【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物分析，特别是涉及一种高效液相色谱法分离和检测乌美溴铵有关物质的方法。
技术介绍
1、乌美溴铵为长效抗胆碱药，由葛兰素史克公司研发，用于治疗成人慢性阻塞性肺疾病(copd)患者。化学名称为1-[2-(苄氧基)乙基]-4-(羟基二苯甲基)-1-氮阳离子双环[2.2.2]溴辛烷，分子式为c29h34brno2，分子量为508.5，乌美溴铵的结构式如式ⅰ所示。
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3、药物中的杂质含量决定着药物的品质，有关物质研究是制剂质量研究的关键问题之一，想要得到高质量的制剂，需要从原料药入手，原料药的质量决定了制剂的质量，因而提高原料药中杂质的检测水平，至关重要。
4、根据乌美溴铵的合成路线及可能的降解途径分析，确定了乌美溴铵原料药中可能含有13种杂质，即杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质h、杂质j、杂质l、杂质m、杂质n、杂质ⅲ-12、杂质i-5和杂质i-11，结构式如下：
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7、目前，现有技术中未发现有一种检测方法对以上13种杂质能同时有效的检测，欧洲药典、英国药典、美国药典、中国药典和日本药典中均未收载乌美溴铵质量的标准。
8、因此，研究一种分离和检测乌美溴铵有关物质的方法，对乌美溴铵的质量控制非常重要。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的不足，本专利技术提供一种高效液相色谱法分离和检测乌美溴铵有关物质的方法。本专利技术方法能够同时对13种杂质进行有效检测，对各杂质的分
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：
3、一种高效液相色谱法分离和检测乌美溴铵有关物质的方法，采用高效液相色谱法，色谱条件包括：
4、色谱柱为agilent infinitylabporoshell hph-c18色谱柱；
5、以磷酸盐缓冲液为流动相a，磷酸盐缓冲液浓度为0.008mol/l～0.012mol/l，ph为2.5～3.1；以乙腈为流动相b；
6、梯度洗脱：在0分钟，流动相a的体积占比为84％-86％，流动相b的体积占比为14％-16％；0到40分钟，流动相a的体积占比线性减少至50％，流动相b的体积占比线性增加至50％；40分钟到60分钟，流动相a的体积占比线性减少至20％，流动相b的体积占比线性增加至80％；60分钟到61分钟，流动相a的体积占比线性增加至84％-86％，流动相b的体积占比线性减少至14％-16％；61分钟到70分钟，流动相a的体积占比为84％-86％，流动相b的体积占比为14％-16％。
7、根据本专利技术优选的，磷酸盐缓冲液配制方式为：将无水磷酸二氢钠溶于水中，用磷酸调节ph值即得。
8、根据本专利技术优选的，色谱条件包括：色谱柱柱温为35℃～45℃，优选40℃；流动相流速为0.9ml/min～1.1ml/min，优选1.0ml/min；检测器为紫外检测器，检测波长为210nm。
9、根据本专利技术优选的，采用乙腈的水溶液作为溶剂配制供试品溶液；乙腈的水溶液中，乙腈和水的体积比为15:85，供试品溶液中乌美溴铵原料药的浓度为0.5mg/ml；供试品溶液用溶剂稀释1000倍，作为对照溶液；精密量取供试品溶液与对照溶液，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图；进样体积为50μl。
10、根据本专利技术优选的，按照对照品外标法或加校正因子的主成分自身对照法计算各已知杂质的含量，按照主成分自身对照法计算未知杂质的含量。本专利技术对比了各杂质按外标法计算的杂质含量和加校正因子的主成分自身对照法计算的杂质含量的测定结果，两种杂质含量计算结果之间无明显差异，表明使用加校正因子的主成分自身对照法可准确定量各已知杂质的含量，在杂质对照品难获得的情况下，可通过加校正因子的主成分自身对照法定量各已知杂质的含量，节约了成本。
11、根据本专利技术优选的，在液相色谱图中，乌美溴铵中的主成分和各杂质出峰顺序为杂质j、杂质a、杂质d、杂质e、杂质h、杂质c、乌美溴铵、杂质ⅲ-12、杂质i-11、杂质n、杂质m、杂质b、杂质l和杂质i-5。
12、根据本专利技术优选的，在液相色谱图中，杂质j、杂质a、杂质d、杂质e、杂质h、杂质c、杂质ⅲ-12、杂质i-11、杂质n、杂质m、杂质b、杂质l和杂质i-5的相对保留时间分别为0.50、0.53、0.67、0.76、0.89、0.98、1.08、1.11、1.38、1.39、1.43、1.46和1.73。可通过相对保留时间对各已知杂质进行定性。
13、根据本专利技术优选的，杂质j、杂质a、杂质d、杂质e、杂质h、杂质c、杂质ⅲ-12、杂质i-11、杂质n、杂质m、杂质b、杂质l和杂质i-5的校正因子分别为1.2、1.0、1.3、1.7、0.9、1.4、0.5、0.6、0.6、0.6、0.9、0.8和0.3。
14、本专利技术通过专属性试验验证了采用本专利技术提供的检测方法，溶剂、主成分、主成分中的未知杂质等均不干扰各已知杂质的检测，此方法专属性较好。
15、本专利技术验证了本专利技术提供的检测方法的定量限和检测限，以及线性范围试验，证实本方法适用性强，灵敏度高；重复性试验证明本方法精密度高；回收率的测定证实本方法准确度高。且能一次性的分离杂质j、杂质a、杂质d、杂质e、杂质h、杂质c、杂质ⅲ-12、杂质i-11、杂质n、杂质m、杂质b、杂质l和杂质i-5，共13种已知杂质，检验工作效率显著提高。
16、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
17、1、本专利技术提供的检测方法有效解决了乌美溴铵与杂质iii-12和杂质i-11因极性相似完全重合，杂质l、杂质m和杂质n为3个位置异构体，难分离的问题，通过不同色谱柱的筛选，包括高碳载量的色谱柱、不同规格的色谱柱和核壳类型的色谱柱等，使用核壳色谱柱，能够有低背压，高柱效，在普通液相上达到超高压液相的效果，以及使用该色谱柱进行了梯度程序和ph的优化，将乌美溴铵与杂质iii-12和杂质i-11达到有效的分离，可准确的对上述2个杂质进行定量分析，更好的控制了乌美溴铵的质量。解决了杂质l、杂质m和杂质n的分离问题，实现了使用c18色谱柱对位置异构体的分离，不使用手性色谱柱可分离3个位置异构体，节约了成本。
18、2、本专利技术通过优化溶剂中乙腈和水的比例，流动相a的ph，解决了由于流动相a的ph与杂质pka不合适，杂质峰峰形差的问题，改善峰形后，可更加准确和灵敏的监控13个杂质的含量，效率显著提高。
19、3、本专利技术提供的检测方法，通过提高梯度洗脱程序中乙腈的比例和洗脱时间，有效解决了杂质i-5因极性太弱，难以洗脱出来，解决了漏检杂质的风险，有效的监控了杂质i-5的含量。
20、4、本专利技术方法专属性和适用性强，检测灵敏度高，线性关系良好，精密度和准确度高，检测方法的耐用性较好，检测效率高，色谱条件存在一定程度波动时，不本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种高效液相色谱法分离和检测乌美溴铵有关物质的方法，其特征在于，采用高效液相色谱法，色谱条件包括：
2.根据权利要求1所述高效液相色谱法分离和检测乌美溴铵有关物质的方法，其特征在于，磷酸盐缓冲液配制方式为：将无水磷酸二氢钠溶于水中，用磷酸调节pH值即得。
3.根据权利要求1所述高效液相色谱法分离和检测乌美溴铵有关物质的方法，其特征在于，色谱条件包括：色谱柱柱温为35℃～45℃，优选40℃；流动相流速为0.9ml/min～1.1ml/min，优选1.0ml/min；检测器为紫外检测器，检测波长为210nm。
4.根据权利要求1所述高效液相色谱法分离和检测乌美溴铵有关物质的方法，其特征在于，采用乙腈的水溶液作为溶剂配制供试品溶液；乙腈的水溶液中，乙腈和水的体积比为15:85，供试品溶液中乌美溴铵原料药的浓度为0.5mg/ml；供试品溶液用溶剂稀释1000倍，作为对照溶液；精密量取供试品溶液与对照溶液，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图；进样体积为50μl。
5.根据权利要求1所述高效液相色谱法分离和检测乌美溴铵有关物质的方法，其特征
6.根据权利要求1所述高效液相色谱法分离和检测乌美溴铵有关物质的方法，其特征在于，在液相色谱图中，乌美溴铵中的主成分和各杂质出峰顺序为杂质J、杂质A、杂质D、杂质E、杂质H、杂质C、乌美溴铵、杂质ⅲ-12、杂质I-11、杂质N、杂质M、杂质B、杂质L和杂质I-5。
7.根据权利要求1所述高效液相色谱法分离和检测乌美溴铵有关物质的方法，其特征在于，在液相色谱图中，杂质J、杂质A、杂质D、杂质E、杂质H、杂质C、杂质ⅲ-12、杂质I-11、杂质N、杂质M、杂质B、杂质L和杂质I-5的相对保留时间分别为0.50、0.53、0.67、0.76、0.89、0.98、1.08、1.11、1.38、1.39、1.43、1.46和1.73。
8.根据权利要求1所述高效液相色谱法分离和检测乌美溴铵有关物质的方法，其特征在于，杂质J、杂质A、杂质D、杂质E、杂质H、杂质C、杂质ⅲ-12、杂质I-11、杂质N、杂质M、杂质B、杂质L和杂质I-5的校正因子分别为1.2、1.0、1.3、1.7、0.9、1.4、0.5、0.6、0.6、0.6、0.9、0.8和0.3。
...【技术特征摘要】
1.一种高效液相色谱法分离和检测乌美溴铵有关物质的方法，其特征在于，采用高效液相色谱法，色谱条件包括：
2.根据权利要求1所述高效液相色谱法分离和检测乌美溴铵有关物质的方法，其特征在于，磷酸盐缓冲液配制方式为：将无水磷酸二氢钠溶于水中，用磷酸调节ph值即得。
3.根据权利要求1所述高效液相色谱法分离和检测乌美溴铵有关物质的方法，其特征在于，色谱条件包括：色谱柱柱温为35℃～45℃，优选40℃；流动相流速为0.9ml/min～1.1ml/min，优选1.0ml/min；检测器为紫外检测器，检测波长为210nm。
4.根据权利要求1所述高效液相色谱法分离和检测乌美溴铵有关物质的方法，其特征在于，采用乙腈的水溶液作为溶剂配制供试品溶液；乙腈的水溶液中，乙腈和水的体积比为15:85，供试品溶液中乌美溴铵原料药的浓度为0.5mg/ml；供试品溶液用溶剂稀释1000倍，作为对照溶液；精密量取供试品溶液与对照溶液，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图；进样体积为50μl。
5.根据权利要求1所述高效液相色谱法分离和检测乌美溴铵有关物质的方法，其特征在于，按照对照品外标法或加校正因子的主成分自身对照法计算...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘飞飞，姜明明，孙孝丽，王苗苗，孙迎基，李铁军，
申请(专利权)人：山东泰合医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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