一种用于检测弓首蛔虫感染的制造技术

本发明专利技术提供了一种用于检测弓首蛔虫感染的

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测弓首蛔虫感染的miRNA标志物、引物、试剂盒及应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，尤其涉及一种用于检测弓首蛔虫感染的
miRNA
标志物
、
引物
、
试剂盒及应用
。

技术介绍

[0002]弓首蛔虫是一种常见于犬
、
猫的消化道寄生线虫，可简单基于粪便中乳白色虫体或粪便学检查虫卵进行诊断
。
弓首蛔虫可以感染人及多种动物，幼虫经历肝
‑
肺移行和神经
‑
肌肉移行阶段，但是不发育为成虫，因此无法通过粪便学检查虫卵进行诊断
。
目前，人感染弓首蛔虫主要基于特异性
IgG
抗体的
ELIS A
检测
。
例如，
Toxocara IgG ELISA Kit(Abnova
，
KA4856)、Toxocara Ig G(RIDASCREEN
，
K7421)
等产品用于定性检测宿主血清样本中弓首蛔虫属
IgG
抗体
。
而
ELISA
检测的缺点是无法区分患病与既往感染
。
此外，肝
‑
肺移行期弓首蛔虫可通过肝
、
肺部组织活检
(PCR
扩增弓首蛔虫的特异性
DNA
片段
)
进行检测，但目前只应用于实验室检测尤其是科学研究，无具体商品化产品
。
[0003]microRNA(miRNA)
是一类长度约为
18
‑
24
个核苷酸的高度保守非编码
R NA
，在外泌体中以稳定的形式存在于多种体液
(
包括血液
、
唾液和尿液
)
，是一类新型的病原
/
疾病特异性潜在标志物
。
由于具有病原
/
组织特异性
、
稳定性
、
可定量的特点，理论上
miRNA
可以用于检测不同的疾病类型，甚至可以用于疾病分期
(
参考文献：
D'Aiuto,F et al.“miR
‑
30e*is an independent s ubtype
‑
specific prognostic marker in breast cancer.”British journal of cancer v ol.113,2(2015):290
‑
8.doi:10.1038/bjc.2015.206)。
例如，通过
qRT
‑
PCR
定量检测
miR
‑
199a
‑
5p
在区分乳腺癌疾病阶段和肿瘤亚型时表现出极高的特异性和灵敏度
(
参考文献：
Shin,V Y et al.“Circulating cell
‑
free miRNAs as bi omarker for triple
‑
negative breast cancer.”British journal of cancer vol.112,11(2015):1751
‑
9.doi:10.1038/bjc.2015.143)。
[0004]弓首蛔虫可以感染人，幼虫经历肝
‑
肺移行和神经
‑
肌肉移行阶段，但是不发育为成虫
、
交配产卵，因此无法通过粪便学检查进行诊断
。
目前，包括人在内的非特异性宿主是否感染弓首蛔虫主要基于特异性
IgG
抗体的
ELISA
检测，但是无法区分患病与既往感染；肺部组织活检
(PCR
扩增弓首蛔虫的特异性
D NA
片段
)
可以用于确诊，但是侵入性大
、
漏检率高且不实用
。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，本专利技术旨在发现新的弓首蛔虫肝
‑
肺移行期弓首蛔虫外泌体
miRNA
靶标分子，并针对性的设计用于检测该靶标分子的引物及试剂盒，以实现快速
、
高效的检测弓首蛔虫感染
。
[0006]一方面，本申请提供了一种用于检测弓首蛔虫感染的
miRNA
标志物，所述
miRNA
标志物选自具有如下碱基序列的
miRNA1、miRNA2
中的至少任意一种：
[0007]miRNA1
：5’‑
UUUUGAUUGUUGCUCAGAGA
‑3’
；
[0008]miRNA2
：5’‑
AUUUAAUGCUCUGGUACAUA
‑3’
。
[0009]在一种实施方式中，所述
miRNA
标志物为
miRNA1
和
miRNA2
的组合
。
[0010]优选的，本申请提供了一种用于检测弓首蛔虫感染的
miRNA
标志物组合，所述
miRNA
标志物组合为具有如下碱基序列的
miRNA1
和
miRNA2
：
[0011]miRNA1
：5’‑
UUUUGAUUGUUGCUCAGAGA
‑3’
；
[0012]miRNA2
：5’‑
AUUUAAUGCUCUGGUACAUA
‑3’
。
[0013]另一方面，本申请提供了一种用于特异性检测所述的
miRNA
标志物的引物，所述引物包括逆转录茎环引物和特异性上游引物，
[0014]所述逆转录茎环引物：
[0015]5’‑
GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACT CTCTG
‑3’
；
[0016]5’‑
GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACT ATGTA
‑3’
；
[0017]所述上游特异性引物：
[0018]5’‑
GCGCGTTTTGATTGTTGCT
‑3’
，
[0019]5’‑
GCGCGATTTAATGCTCTGG
‑3’
。
[0020]优选的，标志物
miRNA1
的逆转录茎环引物为：5’‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于检测弓首蛔虫感染的
miRNA
标志物，其特征在于，所述
mi RNA
标志物选自具有如下碱基序列的
miRNA1、miRNA2
中的至少任意一种：
miRNA1
：5’‑
UUUUGAUUGUUGCUCAGAGA
‑3’
；
miRNA2
：5’‑
AUUUAAUGCUCUGGUACAUA
‑3’
。2.
根据权利要求1所述的用于检测弓首蛔虫感染的
miRNA
标志物，其特征在于，所述
miRNA
标志物为
miRNA1
和
miRNA2
的组合
。3.
一种用于特异性检测如权利要求1或2所述的
miRNA
标志物的引物，其特征在于，所述引物包括逆转录茎环引物和特异性上游引物，所述逆转录茎环引物的序列如下：5’‑
GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACT CTCTG
‑3’
；5’‑
GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACT ATGTA
‑3’
；所述上游特异性引物的序列如下：5’‑
GCGCGTTTTGATTGTTGCT
‑3’
，5’‑
GCGCGATTTAATGCTCTGG
‑3’
。4.
如权利要求1或2所述的
miRNA
标志物，或如权利要求3所述的引物在制备弓首蛔虫感染检测试剂中的应用，所述试剂用于通过检测宿主生物样品中的所述
miRNA
标志物的含量判定是否感染弓首蛔虫
。5.

【专利技术属性】
技术研发人员：马光旭，杨一帆，陈学秋，陈宜，杨怡，杜爱芳，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：