自发性早期肺癌小鼠模型及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了自发性早期肺癌小鼠模型及其构建方法和应用，属于动物模型构建技术领域

【技术实现步骤摘要】
自发性早期肺癌小鼠模型及其构建方法和应用


[0001]本专利技术属于动物模型构建
，具体涉及自发性早期肺癌小鼠模型及其构建方法和应用
。

技术介绍

[0002]肺癌是恶性程度最高的肿瘤之一，在世界范围内发病率和死亡率均居高不下，严重危害人们的生命与健康，五年生存率仅为
15
％，早期发现早期治疗是提高肺癌患者生存率的重要手段
。
肺癌的发生是经历早期的非典型增生，原位癌到浸润癌的复杂过程，但是其发生发展的机制尚不明确
。
因此，深入探索肺癌发生的病理机制，是防治肺癌恶性进程
、
提高肺癌患者生存率所亟需解决的关键问题
。
[0003]G
蛋白及其配体组成的
GPCR
超家族可激活
PI3K、MAPK
及离子通道等多种二级信号通路，参与调控一系列的细胞生物学行为，在多种肿瘤的发生中发挥重要作用，
GPCR
及其下游信号通路的异常表达和活化已被证明是肿瘤恶性进程的重要标志
。
近年来许多研究对肺部自发性肿瘤的模型进行了探，但多为浸润性癌模型
。
腺病毒诱导的条件性肺部
Kras G12D
的突变可以诱导早期肺癌非典型腺瘤样增生，但是常同时伴有乳头状腺瘤的存在，而在人体肿瘤常很少同时发生乳头状腺瘤，而且肿瘤的形成和发展程度受到腺病毒数量的影响
。
因此探索一种可以短时间内自发发生早期肺癌的动物模型，对深入研究肺癌从早期的非典型增生至如何逐步发展成浸润性癌的机制，从而寻找肺癌早期诊断的标志物及重要的治疗靶点非常关键
。
因此，亟需找到一种能够短期构建发生早期肺癌小鼠的方法，方便科研人员的对肺癌发生发展机制及药物开发靶点的研究探索
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供自发性早期肺癌小鼠模型及其构建方法和应用，所述自发性早期肺癌小鼠模型可短期内诱发早期肺癌发生，大大拓展了肺部肿瘤科研可利用模型的广度，也节约了科研工作的时间和成本
。
[0005]本专利技术提供了一种自发性早期肺癌小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：将条件性过表达
GNGT1
的小鼠与肺部特异性打靶的
Scgb1a1
‑
Cre
工具鼠进行杂交，
F1代中包含所述自发性早期肺癌小鼠模型
。
[0006]优选的，所述条件性过表达
GNGT1
的小鼠的构建方法，包括将包含过表达
GNGT1
基因的表达框插入到
C57BL/6J
小鼠6号染色体的
Rosa26
基因位点处，得所述条件性过表达
GNGT1
的小鼠
。
[0007]优选的，所述表达框的结构包括
CAG
‑
loxp
‑
stop
‑
loxp
‑
Gngt1
‑
WPRE
‑
pA。
[0008]优选的，肺部特异性打靶的
Scgb1a1
‑
Cre
工具鼠的构建方法，包括在
Scgb1a1
基因终止密码子位点后定点敲入
IRES
‑
Cre
表达框
。
[0009]优选的，所述杂交，包括以条件性过表达
GNGT1
的小鼠为母本，以肺部特异性打靶的
Scgb1a1
‑
Cre
工具鼠为父本
。
[0010]优选的，所述杂交后，还包括对杂交后
F1
代进行筛选，筛选
LSL
‑
GNGT1
和
Scgb1a1
‑
IRES
‑
Cre
双杂合基因型小鼠；
[0011]所述
LSL
‑
GNGT1
杂合，包括利用核苷酸序列如
SEQ ID No.10
和
SEQ ID No.11
所示的引物对，以及
SEQ ID No.12
和
SEQ ID No.13
所示的引物对均能扩增出条带；
[0012]所述
Scgb1a1
‑
IRES
‑
Cre
杂合，包括利用核苷酸序列如
SEQ ID No.18
和
SEQ ID No.19
所示的引物对，以及
SEQ ID No.20
和
SEQ ID No.21
所示的引物对均能扩增出条带
。
[0013]优选的，所述自发性早期肺癌小鼠模型产生肺部上皮非典型增生的时间小于
30d。
[0014]本专利技术还提供利用上述构建方法构建得到的自发性早期肺癌小鼠模型在以下任一用途中的应用；
[0015](1)
研究肺癌发生和发展过程；
[0016](2)
研究肺癌致病机理；
[0017](3)
制备肺癌的早期检测和
/
或诊断工具；
[0018](4)
研制针对肺癌的药物；
[0019](5)
筛选对肺癌有效的药物
。
[0020]有益效果：本专利技术提供了一种自发性早期肺癌小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：将条件性过表达
GNGT1
的小鼠与肺部特异性打靶的
Scgb1a1
‑
Cre
工具鼠进行杂交，
F1代中包含所述自发性早期肺癌小鼠模型
。
本专利技术在肺部特异性过表达
GNGT1
的早期肺癌小鼠模型，经实验表明能够在较短时间内成功构建早期肺癌模型，既能大大加快科研人员的研究进展，节省时间成本，也拓展了肺肿瘤研究的可用模型范围
。
本专利技术提供的自发性早期肺癌小鼠模型重复性高
、
可控性好，是推动肺癌研究进展及最终向临床转化的重要桥梁
。
附图说明
[0021]图1为
C57BL/6J
‑
LSL
‑
GNGT1
条件性过表达小鼠的基因编辑区域示意图；
[0022]Wild type allele
：野生型等位基因；
gRNAregion
：引导
RNA(guide RNA
，简称
[0023]gRNA)
剪切区域；
targeting vector
：目标载体；
targeted allele
：被靶向的等位基因；
targeted allele(Stop removed)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种自发性早期肺癌小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将条件性过表达
GNGT1
的小鼠与肺部特异性打靶的
Scgb1a1
‑
Cre
工具鼠进行杂交，
F1代中包含所述自发性早期肺癌小鼠模型
。2.
根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，所述条件性过表达
GNGT1
的小鼠的构建方法，包括将包含过表达
GNGT1
基因的表达框插入到
C57BL/6J
小鼠6号染色体的
Rosa26
基因位点处，得所述条件性过表达
GNGT1
的小鼠
。3.
根据权利要求2所述构建方法，其特征在于，所述表达框的结构包括
CAG
‑
loxp
‑
stop
‑
loxp
‑
Gngt1
‑
WPRE
‑
pA。4.
根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，肺部特异性打靶的
Scgb1a1
‑
Cre
工具鼠的构建方法，包括在
Scgb1a1
基因终止密码子位点后定点敲入
IRES
‑
Cre
表达框
。5.
根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，所述杂交，包括以条件性过表达
GNGT1
的小鼠为母本，以肺部特异性打靶的
Scgb1a1
‑
Cre
工具鼠为父本
。6.
...

【专利技术属性】
技术研发人员：符达，蒋庚西，范琳琳，马雨水，
申请(专利权)人：药源基石生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：