【技术实现步骤摘要】
本实专利技术涉及生物防治，尤其涉及一种烟粉虱高致病菌株的筛选及其应用。
技术介绍
1、化学农药是防治病虫害的主要措施。目前，世界上生产和使用的农药有几千种，施用面积2.8亿hm，施用量达50～60万吨，约80％的化学农药直接讲入环境，但是随着化学农药长期大量的使用，会使害虫抗药性、农药残留和害虫再猖獗的3r问题越来越严重。因此，需要改变现在的使用化学农药防治植物病虫害的方式，利用生物防治技术，并结合其他防治措施对害虫进行综合治理。
2、虫生真菌是一类能寄生在昆虫体内然后引起昆虫发病死亡的昆虫病原微生物，被侵染的昆虫体表长出明显的菌丝、子实体或各种颜色的分生孢子，虫生真菌有安全、无环境污染且抑制持久等优点，在生物防治中占有一定的地位。世界上已记载的虫生真菌有1000多种，我国已报道的达405多种，其中虫草属80多种，捕食和寄生线虫的真菌10多种，寄生昆虫的真菌215多余种，虫生真菌的种类还在不断的增加。虫生真菌是自然界控制害虫种群消长的重要因子，据调查发现，在自然界中，约60％的昆虫疾病都是由真菌引起，因此，虫生真菌在害虫防治中占有重要的地位，也对于维持生态系统的平衡起着不可或缺的作用，是农业害虫综合治理系统的重要组成部分。
3、从20世纪80年代以来，随着自然因素对害虫种群调节的研究逐渐深入，而真菌对虫体引起的流行病在一定场合能起显著的作用，例如：球孢白僵菌和金龟子绿缰菌等，许多国家竞相开展了昆虫病原真菌的利用研究。我国早在20世纪50年代就开始进行孢球白僵菌防治食心虫、松毛虫和玉米螟等研究，取得了显著效
4、烟粉虱bemisia tabaci属于半翅目粉虱科小粉虱属的一种刺吸式口器的小型昆虫，主要通过口针刺吸植物韧皮部汁液，造成植物营养不良，影响植物正常生长发育。烟粉虱在取食过程中分泌大量蜜露，因滋生霉菌而引发植物霉污病，影响植物正常光合作用和经济作物的外观品质。烟粉虱唾液分泌物也会造成植物生理异常，更为重要的是烟粉虱可以传播植物病毒，如番茄黄化曲叶病毒、番茄褪绿病毒和菜豆金色花叶病毒等双生病毒在内的200多种植物病毒病能够通过烟粉虱进行植物间的相互传播，引起植物病毒病在植物间的爆发，造成作物减产甚至绝产的严重后果。
5、烟粉虱由于寄主广泛、体被蜡质、世代重叠、繁殖速度快、传播扩散途径多、大田中迁移速度快和对化学农药极易产生抗性等特点，导致其防治困难，使得化学杀虫剂很难渗入其体内，往往为了达到防治效果只能加大药量，一方面会使害虫的抗药性不断的增加，另一方面增加成本还污染环境，因此，研究高效的防治烟粉虱的替代技术极为迫切。
6、昆虫病原真菌可以在植物中成功定殖，并在害虫取食植物的过程中对其造成较高的死亡率，现在昆虫病原真菌防治害虫越来越流行，并且生产更为方便，对应用其防治烟粉虱有巨大潜力。目前，已经报道的昆虫病原真菌有座壳抱、蜡蚧轮枝菌、球孢白僵菌和玫烟色拟青霉等，例如座壳抱对烟粉虱幼虫的侵染率很高。蜡蚧轮枝菌对烟粉虱卵的侵染率极低，但对各龄若虫的侵染率却很高，已有报道，蜡蚧轮枝菌防治西红柿上的烟粉虱若虫是非常有效的。另外，球孢白僵菌对烟粉虱若虫尤其低龄若虫也有较高的致病力，利用虫生真菌等生物防治手段控制烟粉虱种群密度，控制烟粉虱对植物的危害，已经引起众多研究工作者的兴趣。因此，利用虫生真菌防治烟粉虱，已经成为主要的防治措施。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种烟粉虱高致病菌株的筛选及其应用，通过实验测定akanthomyces dipterigenus菌株具有更好的烟粉虱致病性能，将其配制成浓度为1×108孢子/ml的孢子悬浮液时对烟粉虱2龄若虫的毒力最大。
2、为解决上述技术问题，本专利技术提供一种烟粉虱高致病菌株的毒力测定方法，包括以下步骤：
3、s1、孢子悬浮液溶液的配制：将供试虫生真菌菌株接种到马铃薯琼脂培养基培养皿中，在温度为25℃的恒温箱中培养7d后，用灭菌后的载玻片将所述培养皿中的孢子刮下，加0.05％吐温-80无菌水来洗脱孢子，然后通过无菌纱布过滤以消除菌丝，用血球计数板在显微镜下计数，最终分别配制成浓度不同的孢子悬浮液；
4、s2、虫生真菌对不同年龄期烟粉虱的毒力测定：
5、选择长势健康基本一致的棉花植株，每株选择3～5片叶子，然后在每片叶子上夹上接虫盒，每片叶子接入约50对烟粉虱成虫，24h后移除烟粉虱成虫，将夹有微型接虫盒的植株放入养虫笼中饲养，待其发育至卵、1龄若虫、2龄若虫、3龄若虫和4龄若虫成虫期进行毒性试验；
6、将取下的叶片画好计数区域，在显微镜下面观察并挑去不适宜虫龄的烟粉虱，然后分别浸入s1中得到的孢子悬浮液中30s，自然晾干后，再将叶背朝上放入含有浓度为2％水琼脂的琼脂培养基中，然后将棉花叶的叶柄插入水琼脂中，之后用保鲜膜进行封口，并用昆虫针在保鲜膜上扎小孔通气，将所述琼脂培养基置于培养箱中饲养，用0.05％吐温-80的无菌水作为对照，每个处理重复5次，每次处理100头烟粉虱，连续观察7d检查烟粉虱的死亡情况并记录死亡数，计算不同龄期烟粉虱的累计校正死亡率；
7、s3、虫生真菌对烟粉虱2龄若虫的毒力测定：
8、根据s2中所述的方法筛选出2龄若虫的烟粉虱，将带有2龄若虫的烟粉虱棉花叶片背面浸于s1中得到的孢子悬浮液中，30s后取出，待叶片自然晾干后，将叶片背面朝上置于琼脂培养基中，用保鲜膜封口并用昆虫针扎孔通气，将所述马铃薯琼脂培养基置于人工培养箱进行饲养，以0.05％吐温-80无菌水为空白对照，每个处理重复5次，每次处理100头烟粉虱，连续7d后，检查烟粉虱的死亡情况并记录死亡数；
9、s4、数据处理。
10、根据本专利技术提供的烟粉虱高致病菌株的筛选方法：s1中所述孢子悬浮液的浓度为1×108、1×107、1×106、1×105和1×104孢子/ml。
11、根据本专利技术提供的烟粉虱高致病菌株的毒力测定方法：s1和s2中所述马铃薯琼脂培养基由以下质量分数的原料组成：200g马铃薯、1000ml水、10g琼脂糖和20g葡萄糖。
12、根据本专利技术提供的烟粉虱高致病菌株的筛选方法：s2中所述饲养条件为：温度环境设置为24～26℃，光周期设置为l16：d8，相对湿度环境设置为75～85％。
13、根据本专利技术提供的烟粉虱高致病菌株的毒力测定方法：s2中所述培养箱的饲养条件为：温度环境设置为24～26℃，光周期设置为l14：d10，相对湿度环境设置为75～85％。
14、根据本专利技术提供的烟粉虱高致病菌株的毒力测定方法：s3中所述饲养条件具体为：温度环境设置为25～27℃，光周期设置为l16：d8本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种烟粉虱高致病菌株的筛选，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的烟粉虱高致病菌株的毒力测定方法，其特征在于，S1中所述孢子悬浮液的浓度为1×108、1×107、1×106、1×105和1×104孢子/mL。
3.根据权利要求1所述的烟粉虱高致病菌株的毒力测定方法，其特征在于，S1和S2中所述马铃薯琼脂培养基由以下质量分数的原料组成：200g马铃薯、1000mL水、10g琼脂糖和20g葡萄糖。
4.根据权利要求1所述的烟粉虱高致病菌株的毒力测定方法，其特征在于，S2中所述饲养条件为：温度环境设置为24～26℃，光周期设置为L16：D8，相对湿度环境设置为75～85％。
5.根据权利要求1所述的烟粉虱高致病菌株的毒力测定方法，其特征在于，S2中所述培养箱的饲养条件为：温度环境设置为24～26℃，光周期设置为L14：D10，相对湿度环境设置为75～85％。
6.根据权利要求1所述的烟粉虱高致病菌株的毒力测定方法，其特征在于，S3中所述饲养条件具体为：温度环境设置为25～27℃，光周期设置为L16：D8，相对
7.根据权利要求1所述的烟粉虱高致病菌株的毒力测定方法，其特征在于，所述烟粉虱高致病菌株的筛选结果为Akanthomyces dipterigenus菌株。
8.根据权利要求1所述的烟粉虱高致病菌株的毒力测定方法，其特征在于，S4所述数据处理包括：采用SPSS26.0、Excel软件，Duncan法进行显著性检验。
9.一种如权利要求1-8所述烟粉虱高致病菌株的应用方法，其特征在于，将所述烟粉虱高致病Akanthomyces dipterigenus菌株配制成浓度为1×108孢子/mL的孢子悬浮液，在烟粉虱2龄若虫时对植株施加所述孢子悬浮液。
...【技术特征摘要】
1.一种烟粉虱高致病菌株的筛选，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的烟粉虱高致病菌株的毒力测定方法，其特征在于，s1中所述孢子悬浮液的浓度为1×108、1×107、1×106、1×105和1×104孢子/ml。
3.根据权利要求1所述的烟粉虱高致病菌株的毒力测定方法，其特征在于，s1和s2中所述马铃薯琼脂培养基由以下质量分数的原料组成：200g马铃薯、1000ml水、10g琼脂糖和20g葡萄糖。
4.根据权利要求1所述的烟粉虱高致病菌株的毒力测定方法，其特征在于，s2中所述饲养条件为：温度环境设置为24～26℃，光周期设置为l16：d8，相对湿度环境设置为75～85％。
5.根据权利要求1所述的烟粉虱高致病菌株的毒力测定方法，其特征在于，s2中所述培养箱的饲养条件为：温度环境设置为24～26℃，光周期设置为l14：d10，相对湿度...
【专利技术属性】
技术研发人员：吕宁，刘慧萍，李岩，刘磊，李春春，
申请(专利权)人：甘肃农业大学，
类型：发明
国别省市：
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