一种基于制造技术

本发明专利技术涉及分子生物学技术领域，尤其涉及一种基于

【技术实现步骤摘要】
一种基于KASP技术鉴别日本鳖种质的SNP标记及其应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，尤其涉及一种基于
KASP
技术鉴别日本鳖种质的
SNP
标记及其应用
。

技术介绍

[0002]日本鳖又称中华鳖日本品系，是浙江省天福生物科技有限公司和水产引育种中心在引进日本原种的基础上经过五代选育形成的水产良种，
2007
年通过全国水产原种和良种审定委员会审定，成为了国家级水产新品种
。
日本鳖的体型优美
、
生长速度快
、
繁殖能力强
、
营养价值丰富，自品系育成之后，浙江省大力推动其苗种生产的引导和扶持，成为了全国重要的日本鳖苗种供应基地，安徽
、
河北
、
广东
、
广西
、
江苏
、
四川
、
湖南
、
江西省等地也已前来引种，具有广阔的发展前景
。
目前，日本鳖的生产性能优良，为了避免种质退化，保种是一项重要工作，因此，有必要建立起日本鳖的种质鉴定标准来指导日本鳖的品系保种和持续选育工作，并为进一步改良和提高生产性能打下基础
。
[0003]目前，水产动物的种质鉴定方法主要围绕表型和遗传型两方面展开，分子标记作为二十世纪八十年代发展起来的第四种重要的遗传标记，其不受样本的生长环境
、
生理状态及年龄的影响，能通过直接检测r/>DNA
分子碱基序列的变异来进行物种的区分
。
[0004]SNP(SingleNucleotidePolymorphism)
又名单核苷酸多态性，属于第三代分子标记，指基因组
DNA
序列上单个碱基出现转换
、
颠换而发生的变异所引起的
DNA
序列多态性，在基因组中分布广
、
遗传稳定性强，检测方法种类丰富，可以实现高通量和自动化，随着测序技术的飞速发展，
SNP
已成为继微卫星之后最具发展前景的分子标记技术，已被广泛应用于种质鉴定当中
。SNP
的检测方法有很多，其中竞争性等位基因特异性
PCR(KASP)
技术是基于终端荧光信号的读取判断来检测
SNP
的双等位基因型，相比于其他检测手段具有操作更简便
、
兼容性更强
、
灵敏度更高等优点，在动植物品种鉴定中广泛应用，然而，在日本鳖的品种鉴定中未见相关研究
。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的是提供一种基于
KASP
技术鉴别日本鳖种质的
SNP
标记及其应用，解决现有日本鳖的种质鉴定较难，灵敏度较低的问题
。
[0006]本专利技术通过以下技术手段解决上述技术问题：
[0007]第一方面，本专利技术提供了一种基于
KASP
技术鉴别日本鳖种质的
SNP
标记，所述
SNP
标记位于核苷酸序列如
SEQ ID NO:1
所示序列的第
217
位
。
[0008]结合第一方面，在一些实施例中，所述
SNP
标记在黄河鳖
、
洞庭鳖
、
黄沙鳖
、
乌鳖
、
长永鳖中的基因型为
CC
，在日本鳖中的基因型为
TT。
[0009]第二方面，本专利技术提供了用于扩增上所述的基于
KASP
技术鉴别日本鳖种质的
SNP
标记的引物组
。
[0010]结合第二方面，在一些实施例中，所述引物组包括：
[0011]第一正向引物，所述第一正向引物的核苷酸序列如
SEQ ID NO:2
所示；
[0012]第二正向引物，所述第二正向引物的核苷酸序列如
SEQ ID NO:3
所示；
[0013]反向引物，所述反向引物的核苷酸序列如
SEQ ID NO:4
所示
。
[0014]第三方面，本专利技术提供了一种试剂，所述试剂中含有如上所述的引物组
。
[0015]第四方面，本专利技术提供了一种试剂盒，所述试剂盒中含有如上述的引物组
。
[0016]第五方面，本专利技术提供了上述引物组或试剂或试剂盒的以下任一应用：
[0017](1)
在鉴定或辅助鉴定日本鳖品种中的应用；
[0018](2)
在日本鳖分子标记辅助育种中的应用；
[0019](3)
在日本鳖育种中的应用；
[0020](4)
在制备日本鳖育种的产品中的应用
。
[0021]第六方面，本专利技术提供了一种日本鳖种质鉴定方法，包括如下步骤：
[0022]S1.
从待检测的样本中提取鳖的裙边组织基因组
DNA
；
[0023]S2.
采用上述引物组对上述
SNP
标记进行
PCR
扩增，得到
PCR
扩增产物，并对
PCR
扩增产物进行荧光信号扫描；
[0024]S3.
根据
PCR
扩增产物的荧光信号分析每个样本分别在所述
SNP
分子标记位点的基因型；
[0025]S4.
得出结论，若所述
SNP
分子标记位点的基因型分别为
TT
，样本为日本鳖，若所述
SNP
分子标记位点的基因型分别为
CC
，样本为黄河鳖
、
洞庭鳖
、
黄沙鳖
、
乌鳖
、
长永鳖中的一种
。
[0026]结合第六方面，在一些实施例中，所述
PCR
扩增的反应体系包括：样本
DNA 5
μ
L、KASP
引物混合物
0.14
μ
L、KASP mix 5
μ
L。
[0027]结合第六方面，在一些实施例中，所述扩增产物进行荧光信号扫描的条件为：温度
37℃
，时间
1min
，1个循环
。
[0028]本专利技术提供了一种基于
KASP
技术鉴别日本鳖种质的
SNP
标记及其应用，通过筛选出具有高质量和高多态性的
SNP
标记，可用于从来源不同的鳖的品种中实现对日本鳖的精准检测，具有广泛的应用普适性
。
而且本专利技术的
SNP
标记为共本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种基于
KASP
技术鉴别日本鳖种质的
SNP
标记，其特征在于，所述
SNP
标记位于核苷酸序列如
SEQ ID NO:1
所示序列的第
217
位
。2.
根据权利要求1所述的一种基于
KASP
技术鉴别日本鳖种质的
SNP
标记，其特征在于，所述
SNP
标记在黄河鳖
、
洞庭鳖
、
黄沙鳖
、
乌鳖
、
长永鳖中的基因型为
CC
，在日本鳖中的基因型为
TT。3.
用于扩增如权利要求1或2中所述的基于
KASP
技术鉴别日本鳖种质的
SNP
标记的引物组
。4.
根据权利要求3所述的引物组，其特征在于，所述引物组包括：第一正向引物，所述第一正向引物的核苷酸序列如
SEQ ID NO:2
所示；第二正向引物，所述第二正向引物的核苷酸序列如
SEQ ID NO:3
所示；反向引物，所述反向引物的核苷酸序列如
SEQ ID NO:4
所示
。5.
一种试剂，其特征在于，所述试剂中含有如权利要求4所述的引物组
。6.
一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有如权利要求4所述的引物组
。7.
根据权利要求3或4所述的引物组或权利要求5所述的试剂或权利要求6所述的试剂盒的以下任一应用：
(1)
在鉴定或辅助鉴定日本鳖品种中的应用；
(2)
在日本鳖分子标记辅助育种中的应用；
(...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡亚洲，梁艺馨，葛玲瑞，王佩，曾丹，秦溱，曾嘉伟，王子奥，王晓清，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：