检测制造技术

本申请提供检测

【技术实现步骤摘要】
检测mRNA加帽效率的前处理方法、试剂盒及应用


[0001]本申请涉及生物
，尤其涉及检测
mRNA
加帽效率的前处理方法
、
试剂盒及应用
。

技术介绍

[0002]信使核糖核酸
(mRNA)
是中心法则中信息的载体，来自
DNA
的信息，通过
mRNA
，传递到细胞质，直接指导蛋白质合成，参与到各项生命活动中
。
在疫苗领域
mRNA
起着举足轻重的地位，同时越来越多基于
mRNA
的基因治疗产品，肿瘤治疗或预防性疫苗产品，以及细胞治疗的
CAR
‑
T/CAR
‑
NK/CAR
‑
巨噬细胞等领域，都逐渐有了
mRNA
应用的身影
。
[0003]目前用于各项应用或研究的
mRNA
，都是采用体外合成的方式生产，在
T7 RNA
聚合酶等酶的作用下，单个的核糖核苷酸以
DN本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种检测
mRNA
加帽效率的前处理方法，其特征在于，包括：探针设计：针对待检测
mRNA
的序列设计探针，所述探针序列包括不位于3’
末端的一个脱氧核糖核苷酸，所述探针序列还包括除所述一个脱氧核糖核苷酸以外，与所述待检测
mRNA
从5’
末端开始碱基互补配对的
15
‑
30
个核糖核苷酸；探针和
mRNA
结合：将所述探针与所述待检测
mRNA
结合，得到复合物；酶切：使用
RNaseH II
酶切割所述复合物，并对切割产物进行纯化回收，得到所述待检测
mRNA
的5’
端小片段
。2.
根据权利要求1所述的检测
mRNA
加帽效率的前处理方法，其特征在于，所述一个脱氧核糖核苷酸位于所述探针的5’
末端
。3.
根据权利要求1所述的检测
mRNA
加帽效率的前处理方法，其特征在于，所述探针的3’
末端标记有生物素
。4.
根据权利要求3所述的检测
mRNA
加帽效率的前处理方法，其特征在于，所述纯化回收采用磁珠法进行，所述磁珠偶联有链霉亲和素
。5.
根据权利要求4所述的检测
mRNA
加帽效率的前处理方法，其特征在于，所述待检测
mRNA
与所述磁珠的用量比为
(150
‑
200pmol)
：
(320
μ
g
‑
400
μ
g)。6.
根据权利要求1所述的检测
mRNA
加帽效率的前处理方法，其特征在于，所述探针和
mRNA
结合的孵育条件为：
95℃
，5‑
10min
；
65℃
，2‑
4min
；
55℃
，2‑
4min
；
40℃
，2‑
4min
；
22℃
，2‑
4min。7.
根据权利要求1所述的检测
mRNA
加帽效率的前处理方法，其特征在于，所述酶切的条件为：
37℃
酶切
1.5h
‑
3h。8.
根据权利要求1所述的检测
mRNA
加帽效率的前处理方法，其特征在于，所述探针
、
所述待检测
mRNA
和所...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯磊，何丽媛，王晨媛，时彦祎，杨心意，王进，
申请(专利权)人：珠海宝锐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：