一种鸡OPA1抗原决定簇及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种鸡OPA1抗原决定簇及其应用。本发明专利技术对鸡OPA1蛋白进行分析，筛选出鸡OPA1蛋白的抗原决定簇；通过扩增得到OPA1‑E编码基因，将其插入pET‑28a(+)载体，构建pET‑28a‑Opa1‑E原核表达质粒；将构建的pET‑28a‑Opa1‑E原核表达质粒转化入感受态细胞，使用IPTG诱导表达OPA1‑E蛋白；将纯化后的OPA1‑E蛋白制备为抗原并免疫小鼠，获得抗鸡OPA1多克隆抗体。所制备多克隆抗体可用于鸡OPA1蛋白的定量与定位分析。本发明专利技术所制备的抗鸡OPA1多克隆抗体与鸡OPA1蛋白的反应性良好，为进一步研究禽类线粒体动力学提供重要工具和技术手段，具有较高的实际应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于动物分子生物学，具体涉及一种鸡opa1抗原决定簇及其应用。

技术介绍

1、线粒体是能量代谢不可或缺的双膜细胞器，生理状态下处于融合与分裂的动态平衡状态，线粒体融合主要由mfn1(mitofusin 1)、mfn2和opa1(optic atrophy)蛋白协同完成，其外膜融合主要由mfn1和mfn2共同介导，其内膜融合主要由opa1介导。据文献报道，线粒体分裂的抑制和线粒体融合的上调可降低细胞死亡，表明线粒体分裂融合在细胞凋亡中的作用，因此，opa1对细胞凋亡的潜在影响可能是其促融合活性。由于线粒体缺陷与衰老过程中活性氧的产生增加有关，因此在心脏衰老疾病中调节opa1的功能可能是一个潜在的治疗靶点。opa1表达的减少导致线粒体碎裂，导致骨骼肌萎缩，并与代谢性疾病(如2型糖尿病)的发作有关。rnai实验表明，opa1的缺失会诱导细胞凋亡或使细胞对外源性促凋亡刺激的敏感性增加。综述所述，opa1等线粒体融合蛋白是研究线粒体动力学的重要靶标，但目前市场上没有商品化的抗鸡opa1抗体出售，且人或小鼠来源的opa1抗体与鸡opa1蛋白的交叉反应性较低。本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种鸡OPA1抗原决定簇，其特征在于，包含或由鸡OPA1蛋白第591～844位氨基酸构成的序列如SEQ NO.1所示。

2.一种可表达鸡OPA1蛋白抗原决定簇的重组质粒，其特征在于，设计特异性引物如SEQNO.2：5'-CTCCGTCGACAAGCTCTTGAGACAGAATGGAAGAAC-3'、SEQ NO.3：5'-GGTGGTGGTGCTCGATGTTATTCCTCTCGCTTCAA-3'所示，以鸡的肠组织cDNA为模板，扩增出编码权利要求2所述鸡OPA1抗原决定簇的DNA片段。

3.权利要求1所述鸡OPA1抗原决定簇在鸡OPA1蛋白的定量与定位分析中...

【技术特征摘要】

1.一种鸡opa1抗原决定簇，其特征在于，包含或由鸡opa1蛋白第591～844位氨基酸构成的序列如seq no.1所示。

2.一种可表达鸡opa1蛋白抗原决定簇的重组质粒，其特征在于，设计特异性引物如seqno.2：5'-ctccgtcgacaagctcttgagacagaatggaagaac-3'、seq no.3：5'-ggtggtggtgctcgatgttatt...

【专利技术属性】
技术研发人员：李剑，罗丹妮，余凌子，华裕平，张灵芝，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：