一种青光眼非人灵长类动物模型的构建方法技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体公开一种青光眼非人灵长类动物模型的构建方法，包括以下步骤：对非人灵长类动物的前房注射乳化硅油；7‑8周后检测，即构建得到青光眼非人灵长类动物模型，本发明专利技术的动物模型与传统模型相比，不需要反复使用昂贵的造模仪器，也不需要对动物进行多次造模造成动物的反复损伤，使用的试剂成本低廉易得，造模时间短，可以极大的节约人力

【技术实现步骤摘要】
一种青光眼非人灵长类动物模型的构建方法


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及一种实验动物疾病模型的构建方法，特别是涉及一种青光眼非人灵长类动物模型的构建方法
。

技术介绍

[0002]青光眼
(Glaucoma)
是一组以视乳头萎缩及凹陷
、
视野缺损及视力下降为共同特征的疾病，病理性眼压增高
、
视神经供血不足是其发病的原发危险因素，视神经对压力损害的耐受性也与青光眼的发生和发展有关
。
在房水循环途径中任何一环发生阻碍，均可导致眼压升高而引起的病理改变，但也有部分患者呈现正常眼压青光眼
。
是导致人类失明的三大致盲眼病之一
。
青光眼的发病机制至今尚未完全阐明，而对青光眼患者研究具有很大的局限性，因此通过动物模型研究其机制和防治是一种有效的研究手段
。
[0003]目前，最经典的非人灵长类青光眼模型是激光激射小梁网诱导的青光眼模型
。
该模型具有非侵入性
、
炎症反应轻等特点，但缺点是需要反复多次造模达到持续性高眼压，实验周期长，而且实验仪器的成本也较高
。
[0004]现有记载中，专利文献
CN102229959A
中记载了一种原发性开角型青光眼致病基因动物模型及其构建方法，将人
OPTN(E50K)
突变基因克隆到带有视网膜启动子
c
‑
kit
的表达载体中，构建得到重组哺乳动物表达载体，然后将重组哺乳动物表达载体导入到小鼠体内，筛选鉴定获得转基因小鼠
。
专利文献
CN105943186A
中记载了一种慢性高眼压动物模型的建立方法，通过手术放置材料堵塞其房水流出通道，造成眼压升高视神经损害的青光眼动物模型，使升高的眼压维持稳定，更加易于获得和操作，得到的模型眼压升高稳定
、
波动小，高眼压持续时间长，目标眼压可控等优点
。
但这些方法有其明显的缺陷，首先转基因小鼠模型所涉及的基因技术复杂，技术壁垒高，成本高昂，操作难度大，成功率低
。
除灵长类动物外，大多数动物的房角结构都明显不同于人的房角结构，从种系发育角度啮齿目
(
鼠
)
相差更大
。
小鼠的眼球过小难于进行常规的眼科检查，眼压变化及病理进展缺乏数据支撑，目前这种模型尚在研究摸索中，且不成熟，以至难于应用眼科用药的评价
。
其次通过手术放置特殊材料堵塞小梁网的青光眼模型所涉及的手术需要专业眼科显微镜辅助，专业性高，技术难度大，成功率低，手术风险大容易造成感染出血，专利中涉及的手术细节
(
纤维导管插入
schlemm
管并做
360
度或
270
度绕行
)
更是难于实现，而且极容易造成脉络膜损伤，插入的聚丙烯材料容易造成过敏反应导致前房浑浊和炎性渗出，进而影响眼科检查，同时因动物眼睛小，手术难度更大，模型成功率难以确定，此专利也缺乏相关眼压数据和临床眼科检查数据支撑，难以应用于药物评价
。
[0005]非人灵长类动物的眼睛与人眼的结构最为相似，同时由于大动物的眼球体积优势，可以直接应用人的眼科学检测手段
。
因此用非人灵长类动物做模型相比其它实验动物
(
啮齿动物
)
能更好的模拟临床青光眼病程的发生
、
发展，和其他动物相比，研究结果也最易推广到人，对人类疾病的临床诊断和治疗有直接指导意义
。
[0006]前房注射外来物诱导青光眼在啮齿类和灵长类动物中有广泛应用，外来物质有很
多比如，糜蛋白酶
、
甲基纤维素
、
复方卡波姆
、
乳胶微球
、
磁珠
、
透明质酸钠
、
血影细胞等；上述外来物诱导的青光眼主要缺陷为：外来物附着角膜
、
漂浮前房或覆盖瞳孔；会引起前房炎症反应，有炎性渗出物，导致前房浑浊；最终导致影像学检查受阻，无法清晰检查眼底变化；可导致眼前节病变：虹膜周边与后部小梁网发生前粘连
、
角膜周围新生血管
、
虹膜萎缩
、
虹膜晶状体粘连
、
色素沉积于角膜内皮和晶状体表面等；其他方法诱导的青光眼，需要多次注射且眼压不稳定或者持续时间短暂，同时多次注射会引起角膜损伤和感染风险
。

技术实现思路

[0007]本专利技术的主要目的是提供一种青光眼非人灵长类动物模型的构建方法，以解决
技术介绍
中存在的问题
。
[0008]为实现以上目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0009]一种青光眼非人灵长类动物模型的构建方法，包括以下步骤：
[0010]A、
对非人灵长类动物的眼球前房注射乳化硅油；
[0011]B、7
‑8周后检测，即构建得到青光眼非人灵长类动物模型
。
[0012]进一步的，所述乳化硅油的直径为4‑
10
μ
m
，粘度为
800mPa.s。
[0013]进一步的，步骤
A
中，所述乳化硅油按质量百分比由：
4.5
％二甲基硅油
、0.027
％油酸
、0.115
％甘油
、0.75
％吐温
20、0.0005
％
EDTA
，余量为超纯水构成
。
[0014]进一步的，本专利技术提供的乳化硅油的制备步骤为：
[0015]S1
：二甲基硅油
、
油酸混合组成油相；甘油
、
吐温
20、EDTA、
超纯水混合组成为水相；
[0016]S2
：两相分别加热
55
‑
65℃
后，将水相少量多次地加入油相中手动搅拌均匀；
[0017]S3
：在高速搅拌下混合高速剪切
10000
‑
20000rpm
，总计时间
10
‑
20
分钟；
[0018]S4
：利用
NaOH
调整乳化硅油的
pH
到
7.5
‑
8.5
；
[0019]S5
：吸走软磷脂所在下层水溶液，加入等体积超纯水，离心分层后再吸走下层；重复
10
‑
15
次后吸走游离的软磷脂，吸走下层水层，留下硅油层作为初乳；
[0020]S6
：观察初乳性状，检测，得硅油滴直径为4‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种青光眼非人灵长类动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、
对非人灵长类动物的眼球前房注射乳化硅油；
B、7
‑8周后检测，即构建得到青光眼非人灵长类动物模型
。2.
根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤
A
中，所述乳化硅油的直径为4‑
10
μ
m
，粘度为
800mPa.s。3.
根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤
A
中，所述乳化硅油按质量百分比由：
4.5
％二甲基硅油
、0.027
％油酸
、0.115
％甘油
、0.75
％吐温
20、0.0005
％
EDTA
，余量为超纯水构成
。4.
根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述乳化硅油的制备步骤为：
S1
：二甲基硅油
、
油酸混合组成油相；甘油
、
吐温
20、EDTA、
超纯水混合组成为水相；
S2
：两相分别加热
55
‑
65℃
后，将水相少量多次地加入油相中手动搅拌均匀；
S3
：在高速搅拌下混合高速剪切
10000
‑
20000rpm

【专利技术属性】
技术研发人员：邓继林，姜华，宋之战，
申请(专利权)人：上海浦灵生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：