【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、测量细胞信号传导通路响应是现代医学的基石之一。细胞信号传导通路响应可以源于先天的细胞活性。细胞信号传导通路响应可以通过外源性来源刺激，例如使细胞与结合至在细胞表面表达的受体的配体接触。配体与细胞表面受体之间的接触引发酶活性的变化，包括细胞内的信号传导级联，其导致细胞信号传导通路响应的变化。因此，测量或筛选酶活性可以捕捉由配体接触细胞表面受体引发的细胞信号传导通路响应的变化。
技术实现思路
1、本文描述了一种系统和方法，所述系统和方法用于询问和测量细胞信号传导通路响应、筛选细胞信号传导通路的拮抗剂、反向激动剂或激动剂或发现新的细胞信号传导通路的系统和方法。目前的方法利用编码报告分子的核酸近侧的内源性应答元件调控的启动子。由于细胞中内源性应答元件结合启动子的“泄漏”性质，这些方法受到报告分子的高程度背景信号的影响。此外，这些方法受到高程度的以下项的影响：在细胞信号传导通路的可测量活性中的高度的变异系数、假阳性或假阴性。最后，这种方法受报告子激活的绝对值较低的影响，导致可测量的细胞信号传导活性与背景的比率较低。
2、在一个方面，本文所述的系统和方法包括至少一个编码细胞信号传导通路的调控元件和/或效应物的核酸。在一些情况下，调控元件上调或下调效应物的表达。在一些情况下，调控元件上调或下调外源效应物的表达。在一些情况下，调控元件上调或下调内源效应物的表达。通过调节效应物的表达，该系统和方法增加了可测量的细胞信号传导通路响应；增加了可测量的细胞信号传导通路响应与背景
3、在一些方面，本文描述了一种用于测量哺乳动物细胞中的g蛋白偶联受体(gpcr)活性的系统，所述系统包含：gpcr活性的第一效应物，其中与野生型状态下gpcr活性的第一效应物的表达相比，gpcr活性的第一效应物的表达上调；和gpcr活性的第二效应物，其中与野生型状态下gpcr活性的第二效应物的表达相比，gpcr活性的第二效应物的表达下调。在一些实施方案中，gpcr活性包含giα亚基活性、gsα亚基活性、gqα亚基活性或g12/13α亚基活性。在一些实施方案中，gpcr活性包含giα亚基活性。在一些实施方案中，giα亚基活性包含gαi1、gαi2、gαi3、gαo、gαt、gαg或gαz的活性。在一些实施方案中，gpcr活性包含gsα亚基活性。在一些实施方案中，gpcr活性包含gqα亚基活性。在一些实施方案中，gpcr活性包含g12/13α亚基活性。在一些实施方案中，gpcr活性的第一效应物包含第一腺苷酸环化酶。在一些实施方案中，第一腺苷酸环化酶选自adcy1、adcy2、adcy3、adcy4、adcy5、adcy6、adcy7、adcy8、adcy9和adcy10。在一些实施方案中，第一腺苷酸环化酶是adcy6。在一些实施方案中，第一腺苷酸环化酶由与启动子或增强子操作性偶联的核酸编码，与野生型状态相比，所述启动子或增强子过表达第一腺苷酸环化酶。在一些实施方案中，gpcr活性的第二效应物包含第二腺苷酸环化酶。在一些实施方案中，第二腺苷酸环化酶选自adcy1、adcy2、adcy3、adcy4、adcy5、adcy6、adcy7、adcy8、adcy9和adcy10。在一些实施方案中，第二腺苷酸环化酶是adcy3。在一些实施方案中，第二腺苷酸环化酶被微rna、shrna、sirna、crispr/cas9复合物中的一个或多个靶向，与野生型状态相比，所述微rna、shrna、sirna、crispr/cas9复合物降低第二腺苷酸环化酶的表达。在一些实施方案中，该系统包含报告核酸，其中报告核酸从报告基因产生与gpcr活性成比例的可检测信号。在一些实施方案中，报告核酸包含操作性偶联到报告基因的camp应答元件(cre)序列。在一些实施方案中，报告基因包含唯一分子标识符(umi)核酸序列。在一些实施方案中，报告基因包含以下中的一种或多种：唯一分子标识符的表达、荧光信号、发光信号。在一些实施方案中，哺乳动物细胞选自hek 293细胞、cho-k1细胞、cos-7细胞和u2os细胞。在一些实施方案中，该系统被整合到哺乳动物细胞的基因组中。
4、在一些方面，本文描述了一种用于测量细胞中的gpcr活性的方法，该方法包括使本文描述的系统与gpcr配体接触，其中配体与gpcr复合并引发或抑制gpcr活性。在一些实施方案中，gpcr配体选自多肽和小分子。
5、在一个方面，本文描述了一种用于测量g蛋白偶联受体(gpcr)活性的系统，所述系统包括：(a)gpcr活性的第一效应物，其中与野生型状态下第一效应物的表达相比，第一效应物的表现上调；和(b)gpcr活性的第二效应物，其中与野生型状态下第二效应物的表达相比，第二效应物的表达下调。在某些实施方案中，通过使gpcr与gpcr激活剂接触来上调第一效应物的表达。在某些实施方案中，gpcr激活剂是gpcr激动剂。在某些实施方案中，gpcr激活剂是第一效应物的激动剂。在某些实施方案中，该系统包含编码gpcr活性的第一效应物的第一核酸，所述第一核酸操作性偶联至用于上调第一效应物表达的调控元件。在某些实施方案中，通过使gpcr与gpcr抑制剂接触来下调第二效应物的表达。在某些实施方案中，gpcr抑制剂是gpcr反向激动剂。在某些实施方案中，gpcr抑制剂是gpcr拮抗剂。在某些实施方案中，gpcr抑制剂是第二效应物的反向激动剂。在某些实施方案中，gpcr抑制剂是第二效应物的拮抗剂。在某些实施方案中，该系统包含下调第二效应物表达的第二核酸。在某些实施方案中，gpcr活性包括giα亚基活性、gsα亚基活性、gqα亚基活性或g12/13α亚基活性。在某些实施方案中，gpcr活性包含giα亚基活性。在某些实施方案中，giα亚基活性包含gαi1、gαi2、gαi3、gαo、gαt、gαg或gαz的活性。在某些实施方案中，gpcr活性包含gsα亚基活性。在某些实施方案中，gpcr活性包含gqα亚基活性。在某些实施方案中，gpcr活性包含g12/13α亚基活性。在某些实施方案中，调控元件是可诱导的。在某些实施方案中，调控元件是组成活性的。在某些实施方案中，第一效应物包含第一腺苷酸环化酶。在某些实施方案中，第一腺苷酸环化酶选自adcy1、adcy2、adcy3、adcy4、adcy5、adcy6、adcy7、adcy8、adcy9和adcy10。在某些实施方案中，第一腺苷酸环化酶是adcy6。在某些实施方案中，第二效应物包含第二腺苷酸环化酶。在某些实施方案中，第二腺苷酸环化酶选自adcy1、adcy2、adcy3、adcy4、adcy5、adcy6、adcy7、adcy8、adcy9和adcy10。在某些实施方案中，第二腺苷酸环化酶是adcy3。在某些实施方案中，第二核酸包含微rna、shrna、sirna、grna或其组合。在某些实施方案中，第二核酸包含微rna。在某些实施方案中，第二核酸包含grna。在某些实施方案中，该系统还包含操本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于测量哺乳动物细胞中的G蛋白偶联受体(GPCR)活性的系统，所述系统包含：
2.根据权利要求1所述的系统，其中所述GPCR活性包含Giα亚基活性、Gsα亚基活性、Gqα亚基活性或G12/13α亚基活性。
3.根据权利要求2所述的系统，其中所述GPCR活性包含所述Giα亚基活性。
4.根据权利要求3所述的系统，其中所述Giα亚基活性包含Gαi1、Gαi2、Gαi3、Gαo、Gαt、Gαg或Gαz的活性。
5.根据权利要求4所述的系统，其中所述GPCR活性包含所述Gsα亚基活性。
6.根据权利要求4所述的系统，其中所述GPCR活性包含所述Gqα亚基活性。
7.根据权利要求4所述的系统，其中所述GPCR活性包含所述G12/13α亚基活性。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的系统，其中GPCR活性的所述第一效应物包含第一腺苷酸环化酶。
9.根据权利要求8所述的系统，其中所述第一腺苷酸环化酶选自ADCY1、ADCY2、ADCY3、ADCY4、ADCY5、ADCY6、ADCY7、ADC
10.根据权利要求8或9所述的系统，其中所述第一腺苷酸环化酶是ADCY6。
11.根据权利要求8至10中任一项所述的系统，其中所述第一腺苷酸环化酶由与启动子或增强子操作性偶联的核酸编码，与野生型状态相比，所述启动子或增强子过表达所述第一腺苷酸环化酶。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的系统，其中GPCR活性的所述第二效应物包含第二腺苷酸环化酶。
13.根据权利要求12所述的系统，其中所述第二腺苷酸环化酶选自ADCY1、ADCY2、ADCY3、ADCY4、ADCY5、ADCY6、ADCY7、ADCY8、ADCY9和ADCY10。
14.根据权利要求12或13所述的系统，其中所述第二腺苷酸环化酶是ADCY3。
15.根据权利要求12至14中任一项所述的系统，其中所述第二腺苷酸环化酶被微RNA、shRNA、siRNA、CRISPR/Cas9复合物中的一个或多个靶向，与野生型状态相比，所述微RNA、shRNA、siRNA、CRISPR/Cas9复合物降低所述第二腺苷酸环化酶的表达。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的系统，其中所述系统包含报告核酸，其中所述报告核酸从报告基因产生与所述GPCR活性成比例的可检测信号。
17.根据权利要求16所述的系统，其中所述报告核酸包含与所述报告基因操作性偶联的cAMP应答元件(CRE)序列。
18.根据权利要求1或17中任一项所述的系统，其中所述报告基因包含唯一分子标识符(UMI)核酸序列。
19.根据权利要求16至18中任一项所述的系统，其中所述报告基因包含以下中的一种或多种：唯一分子标识符的表达、荧光信号或发光信号。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的系统，其中所述哺乳动物细胞选自HEK 293细胞、CHO-K1细胞、COS-7细胞和U2OS细胞。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的系统，其中所述系统被整合到所述哺乳动物细胞的基因组中。
22.一种用于测量哺乳动物细胞中的GPCR活性的方法，所述方法包括使权利要求1至21中任一项所述的系统与GPCR配体接触，其中所述配体与所述GPCR复合并引发或抑制所述GPCR活性。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述GPCR配体选自多肽和小分子。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于测量哺乳动物细胞中的g蛋白偶联受体(gpcr)活性的系统，所述系统包含：
2.根据权利要求1所述的系统，其中所述gpcr活性包含giα亚基活性、gsα亚基活性、gqα亚基活性或g12/13α亚基活性。
3.根据权利要求2所述的系统，其中所述gpcr活性包含所述giα亚基活性。
4.根据权利要求3所述的系统，其中所述giα亚基活性包含gαi1、gαi2、gαi3、gαo、gαt、gαg或gαz的活性。
5.根据权利要求4所述的系统，其中所述gpcr活性包含所述gsα亚基活性。
6.根据权利要求4所述的系统，其中所述gpcr活性包含所述gqα亚基活性。
7.根据权利要求4所述的系统，其中所述gpcr活性包含所述g12/13α亚基活性。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的系统，其中gpcr活性的所述第一效应物包含第一腺苷酸环化酶。
9.根据权利要求8所述的系统，其中所述第一腺苷酸环化酶选自adcy1、adcy2、adcy3、adcy4、adcy5、adcy6、adcy7、adcy8、adcy9和adcy10。
10.根据权利要求8或9所述的系统，其中所述第一腺苷酸环化酶是adcy6。
11.根据权利要求8至10中任一项所述的系统，其中所述第一腺苷酸环化酶由与启动子或增强子操作性偶联的核酸编码，与野生型状态相比，所述启动子或增强子过表达所述第一腺苷酸环化酶。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的系统，其中gpcr活性的所述第二效应物包含第二腺苷酸环化酶。
13.根据权利要求12所述的系统，其中所述第二腺苷酸环化酶选自adcy1、adcy2、adcy3、adcy...
【专利技术属性】
技术研发人员：亨利·陈，艾伦·库珀，莫利·珍妮特·加斯佩里尼，
申请(专利权)人：奥科坦特公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。