一种单细胞快速测序分析方法技术

技术编号:39982936 阅读:27 留言:0更新日期:2024-01-09 01:40
本发明专利技术涉及一种单细胞快速测序分析方法,属于基因测序技术领域。本发明专利技术先将细胞悬浮液、带有分子条形码的微珠悬浮液及细胞裂解液泵至微流体装置,汇聚形成层流,再与液滴生成油汇聚,形成单分散的微滴,随后裂解微滴,最后进行PCR扩增,并进行测序分析。本发明专利技术于细胞悬浮液中添加了聚乙烯醇,于带有分子条形码的微珠悬浮液中添加了聚山梨酯及聚乙烯吡咯烷酮,当二者被泵至同一滴液滴生成油中时,聚乙烯醇、聚山梨酯及聚乙烯吡咯烷酮协同增加所生成的微滴的稳定性,有效降低了微滴的破损率,同时聚山梨酯及聚乙烯吡咯烷酮还可以提高mRNA富集于Poly(dT)的效率,从而提高样本有效率,避免造成浪费。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因测序,涉及一种单细胞快速测序分析方法


技术介绍

1、细胞是生物结构与功能的基本单位,形态类型千差万别。通过细胞基因组学,可以描述细胞特性及功能,但易用性和规模的限制阻碍了其广泛应用。

2、单细胞(single-cell)高通量液滴测序(drop-seq)技术,是该技术将细胞隔离在微小的液滴中,装上用于扩增的条码引物,由此检测数以千计的细胞。drop-seq能够帮助生物学家进一步发现和分类人体细胞,绘制大脑等复杂组织的细胞多样性图谱,更好地了解干细胞分化,获得更多疾病的遗传学信息。但该技术中的油相不能很好地包裹水相,导致细胞被裂解前液滴已经破损,从而导致poly(dt)不能高效富集mrna,影响后续的测序结果。


技术实现思路

1、本专利技术的目的在于提供一种单细胞快速测序分析方法,具有良好的微滴稳定性及poly(dt)富集mrna效率高的特点。

2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现:

3、一种单细胞快速测序分析方法,包含以下步骤:先将细胞悬浮液、带本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种单细胞快速测序分析方法,其特征在于,包含以下步骤:先将细胞悬浮液、带有分子条形码的微珠悬浮液及细胞裂解液泵至微流体装置,汇聚形成层流,再与液滴生成油汇聚,形成单分散的微滴,随后裂解微滴,最后进行PCR扩增,并进行测序分析。

2.根据权利要求1所述的一种单细胞快速测序分析方法,其特征在于,所述的微流体装置包含:核心为一块玻璃微流控芯片,其联通四个输入管道及一个输出管道。

3.根据权利要求1所述的一种单细胞快速测序分析方法,其特征在于,所述的带有分子条形码的微珠由引物及磁珠组成,其引物的序列包含四个部分:PCR primer、12bp的CellBarcode、...

【技术特征摘要】

1.一种单细胞快速测序分析方法,其特征在于,包含以下步骤:先将细胞悬浮液、带有分子条形码的微珠悬浮液及细胞裂解液泵至微流体装置,汇聚形成层流,再与液滴生成油汇聚,形成单分散的微滴,随后裂解微滴,最后进行pcr扩增,并进行测序分析。

2.根据权利要求1所述的一种单细胞快速测序分析方法,其特征在于,所述的微流体装置包含:核心为一块玻璃微流控芯片,其联通四个输入管道及一个输出管道。

3.根据权利要求1所述的一种单细胞快速测序分析方法,其特征在于,所述的带有分子条形码的微珠由引物及磁珠组成,其引物的序列包含四个部分:pcr primer、12bp的cellbarcode、8bp的umi和30bp的poly(dt)序列。

4.根据权利要求2所述的一种单细胞快速测序分析方法,其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员:张泽龙卢东培杨俊游涛黄家明
申请(专利权)人:广州君瑞康生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:

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