【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种用于基因甲基化检测样本预处理的试剂盒，具体涉及甲基化检测前样本处理的亚硫酸盐转化试剂盒，属于生物医药。
技术介绍
1、dna甲基化是dna表观遗传的一种修饰手段，起到对基因表达调节作用。基因启动子前后的dna序列含有基因表达的正向与负向调节单元，一般来说，功能单元序列的甲基化对原始的功能单元的功能起抑制作用。而对肿瘤发展起重要作用的基因包括癌基因(促进肿瘤细胞生长)，抑癌基因(抑制肿瘤细胞生长)，生长促进基因，免疫调节基因等。基因甲基化检测已经越来越多地被用于肿瘤的早期诊断，一般说来，其特异性与灵敏度明显高于蛋白标志物，可以更早期检测到肿瘤的存在。
2、目前检验甲基化检测的常用手段是：样本dna先进行亚硫酸盐处理，这样未甲基化的c就转化为u，pcr扩增时u同t与a配对，而甲基化的c不被转化，在pcr扩增时依然是c，与g配对。根据这种差别，设计转化后序列特异性的引物，通过对转化后的dna进行甲基化特异性的扩增，可以得出样本dna某个位点的甲基化程度。目前标准的亚硫酸盐处理耗时比较长，需要3～4小时才能完成，这样，加上核酸提取，pcr扩增，整个甲基化检测一般需要1天半的检测周期，而临床及实验室期望这样一个以pcr为基础的甲基化检测能够在半天内完成。
3、中国专利cn201910026675.6公开了一种用于游离dna亚硫酸氢盐转化的试剂盒，其对标准的亚硫酸盐转化进行了改良，其直接转化时间为60分钟，但其组分过于复杂，后续的磁珠结合提取又耗费了比较长的时间，使得其试剂盒的转化及提取全过程耗时2
技术实现思路
1、针对上述现有技术存在的问题，本专利技术提供一种用于基因甲基化检测样本预处理的试剂盒，能够显著缩短直接转化时间及提取时间，同时保证转化效率。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种用于基因甲基化检测样本预处理的试剂盒，该试剂盒由亚硫酸盐转化试剂、结合液、去硫液、清洗液，洗脱液，以及结合磁珠组成；
3、亚硫酸盐转化试剂由亚硫酸氢铵，亚硫酸氢钠，对苯二酚、四氢糠醇及水配制而成；
4、结合液由盐酸胍、氯化钠以及水配制而成；
5、去硫液由氢氧化钠、乙醇以及水配制而成；
6、清洗液由tris-hcl缓冲液、edta、乙醇以及水配制而成；
7、洗脱液由tris-hcl缓冲液、edta以及水配制而成；
8、结合磁珠为二氧化硅/四氧化三铁磁珠，表面带有羟基修饰。
9、优选地，所述亚硫酸盐转化试剂中：亚硫酸氢铵的浓度为1～6.5m，亚硫酸氢钠的浓度为1～4m，对苯二酚的浓度为0.5～5mm，四氢糠醇的浓度为3～30％(v/v)。
10、优选地，所述结合液中：盐酸胍的浓度为1～6m、氯化钠的浓度为0.1～1m。
11、优选地，所述去硫液中：氢氧化钠的浓度为0.1～0.5n，乙醇的浓度为70～95％(v/v)。
12、优选地，所述清洗液中：tris-hcl缓冲液浓度为10～100mm且ph7.0～9.0，edta的浓度为0.5～5mm，乙醇浓度为70～90％(v/v)。
13、优选地，所述洗脱液中：tris-hcl缓冲液浓度为10～100mm、edta浓度为0.5～2mm。
14、优选地，所述结合磁珠的粒径为150nm～1.5μm。
15、优选地，一种用于基因甲基化检测样本预处理的试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
16、(1)取转化样本先在变性试剂中热变性，快速降温；
17、(2)加入亚硫酸盐转化试剂进行转化处理；
18、(3)转化处理后，加入结合磁珠、结合液，混合反应；反应磁珠加入清洗液清洗；
19、(4)加入去硫液，混合反应；反应磁珠加入清洗液清洗；
20、(5)加入洗脱液进行洗脱。
21、优选地，所述转化样本为人的基因组dna、动物的基因组dna、植物的基因组dna或者上述物种体液中的游离dna的一种。
22、优选地，结合液，去硫液，清洗液，脱洗液，或结合磁珠中的一种或几种被具有类似功能的组分替代。
23、本专利技术的用于基因甲基化检测样本预处理的试剂盒，特异性转化dna中的未甲基化的c碱基，而对甲基化的c碱基不发生转化，从而使得下游特异性检测甲基化位点的甲基化水平成为可能。
24、与现有技术相比，本专利技术的有益效果：本专利技术的用于基因甲基化检测样预本处理的试剂盒中的试剂组成简洁，配制简单，使用方便易操作；本专利技术的用于基因甲基化检测样本预处理的试剂盒使得直接转化时间缩短至10～20分钟，转化及提取纯化整个过程能够在1小时内完成，大大缩短了转化时间，同时保证转化效率。
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1.一种用于基因甲基化检测样本预处理的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由亚硫酸盐转化试剂、结合液、去硫液、清洗液、洗脱液、以及结合磁珠组成；
2.根据权利要求1所述的一种用于基因甲基化检测样本预处理的试剂盒，其特征在于，所述亚硫酸盐转化试剂中：亚硫酸氢铵的浓度为1～6.5M，亚硫酸氢钠的浓度为1～4M，对苯二酚的浓度为0.5～5mM，四氢糠醇的浓度为3～30％(v/v)。
3.根据权利要求1所述的一种用于基因甲基化检测样本预处理的试剂盒，其特征在于，所述结合液中：盐酸胍的浓度为1～6M、氯化钠的浓度为0.1～1M；
4.根据权利要求1～3任一项所述的一种用于基因甲基化检测样本预处理的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于样本甲基化检测前的样本预处理。
5.根据权利要求1～3任一项所述的一种用于基因甲基化检测样本预处理的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
6.根据权利要求1～5任一项所述的一种用于基因甲基化检测样本预处理的试剂盒，其特征在于，所述转化样本为人的基因组DNA、动物的基因组DNA、植物的基因组D
...【技术特征摘要】
1.一种用于基因甲基化检测样本预处理的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由亚硫酸盐转化试剂、结合液、去硫液、清洗液、洗脱液、以及结合磁珠组成；
2.根据权利要求1所述的一种用于基因甲基化检测样本预处理的试剂盒，其特征在于，所述亚硫酸盐转化试剂中：亚硫酸氢铵的浓度为1～6.5m，亚硫酸氢钠的浓度为1～4m，对苯二酚的浓度为0.5～5mm，四氢糠醇的浓度为3～30％(v/v)。
3.根据权利要求1所述的一种用于基因甲基化检测样本预处理的试剂盒，其特征在于，所述结合液中：盐酸胍的浓度为1～6m、氯化...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱桂春，余会会，陈颖，王柳燕，
申请(专利权)人：江苏华越精准诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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