cho 011为基础培养基，添加8-12mm的l-精氨酸；所述csfv-e2蛋白由seq id no：1所示的核苷酸序列表达获得。
3、本领域常采用细胞发酵方式生产csfv-e2蛋白，早期的细胞发酵表达csfv-e2蛋白时，存在细胞过早凋亡，蛋白表达量低的问题。本专利技术使用cd cho 011无血清培养基培养具有表达csfv-e2蛋白功能的细胞，发现在cd cho 011无血清培养基中补充加入l-精氨酸，使培养基中l-精氨酸的浓度控制在8-12mm，优选8mm，能极大程度地
4、cd cho 011是一种无血清培养基，l-精氨酸是一种常见氨基酸成分，二者均可从常规市售渠道购买得到。在本专利技术提供的实施例中，所述cd cho 011培养基购买自甘肃健顺生物科技有限公司，货号：88011-317；所述l-精氨酸购买自sigma（西格玛）公司。
5、优选的，本专利技术所述培养基还添加有d-葡萄糖。
6、在本专利技术中，所述d-葡萄糖的添加量优选为2.5-4g/l，更优选为4g/l。
7、本专利技术对所述d-葡萄糖的来源不作特别限定，本领域常规市售来源均可。在本专利技术提供的实施例中，所述d-葡萄糖购买自gibco（赛默飞世尔科技公司）。
8、进一步优选地，本专利技术在发酵生产csfv-e2蛋白的过程中添加cd feed 002营养补充剂。
9、本专利技术在使用前述培养基发酵生产csfv-e2蛋白的过程中，添加cd feed 002营养补充剂，有助于降低因前期添加l-精氨酸导致的细胞代谢产物积聚，进而减少代谢产物对细胞后期生长和蛋白表达造成的不利影响。
10、在本专利技术中，所述培养基和所述cd feed 002营养补充剂的体积比优选为6-14:1，更优选为8-12:1更优选为10:1。
11、在本专利技术提供的更为优选的实施方式中，所述培养基以cd cho 011为基础培养基，添加8mm的l-精氨酸，4g/l的d-葡萄糖；且所述培养基和所述cd feed 002营养补充剂的体积比为10:1。
12、cd feed 002营养补充剂可以从公开市售渠道购买获得。在本专利技术提供的实施例中，所述cd feed 002营养补充剂购买自甘肃健顺生物科技有限公司，货号：99014-302。
13、第二方面，本专利技术更为具体地提供了一种生产csfv-e2蛋白的方法，包括如下步骤：使用所述培养基培养具有表达csfv-e2蛋白功能的细胞。
14、优选地，所述培养的初始细胞密度＞2×105cells/ml，二氧化碳浓度为6-10%，培养温度为37±0.5℃。
15、更优选地，所述培养的初始细胞密度为8×105cells/ml，二氧化碳浓度为8%，培养温度为37℃。
16、上述培养条件下的细胞生长效率及细胞活率更高，csfv-e2蛋白产量高，生产效率高。
17、在本专利技术提供的更为优选的实施方式中，所述生产csfv-e2蛋白的方法使用所述培养基培养具有表达csfv-e2蛋白功能的细胞；在培养至第3-5天时，按照细胞初始培养体积的6-14vol%添加cd feed 002营养补充剂；在培养至第8-10天时，再次按照细胞初始培养体积的6-14vol%添加cd feed 002营养补充剂；培养至第12-14天收获培养液。
18、更优选地，本专利技术使用所述培养基培养具有表达csfv-e2蛋白功能的细胞；在培养至第4天时，按照细胞初始培养体积的10vol%添加所述cd feed 002营养补充剂；在培养至第9天时，再次按照细胞初始培养体积的10vol%添加所述cd feed 002营养补充剂；培养至第13天收获培养液。
19、在本专利技术中，所述具有表达csfv-e2蛋白功能的细胞可选自本领域任何已知具有表达csfv-e2蛋白功能的细胞，或者采用本领域常规方法构建获得的具有表达csfv-e2蛋白功能的细胞。优选地，所述具有表达csfv-e2蛋白功能的细胞为cho细胞，该cho细胞用于表达csfv-e2蛋白的核苷酸序列如seq id no：1所示。
20、有益效果：
21、本专利技术提供了一种提高csfv-e2蛋白表达量的培养基的应用。本专利技术所述提高csfv-e2蛋白表达量的培养基，以cd cho 011为基础培养基，添加8-12mm的l-精氨酸。该培养基能极大程度地提升细胞活率和培养后期的活细胞数量，提高csfv-e2蛋白的表达量。本专利技术在使用前述培养基发酵生产csfv-e2蛋白的过程中，添加cd feed 002营养补充剂，有助于降低因前期添加l-精氨酸导致的细胞代谢产物积聚，进而减少代谢产物对细胞后期生长和蛋白表达造成的不利影响。
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1.培养基在发酵生产CSFV-E2蛋白中的应用，其特征在于，所述培养基以CD CHO 011为基础培养基，添加8-12mM的L-精氨酸；所述CSFV-E2蛋白由SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列表达获得。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述培养基还添加有D-葡萄糖，所述D-葡萄糖的浓度为2.5-4g/L。
3.根据权利要求1所述应用，其特征在于，在发酵生产CSFV-E2蛋白的过程中添加CDFeed 002营养补充剂；所述培养基和所述CD Feed 002营养补充剂的体积比为6-14:1。
4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述培养基以CD CHO 011为基础培养基，添加8mM的L-精氨酸，4g/L的D-葡萄糖；所述培养基和所述CD Feed 002营养补充剂的体积比为10:1。
5.一种生产CSFV-E2蛋白的方法，其特征在于，使用培养基培养具有表达CSFV-E2蛋白功能的细胞，所述培养基以CD CHO 011为基础培养基，添加8-12mM的L-精氨酸；所述CSFV-E2蛋白由SEQ ID NO：1所示的核苷酸
6.根据权利要求5所述生产CSFV-E2蛋白的方法，其特征在于，所述培养的初始细胞密度＞2×105cells/ml，二氧化碳浓度为6-10%，培养温度为37±0.5℃。
7.根据权利要求6所述生产CSFV-E2蛋白的方法，其特征在于，使用所述培养基培养具有表达CSFV-E2蛋白功能的细胞；在培养至第3-5天时，按照细胞初始培养体积的6-14vol%添加CD Feed 002营养补充剂；在培养至第8-10天时，再次按照细胞初始培养体积的6-14vol%添加CD Feed 002营养补充剂；培养至第12-14天收获培养液。
8.根据权利要求7所述生产CSFV-E2蛋白的方法，其特征在于，所述具有表达CSFV-E2蛋白功能的细胞为CHO细胞。
...【技术特征摘要】
1.培养基在发酵生产csfv-e2蛋白中的应用，其特征在于，所述培养基以cd cho 011为基础培养基，添加8-12mm的l-精氨酸；所述csfv-e2蛋白由seq id no：1所示的核苷酸序列表达获得。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述培养基还添加有d-葡萄糖，所述d-葡萄糖的浓度为2.5-4g/l。
3.根据权利要求1所述应用，其特征在于，在发酵生产csfv-e2蛋白的过程中添加cdfeed 002营养补充剂；所述培养基和所述cd feed 002营养补充剂的体积比为6-14:1。
4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述培养基以cd cho 011为基础培养基，添加8mm的l-精氨酸，4g/l的d-葡萄糖；所述培养基和所述cd feed 002营养补充剂的体积比为10:1。
5.一种生产csfv-e2蛋白的方法，其特征在于，使用培养基培养具有表达csfv-e2蛋...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋志刚，孙慧，赵丽霞，陈坚，王华，
申请(专利权)人：金宇保灵生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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