猪丁型冠状病毒制造技术

本发明专利技术以分离得到的优秀的疫苗毒株猪丁型冠状病毒

【技术实现步骤摘要】
猪丁型冠状病毒、猪流行性腹泻二联活疫苗及其制备方法


：
[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种猪丁型冠状病毒
、
猪流行性腹泻二联活疫苗及其制备方法
。

技术介绍

：
[0002]PDCoV(
猪丁型冠状病毒
)
属于套式病毒目
、
冠状病毒科
、
δ
冠状病毒属，是近年来发现的一种新型猪肠道病病原
。
冠状病毒
(Cornavirus
，
CoV)
感染宿主的范围广泛，对自然界生物有极大的威胁性
。CoV
分为甲型
、
乙型
、
丙型
、
丁型四个属，而猪丁型冠状病毒
(porcine deltacoronavirus
，
PDCoV)
属于丁型冠状病毒属，随着
2012
年
PDCoV
首次在猪粪便中检测到后，该病在全球不同地区陆续被发现，部分地区猪群中腹泻病料样品中
PDCoV
阳性率超过
25
％
。PDCoV
可感染各种年龄段的猪群，但对新生仔猪的危害最大，感染率最高，引起的死亡率约为
30
‑
40
％
。
感染仔猪临床表现为水样腹泻
、
呕吐
、
脱水，剖检病理结果显示肠壁变薄，变透明，肠内充斥着大量黄色液体，组织病理学变化主要见于空肠中
、
远端和回肠，十二指肠和空肠近端的病变不明显，病变主要表现为肠绒毛上皮细胞萎缩
、
坏死，同时退化的肠上皮细胞进入管腔
。
[0003]猪流行性腹泻
(Porcine epidemic diarrhea
，
PED)
是由猪流行性腹泻病毒
(Porcine epidemic diarrhea virus
，
PEDV)
引起的高度接触性猪肠道传染病，临床表现为：呕吐
、
腹泻
、
脱水，虽然不同年龄段的猪都可能受到不同程度的感染并出现症状，但仔猪的病情特别严重，致死率高
。2010
年，
PEDV
变异毒株在我国出现，其传播速度快
、
对1周龄内仔猪致死率可达
100
％，给猪场造成严重的经济损失，对我国养猪业的发展构成严重威胁
。PEDV
的高变异性是仔猪腹泻防控的难点，目前临床上，尚无针对
PEDV
的有效药物，主要通过接种灭活苗和弱毒苗进行防控，但存在安全性和有效性低
、
成本高等缺陷，因此，开发高效
、
安全
、
价廉的
PED
疫苗迫在眉睫
。PED
传统疫苗包括灭活疫苗与弱毒疫苗
。PED
灭活疫苗安全
、
稳定，分为
PED
组织灭活苗与
PED
细胞灭活苗，然而，灭活苗始终存在需高剂量免疫的局限，相较之下，弱毒疫苗具有免疫原性好，能够激发宿主原位免疫的优势，弱毒苗不需佐剂且一次免疫即可产生较强免疫力
。
[0004]猪流行性腹泻
、
猪丁型冠状病毒均属于冠状病毒科病毒，抗原形态相似，这两种病毒引起的疾病在流行病学和病理剖检上也极其相似，彼此又没有共同的抗原性，在免疫学和血清学上相互没有交叉反应
。
由此可见，同时防控两种疾病显得尤为重要
。
目前
PEDV、PDCoV
等的混合感染而引起的疾病是全球养猪业的一大问题，对养猪业造成很大的损失
。
新生仔猪免疫系统发育尚未完全，极易受到环境中病原微生物的感染，其中腹泻病毒在哺乳仔猪上的感染率和致死率较高，常表现为仔猪的严重腹泻，脱水及死亡
。
目前的研究指出，来源于母源的被动免疫保护在哺乳仔猪早期抵抗病毒或细菌感染中发挥重要作用
。
母猪在接种疫苗之后，可产生针对
PDCoV
和
PEDV
两种病毒的特异性
IgG
及中和抗体，其中包括
SIgA、IgG
等抗体类型
。
仔猪在吸食初乳和母乳后可获得被动免疫应答，在哺乳仔猪的血清中可检测到高水平的
IgG
及中和抗体
。
其中的抗体可以起到中和病毒的作用，同时可以附着在肠粘
膜上皮细胞表面，免受病毒的感染
。
目前，陕西诺威利华生物科技有限公司已经开展了
PEDV、PDCoV
灭活二联苗的研究，该疫苗已经开展临床申报，相关技术已经获得专利局的专利授权；武汉科前生物也开展了
PEDV、PDCoV
二联活苗的研究
。
然而，目前研究仍较少，远远不能满足市场的需求
。

技术实现思路

：
[0005]为解决以上技术问题，满足
PEDV、PDCoV
二联活苗的市场需求，以及控制相关疫情，提高养殖效益的考虑，本专利技术旨在提供一种猪丁型冠状病毒
、
猪流行性腹泻二联活疫苗及其制备方法
。
[0006]本专利技术具体采用如下技术方案：
[0007]一种猪丁型冠状病毒
、
猪流行性腹泻二联活疫苗，其特征在于，所述二联活疫苗是以猪丁型冠状病毒弱毒毒株
PDCoV
‑
SD
‑
R
株和猪流行性腹泻病毒弱毒株
PEDV
‑
KB
‑4‑
R
株为抗原制备得到，所述猪丁型冠状病毒弱毒毒株
PDCoV
‑
SD
‑
R
株的微生物保藏编号为
CGMCC No.15897
；所述猪流行性腹泻病毒弱毒株
PEDV
‑
KB
‑4‑
R
株的微生物保藏编号为
CGMCC No.15898。
[0008]优选地，每头份所述猪丁型冠状病毒
、
猪流行性腹泻二联活疫苗中含猪丁型冠状病毒和猪流行性腹泻病毒均在
10
5.5
TCID
50
以上
。
[0009]优选地，所述猪丁型冠状病毒
、
猪流行性腹泻二联活疫苗中猪丁型冠状病毒和猪流行性腹泻病毒的毒液按等体积混合得到
。
[0010]所述猪丁型冠状病毒
、
猪流行性腹泻二联活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
[0011]步骤一，制本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种猪丁型冠状病毒
、
猪流行性腹泻二联活疫苗，其特征在于，所述二联活疫苗是以猪丁型冠状病毒弱毒毒株
PDCoV
‑
SD
‑
R
株和猪流行性腹泻病毒弱毒株
PEDV
‑
KB
‑4‑
R
株为抗原制备得到，所述猪丁型冠状病毒弱毒毒株
PDCoV
‑
SD
‑
R
株的微生物保藏编号为
CGMCC No.15897
；所述猪流行性腹泻病毒弱毒株
PEDV
‑
KB
‑4‑
R
株的微生物保藏编号为
CGMCC No.15898。2.
根据权利要求1所述的猪丁型冠状病毒
、
猪流行性腹泻二联活疫苗，其特征在于，每头份所述猪丁型冠状病毒
、
猪流行性腹泻二联活疫苗中含猪丁型冠状病毒和猪流行性腹泻病毒均在
10
5.5
TCID
50
以上
。3.
根据权利要求1所述的猪丁型冠状病毒
、
猪流行性腹泻二联活疫苗，其特征在于，所述猪丁型冠状病毒
、
猪流行性腹泻二联活疫苗中猪丁型冠状病毒和猪流行性腹泻病毒的毒液按等体积混合得到
。4.
根据权利要求1所述的猪丁型冠状病毒
、
猪流行性腹泻二联活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，制苗用病毒液的制备；步骤二，制苗用病毒液半成品检验；步骤三，配苗及分装；步骤四，冻干：分装后迅速经冷冻真空干燥制成疫苗，加盖密封
。5.
根据权利要求4所述的猪丁型冠状病毒
...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈瑞，王璐，张磊，董剑辉，王昆，
申请(专利权)人：武汉华腾济康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：