瘦素在冷冻保存山羊精液中的应用制造技术

本发明专利技术属于山羊养殖技术领域，具体涉及瘦素在冷冻保存山羊精液中的应用

【技术实现步骤摘要】
瘦素在冷冻保存山羊精液中的应用、山羊精液冷冻稀释液及应用和山羊精液的冷冻保存方法


[0001]本专利技术属于山羊养殖
，具体涉及瘦素在冷冻保存山羊精液中的应用
、
山羊精液冷冻稀释液及应用和山羊精液的冷冻保存方法
。

技术介绍

[0002]人工授精技术是一项繁殖新技术，很多规模羊场都在使用，它能防止近亲交配，可避免传染病发生，还能有效提高母羊的受孕率，相对于本交
(
自由交配
)
有非常明显的繁殖优势
。
[0003]长期以来国内外许多学者在羊精液保存方面做了大量研究工作，主要集中在羊精液冷冻稀释液方面，研究发现精子在降温和冷冻保存的过程中，很容易产生各种损伤，包括物理性的
、
化学性的和生物性的损伤，比如渗透压的改变
、
致命冰晶的形成
、
氧化应激损伤
、
顶体损伤等
。
在冷冻
‑
解冻过程中会生成
ROS
，过多
ROS
使精子活性降低
、
染色质的稳定性变差
、
精子
DNA
完整性降低，影响精子获能
、
顶体反应以及透明带反应
。
鲜精在冷冻
‑
解冻后出现的线粒体功能受损
、
过早的顶体反应
、
超微结构的变化和
DNA
的损伤等问题，导致冻精的受精率与妊娠率明显低于鲜精
。
目前现有技术中多使用抗氧化剂和抗冻剂作为主要成分制备精液冷冻保护剂，但是并不能有效提高冻精的精子活力，导致母羊的受孕率仍比较低，这对生产实践来说是极其不利的
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于弥补现有技术的不足，提供瘦素在冷冻保存山羊精液中的应用
、
山羊精液冷冻稀释液及应用和山羊精液的冷冻保存方法，提高山羊精液冷冻解冻后活力
、
质膜完整性
、
顶体完整性以及线粒体膜电位，降低冷冻保存过程中活性氧
(ROS)
，减少氧化应激损伤等作用，提高囊胚发育率
。
[0005]本专利技术提供了瘦素在冷冻保存山羊精液中的应用，所述瘦素的质量和山羊精子的个数比为
(5
～
20)ng
：4×
108个
。
[0006]本专利技术提供了一种山羊精液冷冻稀释液，包括
A
液
、B
液和瘦素；
[0007]所述
A
液包括
Tris、
柠檬酸
、
葡萄糖
、
青霉素
‑
链霉素双抗和卵黄；
[0008]所述
B
液包括所述
A
液和甘油
。
[0009]优选的，所述
A
液包括以下浓度的组分：
Tris 38g/L、
柠檬酸
22g/L、
青霉素
‑
链霉素双抗
5IU/L、
葡萄糖
6g/L、
卵黄
20wt.
％；所述
B
液中
A
液与甘油的体积比为9：
1。
[0010]优选的，所述
A
液的
pH
为
6.5。
[0011]本专利技术还提供了上述技术方案所述的山羊精液冷冻稀释液在冷冻保存山羊精液中的应用
。
[0012]本专利技术还提供了一种山羊精液的冷冻保存方法，包括如下步骤：
[0013]将上述技术方案所述的山羊精液冷冻稀释液中的
A
液
、
瘦素和山羊精液混合，得到
稀释精液；
[0014]将所述稀释精液置于
4℃
环境下冷却
3h
后和上述技术方案所述的山羊精液冷冻稀释液中的
B
液混合，得到冷冻保护液后平衡
15
～
30min
，液氮熏蒸
15min
，放入液氮保存；
[0015]所述冷冻保护液中瘦素的浓度为5～
20ng/mL。
[0016]优选的，所述山羊精液中的精子浓度为4×
108个
/mL。
[0017]优选的，所述山羊精液的溶剂包括上述技术方案所述的山羊精液冷冻稀释液中的
A
液
。
[0018]优选的，所述将上述技术方案所述的山羊精液冷冻稀释液中的
A
液
、
瘦素和山羊精液混合前，还包括：将所述
A
液置于
20
～
30℃
的环境下平衡
30min。
[0019]有益效果：
[0020]本专利技术将瘦素
(LEP)
用于山羊精液的冷冻保存，严格限定瘦素的质量和山羊精子的个数比，能够提高山羊精液冷冻解冻后活力
、
质膜完整性
、
顶体完整性以及线粒体膜电位，降低冷冻保存过程中活性氧
(ROS)
，减少氧化应激损伤等作用
。
另外，添加瘦素的冻精进行体外受精，能够显著提高囊胚发育率
。
具体实施方式
[0021]本专利技术提供了瘦素在冷冻保存山羊精液中的应用，所述瘦素的质量和山羊精子的个数比为
(5
～
20)ng
：4×
108个
。
[0022]在本专利技术中，所述瘦素的质量和山羊精子的个数比优选为
(10
～
15)ng
：4×
108个
。
[0023]本专利技术利用瘦素对山羊精液进行冷冻保存，瘦素和山羊精液中精子的质量个数比高于
15ng
：4×
108个，精子数太少，解冻后受精概率低；瘦素和山羊精液中精子的质量个数比过低于
10ng
：4×
108个，精子密度太大，会导致冷冻解冻后的精子质量降低
。
本专利技术提供的瘦素的质量和山羊精液中精子的个数比，能够提高山羊精液冷冻解冻后活力
、
质膜完整性
、
顶体完整性以及线粒体膜电位，降低冷冻保存过程中活性氧
(ROS)
，减少氧化应激损伤等作用，显著提高囊胚发育率
。
[0024]本专利技术还提供了一种山羊精液冷冻稀释液，包括
A
液
、B
液和瘦素；
[0025]所述
A
液包括
Tris、
柠檬酸
、
葡萄糖
、
青霉素
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
瘦素在冷冻保存山羊精液中的应用，其特征在于，所述瘦素的质量和山羊精子的个数比为
(5
～
20)ng
：4×
108个
。2.
一种山羊精液冷冻稀释液，其特征在于，包括
A
液
、B
液和瘦素；所述
A
液包括
Tris、
柠檬酸
、
葡萄糖
、
青霉素
‑
链霉素双抗和卵黄；所述
B
液包括所述
A
液和甘油
。3.
根据权利要求2所述的山羊精液冷冻稀释液，其特征在于，所述
A
液包括以下浓度的组分：
Tris 38g/L、
柠檬酸
22g/L、
青霉素
‑
链霉素双抗
5IU/L、
葡萄糖
6g/L、
卵黄
20wt.
％；所述
B
液中
A
液与甘油的体积比为9：
1。4.
根据权利要求2所述的山羊精液冷冻稀释液，其特征在于，所述
A
液的
pH
为
6.5。5.
权利要求2～4任一项所述的山...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵高平，王子馨，丁瑞，常青，郭鹏飞，李喜和，曹贵方，
申请(专利权)人：内蒙古赛科星繁育生物技术集团股份有限公司内蒙古农业大学内蒙古国家乳业技术创新中心有限责任公司，
类型：发明
国别省市：