一种耐热型乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞系的诱导培养方法技术

本发明专利技术公开了耐热型的乳腺癌肿瘤相关成纤维的诱导方法，包括以下步骤，将肿瘤相关成纤维细胞培养在6‑

【技术实现步骤摘要】
一种耐热型乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞系的诱导培养方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种耐热型乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞系的诱导培养方法
。

技术介绍

[0002]乳腺癌实体瘤中不仅含有肿瘤细胞，还含有其它诸多成分，如肿瘤相关成纤维细胞
、
肿瘤相关巨噬细胞
、
中性粒细胞
、Treg
细胞和细胞外基质等
。
这些不同类型的细胞和细胞外基质共同组成了肿瘤微环境
。
肿瘤微环境是肿瘤发生免疫抑制
、
耐药
、
侵袭转移的重要原因
。
其中，肿瘤相关纤维细胞作为实体瘤中占比最多的几种细胞类型之一，在肿瘤的各种进程中其发挥的作用是不可忽视的
。
肿瘤发生化疗药物抵抗
、
免疫药物抵抗的过程中，肿瘤相关成纤维细胞也起到了重要作用
。
正常情况下，乳腺癌实体瘤较其他癌种纤维化程度较高
。
因此，乳腺癌发生耐药
、
免疫抑制的过程中，肿瘤相关纤维细胞都是发挥重要作用的
。
[0003]随着技术进步，除了传统的化疗
、
免疫治疗
、
放射治疗等手段，纳米药物
、
纳米探针介导的光热治疗也展现出了较好的抗肿瘤能力
。
光热治疗在肿瘤治疗上的应用拓展了肿瘤治疗的手段，这种治疗手段也能很好的避免肿瘤耐药的发生，且降低了化疗药物给病人带来的毒副损伤
。
但是，光热治疗的实际操作过程中，并不能完全保证肿瘤每一处都能够达到消融肿瘤的最低温度
。
相反，肿瘤相关纤维细胞还能为处于应激状态下的肿瘤细胞提供保护作用和促进其生长
。
并且，相对低的高温会让肿瘤相关纤维细胞逐步适应高温状态，改变肿瘤相关成纤维细胞通路，促进其分泌表皮生长因子等表观的改变
。
这些改变都提高了肿瘤细胞在热消融治疗中的生存能力，最终导致光热消融治疗失败
。
因此，亟需培养一种在体外能抵抗高温
、
具有一定耐热能力的肿瘤相关成纤维细胞，以避免光热治疗失败
。
[0004]技术方案
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：
[0006]一种耐热型乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞的诱导培养方法，包括以下方法：
[0007]S1
：第一天将培养乳腺癌肿瘤相关纤维细胞的六孔板置于水温
37.5
～
38.5℃、
的无菌水浴锅中孵育3～6分钟，孵育结束放回细胞培养箱继续培养；优选的，所述水浴锅水温为
38℃
；优选的，所述孵育时间为5分钟；
[0008]S2
：第二天将六孔板置于
37.5
～
38.5℃
的水浴锅中温浴8～
15
分钟；优选的，所述水浴锅水温为
38℃
；优选的，所述孵育时间为
10
分钟；
[0009]S3
：第三天将六孔板置于
38.5
～
39.5℃
的水浴锅中温浴3～6分钟；优选的，所述水浴锅水温为
39℃
；优选的，所述孵育时间为5分钟；
[0010]S4
：第四天将六孔板置于
38.5
～
39.5℃
的水浴锅中温浴8～
15
分钟；优选的，所述水浴锅水温为
39℃
；优选的，所述孵育时间为
10
分钟；
[0011]S5
：依此类推，直至将孵育条件增加至
46.5
～
47.5℃
孵育8～
15
分钟，并持续加热诱导2～4天后，再间隔3～5天，按此方法孵育所述乳腺癌肿瘤相关纤维细胞直至
90
天以上，即可获得耐热型乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞；优选的，所述孵育温度为
47℃
；优选的，所述
孵育时间为
10
分钟；优选的，加热诱导3天；优选的，间隔时间为4天；
[0012]进一步的，在进行
S1
步骤之前，还包括以下步骤，
S0
：将处于生长对数期的乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞接种于6孔板中，待肿瘤相关纤维细胞贴壁后，进行后续步骤；
附图说明
[0013]图1为本专利技术实施例3的诱导培养过程；
[0014]图2原代乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞与耐热型肿瘤相关成纤维细胞的光学显微镜对比图；
[0015]图3耐热型肿瘤相关纤维细胞与原代肿瘤相关纤维细胞的生长曲线；
[0016]图4耐热型肿瘤相关纤维细胞与原代成纤维细胞蛋白质谱分析
、
基因表达情况和基于差异蛋白的
GO
富集分析；
[0017]图5显示耐热型肿瘤相关成纤维细胞的细胞因子分泌情况；
[0018]图6显示耐热型肿瘤相关纤维细胞的耐热能力；
[0019]图7显示耐热型肿瘤相关纤维的迁移能力；
[0020]图8反映出耐热型肿瘤相关成纤维细胞的促瘤能力
、
热抵抗能力
[0021]有益效果
[0022]本专利技术将乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞培养于六孔板中并置于水浴锅中对其升温加热进行耐热诱导
。
经过逐步增加成纤维细胞的热负荷使成纤维细胞逐步获得对高温具有一定抵抗能力的表型
。
[0023]耐热型肿瘤相关纤维细胞形态上表现为成纤维细胞变粗变大，形态更加饱满；耐热表型上表现为相比正常的肿瘤相关成纤维细胞，耐热肿瘤相关纤维在接受携带有
ICG
的纳米粒子介导的光热治疗后，耐热型肿瘤相关纤维细胞细胞活性更高
。
耐热型肿瘤相关成纤维细胞具有更快的增殖速度和分泌更多的表皮生长因子
。
蛋白表达上显示，耐热型肿瘤相关成纤维细胞的
MAP2K7
表达增高
。
以上变化均显示出耐热型肿瘤相关成纤维细胞在促进乳腺癌快速生长和乳腺癌实体瘤获得耐热抗性上都将发挥重要作用
。
具体实施方式
[0024]实施例1[0025]一种耐热型乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞的诱导培养方法，包括以下方法：
[0026]S0
：将处于生长对数期的乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞接种于6孔板中，待肿瘤相关纤维细胞贴壁后，进行后续步骤；
S1
：第一天将培养乳腺癌肿瘤相关纤维细胞的六孔板置于水温
37.5℃、
的无菌水浴锅中孵育6分钟，孵育结束放回细胞培养箱继续培养；
S2
：第二天将六孔板置于
37.5℃
的水浴锅中温浴
15
分钟；<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种耐热型乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞的诱导培养方法，其特征在于，包括以下方法：
S1
：第一天将培养乳腺癌肿瘤相关纤维细胞的六孔板置于水温
37.5
～
38.5℃、
的无菌水浴锅中孵育3～6分钟，孵育结束放回细胞培养箱继续培养；优选的，所述水浴锅水温为
38℃
；优选的，所述孵育时间为5分钟；
S2
：第二天将六孔板置于
37.5
～
38.5℃
的水浴锅中温浴8～
15
分钟；优选的，所述水浴锅水温为
38℃
；优选的，所述孵育时间为
10
分钟；
S3
：第三天将六孔板置于
38.5
～
39.5℃
的水浴锅中温浴3～6分钟；优选的，所述水浴锅水温为
39℃
；优选的，所述孵育时间为5分钟；
S4
：第四天将六孔板置于
38.5
～

【专利技术属性】
技术研发人员：郑东东，周世崇，张之茗，常才，王世宇，
申请(专利权)人：复旦大学附属肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：