一种鱼粉中克氏原螯虾源性成分定性和定量鉴定的方法技术

本发明专利技术公开了一种鱼粉中克氏原螯虾源性成分定性和定量鉴定的方法，属于饲料原料检测技术领域

【技术实现步骤摘要】
一种鱼粉中克氏原螯虾源性成分定性和定量鉴定的方法


[0001]本专利技术涉及饲料原料检测
，特别是涉及一种鱼粉中克氏原螯虾源性成分定性和定量鉴定的方法
。

技术介绍

[0002]鱼粉是饲料工业中不可或缺的
、
优质的动物性饲料原料
。
由于鱼粉价格昂贵，市场上掺假鱼粉泛滥，包括在鱼粉中掺入各种动
、
植物原料，从而降低了鱼粉的营养价值，也给鱼粉质量的判断造成了严重困扰
。
目前，鱼粉掺假的鉴定仍以镜检法为主，即通过在显微镜下寻找疑似掺假物的组织，依据组织特征对掺假物进行粗略识别，有时需通过物理和化学方法对识别结果进行补充判定，存在着准确率和灵敏度不高
、
重复性差
、
无法定量
、
依赖个人经验等问题
。
近年来，近红外光谱技术被开发用于识别与标准物有明显差异的物质，来鉴别掺假物，但需先建立鱼粉等原料的近红外定标模型
。
同时，近红外光谱的识别结果易受到如仪器类型
、
测量环境和装样方式等测样条件以及样品状态等因素的影响，从而影响所建模型的效果及其适用性，尚不具有普遍适用性
。
因此，亟需寻求一种简便
、
快捷
、
灵敏
、
准确的掺假鉴定方法
。
[0003]应用实时荧光定量
PCR
检测技术，通过使用针对不同物种线粒体基因设计获得的特异性引物，对目标物种进行鉴定，已广泛应用于加工食品及中药的真伪鉴定
。
利用
PCR
技术鉴定饲料物种组成或原料掺假也有相关研究报道，如意大利研究者利用
PCR
技术检测牛线粒体
DNA
片段以检测动物源性饲料中牛源性成分并对
PCR
产物进行测序确认；美国也建立了运用
PCR
技术，快速检测动物源性饲料中牛源性成分的方法，国内也有关于饲料中牛
、
羊
、
猪
、
鸡
、
马源性成分的检测报道，但对鱼粉中动物源性掺假物的定性和定量鉴定鲜有报道
。
[0004]克氏原螯虾
(Procambarus clarkii)
属于十足目
、
鳌虾科，原产于美国东南部，是最具食用价值的淡水龙虾品种之一
。
我国年产淡水农虾约
4000
吨，其中
70
‑
80
％为克氏原螯虾
。
克氏原螯虾在我国的消费习惯为烹饪后直接食用或制作成虾仁等冷冻水产品
。
其不可食部分或加工下脚料
(
主要是头部和甲壳
)
部分被制成虾粉，作为饲料原料使用
。
在众多鱼粉掺假物中，以克氏原螯虾加工下脚料为原料生产的虾粉是常见的一种
。
目前，尚未见对饲料中克氏原螯虾成分定性或定量鉴定的专利报道
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种鱼粉中克氏原螯虾源性成分定性和定量鉴定的方法，以解决上述现有技术存在的问题，该方法简便快捷，准确性和灵敏度高，能够实现对掺假成分的定性和定量检测
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0007]本专利技术提供一种鱼粉中克氏原螯虾源性成分定性和定量鉴定的引物对，所述引物对为
SEQ ID NO
：1所示的上游引物和
SEQ ID NO
：2所示的下游引物
。
[0008]本专利技术还提供一种鱼粉中克氏原螯虾源性成分定性和定量鉴定的方法，包括以下
步骤：
[0009]以待测鱼粉
DNA
为模板，利用所述的引物对进行荧光定量
PCR
扩增；
[0010]根据荧光定量
PCR
扩增曲线定性或定量鉴定所述待测鱼粉中克氏原螯虾源性成分
。
[0011]优选的是，所述荧光定量
PCR
扩增的反应体系为2×
ChamQ SYBR qPCR Master Mix 10
μ
L
，上游引物1μ
L
，下游引物1μ
L
，
DNA
模板2μ
L
和超纯无菌水6μ
L。
[0012]优选的是，所述荧光定量
PCR
扩增的反应条件为
94℃
预变性
30s
；
94℃10s
，
55℃30s
，
40
个循环
。
[0013]优选的是，定性鉴定的方法为：若出现荧光扩增曲线且
Ct
值
≤35
，待测鱼粉中含有克氏原螯虾源性成分；若无荧光扩增曲线或
Ct
值
≥35
，待测鱼粉中不含克氏原螯虾源性成分
。
[0014]优选的是，定量鉴定的方法为：以克氏原螯虾
DNA
为模板，利用所述引物对制作荧光定量标准曲线；根据所述荧光定量标准曲线，结合所述待测鱼粉
DNA
进行荧光定量
PCR
扩增得到的
Ct
值，计算所述待测鱼粉中克氏原螯虾源性成分的含量
。
[0015]本专利技术还提供所述的引物对在鉴定动物性饲料原料中克氏原螯虾源性成分中的应用
。
[0016]优选的是，所述动物性饲料原料包括鱼粉
。
[0017]本专利技术公开了以下技术效果：
[0018]本专利技术通过绘制克氏原螯虾源性
DNA
荧光定量标准曲线，结合克氏原螯虾特异性荧光引物对，快速定量检测出待测鱼粉中克氏原螯虾源性成分的含量，该方法填补了饲料原料检测
对该物种定性和定量检测方法的空白，准确率和灵敏度高，重复性好，最低检测限可达到
0.01
％，即微量掺假的水平
。
该方法克服了传统检测效果依赖个人经验
、
检测结果具有随机性
、
微量掺假难以识别的问题，同时该方法还适用于其它类动物性饲料原料中克氏原螯虾源性成分的定量检测
。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图
。
[0020]图1为克氏原螯虾特异性引物验证荧光定量
PCR
扩增曲线；
[0021]图2为克氏原螯虾不同本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种鱼粉中克氏原螯虾源性成分定性和定量鉴定的引物对，其特征在于，所述引物对为
SEQ ID NO
：1所示的上游引物和
SEQ ID NO
：2所示的下游引物
。2.
一种鱼粉中克氏原螯虾源性成分定性和定量鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤：以待测鱼粉
DNA
为模板，利用权利要求1所述的引物对进行荧光定量
PCR
扩增；根据荧光定量
PCR
扩增曲线定性或定量鉴定所述待测鱼粉中克氏原螯虾源性成分
。3.
如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述荧光定量
PCR
扩增的反应体系为2×
ChamQ SYBR qPCR Master Mix 10
μ
L
，上游引物1μ
L
，下游引物1μ
L
，
DNA
模板2μ
L
和超纯无菌水6μ
L。4.
如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述荧光定量
PCR
扩增的反应条件为
...

【专利技术属性】
技术研发人员：周萌，梁日深，何浩斌，黄燕华，杨森，阳会军，韦彩妮，赵丹丹，
申请(专利权)人：广州市诚一水产养殖有限公司，
类型：发明
国别省市：