一种小鼠视网膜类器官及其终末分化的细胞系制造技术

本发明专利技术属于医学视网膜类器官技术领域，具体公开了一种小鼠视网膜类器官及其终末分化的细胞系

【技术实现步骤摘要】
一种小鼠视网膜类器官及其终末分化的细胞系、其构建方法和应用


[0001]本专利技术属于医学视网膜类器官
，尤其涉及一种小鼠视网膜类器官及其终末分化的细胞系
、
其构建方法和应用
。

技术介绍

[0002]类器官突破了细胞间单纯的物理接触联系，形成更加紧密的细胞间
、
细胞与基质间高度相互作用，从而发育成具有功能的“微器官”，能更好地用于模拟器官组织的发生过程及生理病理状态
。2022
年9月，美国参议院通过美国食品药品监督管理局现代化法案
(FDA Modernization Act 2.0)
，不再要求药物进行动物试验，类器官在基础研究以及临床诊疗方面迎来了更广阔的应用前景
。
[0003]视网膜类器官模型的建立为视网膜疾病机制的研究和干细胞替代疗法提供了强有力的工具
。
目前，人视网膜类器官研究不断取得突破
。
人诱导多能干细胞可在一定条件下分化成为具有人类视网膜特征的视网膜类器官，不仅包含多种视网膜细胞，而且能形成本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种小鼠视网膜类器官及其终末分化的细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤
1、
扩增小鼠胚胎干细胞：将
mESC
依次在
MEF
饲养层培养体系
、
无
MEF
饲养层培养体系条件下短期连续传代，制备
mESC
单细胞悬液；步骤
2、
诱导小鼠胚胎干细胞团簇向视网膜原基分化：将
mESC
单细胞悬液以
5000
个
/
孔的密度接种到
U
型底细胞培养板进行三维体外培养，胚胎干细胞不断扩增
、
细胞团簇进一步堆叠向视网膜原基分化，直至出现视泡结构；步骤
3、
诱导视泡结构发育并出现视杯结构：将培养基更换为视泡培养基，促使视泡结构进一步发育，直至出现视杯结构；步骤
4a
‑
1、
进一步诱导视杯结构发育：将培养基更换为视杯培养基，促使视杯结构进一步发育；步骤
4a
‑
2、
获得成熟的小鼠视网膜类器官及其终末分化的细胞系：将培养基更换为视网膜类器官培养基，获得成熟的视网膜类器官及其终末分化的细胞系；步骤
4b、
视网膜祖细胞建库与储存：将步骤3获得的视泡结构进行组织消化，获得视网膜祖细胞悬液，添加视网膜祖细胞培养基传代培养3次，获得视网膜祖细胞系并使用视网膜祖细胞冻存液储存
。2.
根据权利要求1所述的小鼠视网膜类器官及其终末分化的细胞系的构建方法，其特征在于，所述
MEF
饲养层培养体系的构建方法为：将
MEF
细胞接种到细胞培养板，更换
MEF
培养基，用磷酸缓冲盐溶液冲洗，加入含
10
‑
20
μ
g/ml
丝裂霉素
‑
C
的
MEF
培养基作用2小时后，利用磷酸缓冲盐溶液冲洗丝裂霉素
‑
C
，加入胚胎干细胞培养基，构建成
MEF
饲养层培养体系
。3.
根据权利要求1所述的小鼠视网膜类器官及其终末分化的细胞系的构建方法，其特征在于，所述无
MEF
饲养层培养体系的构建方法为：细胞培养板在细胞接种前，预先用
0.2
％的明胶
(Gelat...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚明喜，
申请(专利权)人：广州湾区生物基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：