碱基编辑工具及其应用制造技术

本发明专利技术属于核酸编辑领域，特别是规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)技术领域。具体而言，本发明专利技术提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白包括Cas蛋白和脱氨酶，所述融合蛋白中的Cas蛋白为核酸酶活性失活的Cas突变蛋白。本发明专利技术通过对Cas蛋白的改进，使其与脱氨酶融合，能够用于靶核酸的单碱基编辑，具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因编辑领域，特别是规律成簇的间隔短回文重复(crispr)。具体而言，本专利技术涉及一种碱基编辑工具，尤其是基于cas12蛋白的碱基编辑工具。

技术介绍

1、crispr/cas技术是一种被广泛使用的基因编辑技术，它通过rna引导对基因组上的靶序列进行特异性结合并切割dna产生双链断裂，利用生物非同源末端连接或同源重组进行定点基因编辑。

2、单碱基基因编辑工具的开发，能够在不引起dna双链断裂的情况下实现对特定基因位点的精确修饰。单碱基基因编辑技术的基本原理是将胞嘧啶脱氨酶(apobec)或腺苷脱氨酶与cas蛋白融合而形成，依赖于crispr原理使得靶点的单个碱基发生修改的基因编辑技术。

3、单碱基基因编辑系统中碱基编辑器主要由两个部分组成：cas蛋白和dna修饰酶。迄今为止，已经开发出两类碱基编辑器：基于胞嘧啶脱氨酶的胞嘧啶碱基编辑器(cbe)，实现c>t(由c到t)的转化；基于腺苷脱氨酶的腺嘌呤碱基编辑器(abe)，实现a>g(由a到g)的转化。

4、目前，单碱基基因编辑工具中常用的cas本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种核酸酶活性失活的Cas突变蛋白，所述Cas突变蛋白与亲本Cas蛋白的氨基酸序列相比，在对应于SEQ ID No.1所示氨基酸序列的以下氨基酸位点处存在突变：

2.根据权利要求1所述的Cas突变蛋白，其特征在于，所述Cas突变蛋白与亲本Cas蛋白的氨基酸序列相比，还在对应于SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第233位、第267位、第369位和第433位氨基酸位点处存在突变。

3.根据权利要求1所述的Cas突变蛋白，其特征在于，所述亲本Cas蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

4.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括权利要求1...

【技术特征摘要】

1.一种核酸酶活性失活的cas突变蛋白，所述cas突变蛋白与亲本cas蛋白的氨基酸序列相比，在对应于seq id no.1所示氨基酸序列的以下氨基酸位点处存在突变：

2.根据权利要求1所述的cas突变蛋白，其特征在于，所述cas突变蛋白与亲本cas蛋白的氨基酸序列相比，还在对应于seq id no.1所示氨基酸序列的第233位、第267位、第369位和第433位氨基酸位点处存在突变。

3.根据权利要求1所述的cas突变蛋白，其特征在于，所述亲本cas蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示。

4.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括权利要求1-3任一所述的cas突变蛋白和脱氨酶。

5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其特征在于，所述脱氨酶选自腺苷脱氨酶或胞苷脱氨酶中的任意一种。

6.根据权利要求4或5所述的融合蛋白，其特征在于，所述cas突变蛋白和脱氨酶通过接头连接。

7.根据权利要求4或5所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白还包括核定位序列(nls)。

8.根据权利要求5所述的融合蛋白，其特征在于，所述脱氨酶为胞苷脱氨酶，所述融合蛋白还包括尿嘧啶糖基化酶抑制剂(ugi)。

9.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码权利要求1-3任一所述的cas突变蛋白，或者，所述多核苷酸编码权利要求4-8任一所述的融合蛋白。

10.一种载体，其特征在于，所述载体包含权利要求9所述的多核苷酸以及与之可操作连接的调控元件。

11.一种crispr-cas系统，其特征在于，所述系统包括权利要求4-8任一所述的融合蛋白以及至少一种grna；

12.一种组合物，其特征在于，所述组合物包含：

13.一种工程化的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含权利要求1-3任一所述的cas突变蛋白，或权利要求4-8任一所述的融合蛋白，或权利要求9所述的多核苷酸，或权利要求10所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：段志强，
申请(专利权)人：山东舜丰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：